張明 黃新宇 汪建英 陳欣 徐雁 余曉婷 尹帥 高天巍

肺癌在惡性腫瘤中的發(fā)病率和死亡率均居首位，其中非小細胞肺癌約占全部肺癌的85%[1]。大部分患者發(fā)現(xiàn)時多局部轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移[2]，究其原因復(fù)雜，不僅與腫瘤自身血管生成能力、腫瘤細胞分裂增殖能力、患者營養(yǎng)不良、術(shù)前放化療及手術(shù)操作有關(guān)，也與患者免疫功能紊亂低下腫瘤細胞發(fā)生免疫逃逸有關(guān)[3]。愛帕琳肽（Apelin/APJ）是一種由位于人染色Xq25～26.1 上的APLN 基因產(chǎn)生的多肽，該系統(tǒng)廣泛分布于人體多個組織器官[4]，如心血管、呼吸、神經(jīng)等系統(tǒng)特別是內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞、脂肪細胞，具有重要生理功能，作為新型血管活性因子有促進血管生成作用。在胸腺、脾臟以及CD4+T 淋巴細胞內(nèi)的高表達[5]，說明Apelin 參與淋巴細胞免疫調(diào)控，因此推測Apelin 可能參與腫瘤肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程。本次研究旨在研究非小細胞肺癌患者血漿Apelin 水平在治療前后的變化，探討其與免疫抑制相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年7月至2022 年3月入住浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬杭州市腫瘤醫(yī)院經(jīng)穿刺或手術(shù)病理確診為非小細胞肺癌的部分患者為非小細胞肺癌組，共44 例。納入標(biāo)準為：①符合非小細胞肺癌診斷標(biāo)準；②初發(fā)患者，無其他腫瘤診斷治療史；③患者及家屬接受診療方案，接受治療、觀察和相關(guān)檢查者。排除：①妊娠患者；②中途放棄治療或拒絕配合治療患者；③治療期間死亡者。根據(jù)有無其他部位轉(zhuǎn)移將非小細胞肺癌患者分為無轉(zhuǎn)移組即G1 組21 例，有轉(zhuǎn)移組即G2 組23 例。同期入選健康體檢志愿者20 例為健康志愿組即G3 組。本次研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，并由患者或家屬簽署知情同意書。三組的基線資料比較見表1。三組性別、年齡、體重指數(shù)、序貫器官衰竭評分（sequential organ failure assessment，SOFA）等基線資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。

表1 三組基線資料比較

1.2 方法 根據(jù)非小細胞肺癌、小細胞肺癌和支氣管肺類癌AJCC 分期手冊標(biāo)準，對Ⅰ、ⅡA 患者選擇手術(shù)（胸腔鏡下）或標(biāo)準放療（SBRT）治療方法；對局部晚期的ⅡB、ⅢC 期患者，能手術(shù)的患者選擇手術(shù)（胸腔鏡或傳統(tǒng)方式）加術(shù)后輔助化療或放療，對局部晚期不能手術(shù)的患者予以同步放化療（標(biāo)準方案）；對遠處（腦，骨，腎上腺和胸膜）轉(zhuǎn)移的Ⅳ期G2組患者，若驅(qū)動基因（EGFR、ALK 及ROSI）陽性即采取靶向治療，若驅(qū)動基因陰性患者采用免疫檢查點PD1單克隆抗體抑制劑聯(lián)合化療（紫杉醇或卡鉑）方案；所有入選患者均邀請中醫(yī)腫瘤專家協(xié)助治療。

1.3 檢測指標(biāo) 記錄非小細胞肺癌患者常規(guī)入院后第2 天腫瘤治療前（T1）、腫瘤治療后1 周（T2）及腫瘤治療后1 個月（T3）三個時間點經(jīng)肘靜脈途徑采血，檢查心、肝、腎及甲狀腺和腎上腺功能，淋巴細胞分類計數(shù)，凝血指標(biāo)及肺癌常見腫瘤標(biāo)記物及實驗室放免法測定血漿Apelin 水平。健康志愿者G3組同期靜脈采血。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0 版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差（）表示，兩組間采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，非正態(tài)分布計量資料采用非參數(shù)檢驗。相關(guān)分析采用Pearson 相關(guān)。設(shè)P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組在不同時間點血漿Apelin水平變化見表2

表2 各組血漿Apelin水平在不同時間點水平的變化/pg/ml

由表2 可見，組間比較：在T1時刻，G1 組、G2 組血漿Apelin 水平高于G3 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t 分別=3.99、4.37，P 均＜0.05），且G2組血漿Apelin 水平高于G1組（t=1.68，P＜0.05）；在T2時刻，G1組、G2組血漿Apelin 水平高于G3 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t分別=3.03、3.91，P 均＜0.05），G1 組和G2 組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.34，P＞0.05）；在T3時刻，G1 組血漿Apelin 水平與G3 組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.01，P＞0.05），G2 組血漿Apelin 水平高于G3 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.96，P＜0.05），G1 組和G2 組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.09，P＞0.05）。組內(nèi)比較：G1 組、G2 組血漿Apelin 水平在T1～T3點均逐漸下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F 分別=12.25、15.18，P均＜0.05）。

2.2 三組在T1時間點相關(guān)指標(biāo)比較見表3

表3 三組T1時間點相關(guān)指標(biāo)比較

由表3 可見，在T1時刻，G1 組和G2 組CD3、CD3+CD4+、CD3+CD8+及淋巴細胞總數(shù)均低于G3組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t分別=3.78、2.19、2.91、3.14；4.62、3.46、3.25、3.56，P 均＜0.05）；G1 組和G2 組CD3、CD3+CD4+、CD3+CD8+及淋巴細胞總數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t 分別=1.02、1.16、1.25、1.27，P 均＞0.05）；而G1 組和G2 組腫瘤標(biāo)記物（CYFRA 21-1、癌胚抗原及神經(jīng)元烯醇化酶）水平明顯高于G3 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t 分別=3.84、3.65、3.49；3.93、4.08、4.25，P均＜0.05），G1 組和G2 組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（t分別=1.32、1.21、1.03，P均＞0.05）。

2.3 治療前非小細胞肺癌患者（G1 組及G2 組）血漿Apelin水平與淋巴細胞亞群及血腫瘤標(biāo)記物水平相關(guān)性 非小細胞肺癌患者血漿Apelin 水平與CD3、CD3+CD4+計數(shù)呈負相關(guān)（r 分別=-0.53、-0.47，P＜0.05）；與腫瘤標(biāo)記物包括CYFRA 21-1、癌胚抗原及神經(jīng)元烯醇化酶無明顯相關(guān)性（r 分別=-0.17、0.21、0.19，P＞0.05）。

3 討論

Apelin 是一種新的血管生成因子，能促進血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移，外源性Apelin 都具有促進血管生成的作用，并且用Apelin 抑制劑能有效抑制血管生成。近年來隨著研究的深入，Apelin 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6]。Sorli 等[7]用DNA 微陣列方法檢測154個相互配對的腫瘤和正常組織Apelin 的表達后發(fā)現(xiàn)，Apelin 基因在1/3 的人類腫瘤中的表達明顯上調(diào)。在乳腺導(dǎo)管癌[8]、前列腺癌[9]、婦科腫瘤和頭頸部腫瘤[10，11]的相關(guān)研究中均發(fā)現(xiàn)患者血清Apelin 的含量有不同程度改變。目前，有關(guān)Apelin在肺癌患者的水平、是否參與非小細胞肺癌生成轉(zhuǎn)移、其水平的高低是否與免疫狀態(tài)相關(guān)的研究不多。本研究發(fā)現(xiàn)，非小細胞肺癌患者血漿Apelin 水平升高，轉(zhuǎn)移患者升高更明顯，經(jīng)治療后腫瘤負荷下降，血漿Apelin水平不同程度下降，這一研究結(jié)果真正的機理尚不明確，推測可能是因為Apelin 作為新型血管生成因子，促進腫瘤細胞組織中新生血管形成，從而提供大量營養(yǎng)底物導(dǎo)致腫瘤細胞組織擴大增殖。與本次研究結(jié)果相類似，Berta 等[12]采用人非小細胞肺癌細胞異種移植到免疫缺陷小鼠的方法檢測Apelin 對小鼠體內(nèi)腫瘤生長的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Apelin 過表達的肺癌細胞顯著加快小鼠腫瘤的生長，CD31 染色標(biāo)記后發(fā)現(xiàn)Apelin 過表達增加了腫瘤微血管密度和微血管周長，提示Apelin 參與了腫瘤血管的生成。

本研究發(fā)現(xiàn)非小細胞肺癌患者血漿Apelin水平越高，患者淋巴細胞亞群中總T 細胞（CD3）計數(shù)越低，輔助/誘導(dǎo)T 細胞（CD3+CD4+）計數(shù)也越低，兩者有明顯的負相關(guān)性，提示Apelin 與腫瘤免疫有關(guān)。其機制尚不清，可能是CD4+輔助T 細胞、CD8+細胞毒T 淋巴細胞在細胞因子刺激下分化成熟，在γ 干擾素、白介素-2 誘導(dǎo)生成細胞毒性T 淋巴細胞和活化NK 細胞等方式增強殺傷腫瘤細胞；其中的T 輔助細胞2（Th2）可抑制Th1 誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)，導(dǎo)致細胞毒性T 淋巴細胞功能及自然殺傷細胞活性下調(diào)而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移[5]。Apelin 可能與免疫細胞驅(qū)動定位有關(guān)[13]，抑制干擾素、白介素的產(chǎn)生參與免疫調(diào)節(jié)等炎癥反應(yīng)病理生理過程。通過接觸或分泌細胞因子的方式抑制效應(yīng)T 淋巴細胞的免疫功能[7]。

綜上所述，非小細胞肺癌患者血漿Apelin 水平高，轉(zhuǎn)移患者升高明顯，經(jīng)治療后降低；血漿Apelin水平變化與腫瘤轉(zhuǎn)移病變及患者免疫功能狀態(tài)有關(guān)。提示Apelin 在非小細胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能扮演重要角色，其真正的機制有待深入研究。