楊雅樓 何明欣 李 瓏 胡 璇

1.海南醫(yī)學(xué)院(?？?，571199)；2.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院；3.湖北省天門市第一人民醫(yī)院

宮頸癌為女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤疾病，臨床對(duì)圍絕經(jīng)期宮頸癌變患者多采用根治術(shù)，術(shù)后予以放/化療輔助治療，但仍存在部分患者病情不穩(wěn)定導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)。探尋有效的腫瘤標(biāo)志物對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行有效評(píng)估至關(guān)重要[1]。宮頸癌變細(xì)胞增殖、遷移導(dǎo)致惡性腫瘤復(fù)發(fā)這一過(guò)程中存在多種腫瘤標(biāo)志物的異常表達(dá)，臨床上腫瘤標(biāo)志物較多且尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，探尋并明確腫瘤標(biāo)志物對(duì)術(shù)后復(fù)診監(jiān)測(cè)及提升預(yù)后評(píng)估準(zhǔn)確度臨床意義重大[2]。近年來(lái)相關(guān)研究顯示，腫瘤異常糖鏈糖蛋白(TAP)與腫瘤發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)，細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)對(duì)腫瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的黏附具有較高的介導(dǎo)效用，提示其對(duì)腫瘤癌變細(xì)胞的增殖、遷移活性提升具有促進(jìn)作用，但二者在腹腔鏡宮頸癌根治術(shù)后評(píng)估復(fù)發(fā)應(yīng)用較少[3-4]。人乳頭瘤病毒(HPV)尤其是高危型檢測(cè)在子宮頸疾病篩查中有較高預(yù)測(cè)價(jià)值[5]。為進(jìn)一步明確宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的有效腫瘤標(biāo)志物，本研究通過(guò)檢測(cè)腹腔鏡宮頸癌根治術(shù)患者血清TAP、ICAM-1及HPV指標(biāo)，術(shù)后隨訪1年，監(jiān)測(cè)各指標(biāo)水平變化對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的影響機(jī)制，為臨床評(píng)估術(shù)后復(fù)發(fā)提供新的腫瘤標(biāo)志物選擇。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月-2021年1月入本院接受宮頸癌根治術(shù)治療的圍絕經(jīng)期患者132例納入宮頸癌組，接受婦科檢查的健康女性77例納入健康對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸癌患者術(shù)前經(jīng)臨床病理診斷后符合宮頸癌變?cè)\斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②臨床病理資料完整；③均接受宮頸癌根治術(shù)，同意并配合本研究調(diào)查及隨訪工作直至研究結(jié)束；④術(shù)后定期入院復(fù)查并接受外周血TAP、HPV、ICAM-1指標(biāo)檢測(cè)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤疾?。虎贖PV疫苗接種；③癌變臨床分期為IIb期及以上；④術(shù)前因各種原因中途退出本研究。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審批，納入對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1調(diào)查方法對(duì)納入本研究的所有宮頸癌患者進(jìn)行為期1年隨訪調(diào)查，檢測(cè)外周血TAP、ICAM-1及陰道分泌物HPV，隨訪期間若確診患者復(fù)發(fā)立即停止檢測(cè)。

1.2.2血清TAP檢測(cè)對(duì)照組于入組后完成血清TAP指標(biāo)檢測(cè)，宮頸癌組患者于術(shù)前、術(shù)后出院時(shí)及術(shù)后12個(gè)月內(nèi)入院復(fù)查時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。取受檢人員食指末端梢血兩滴置于兩片涂片上，風(fēng)干后利用TAP檢測(cè)試劑均勻間隔相同滴入兩片涂片上，加凝聚助劑干燥，做成血液標(biāo)本即表面有圓形斑點(diǎn)，利用生物顯微鏡、攝像機(jī)圖像傳感器、計(jì)算機(jī)TAP檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行觀察和檢測(cè)TAP聚物面積。

1.2.3HPV檢測(cè)受檢者膀胱截石位，常規(guī)收集陰道分泌物，采用Cobas HPV檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，采用聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增和熒光檢測(cè)技術(shù)，由?？萍夹g(shù)人員嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書處理標(biāo)本提取DNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增并判定結(jié)果。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照作為質(zhì)量控制。對(duì)照組人員于入組后完成陰道分泌物HPV標(biāo)本檢測(cè)，宮頸癌組于術(shù)前、術(shù)后3個(gè)月及術(shù)后12個(gè)月內(nèi)入院復(fù)查時(shí)完成陰道分泌物HPV檢測(cè)。

1.2.4ICAM-1指標(biāo)檢測(cè)對(duì)照組入組后取空腹靜脈血離心分離上清，置ICAM-1酶標(biāo)板上，加待測(cè)標(biāo)本40μg，充分混勻后放置于37℃室溫環(huán)境，45 min后洗滌并加抗體工作液，加底物工作液40μg，置于37℃暗處反應(yīng)15 min，加終止液混勻；450 nm處測(cè)吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每管組織液中ICAM-1水平，所有標(biāo)本采用雙孔檢測(cè)，數(shù)值采取復(fù)孔均值。宮頸癌組于術(shù)前、術(shù)后出院時(shí)及術(shù)后12個(gè)月內(nèi)入院復(fù)查時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，檢驗(yàn)步驟均同上。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比宮頸癌組術(shù)前及對(duì)照組各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)水平；分析宮頸癌組術(shù)后復(fù)發(fā)情況并對(duì)比臨床資料，對(duì)比復(fù)發(fā)組及未復(fù)發(fā)組各時(shí)間段指標(biāo)檢測(cè)水平；分析外周血TAP、HPV、ICAM-1檢測(cè)診斷效能，各指標(biāo)水平與圍絕經(jīng)期宮頸癌變患者預(yù)后的相關(guān)性。

1.4 評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

手術(shù)后復(fù)發(fā)指宮頸癌經(jīng)手術(shù)徹底切除，手術(shù)標(biāo)本切緣無(wú)腫瘤，術(shù)后1年內(nèi)出現(xiàn)新發(fā)腫瘤，且與原腫瘤細(xì)胞一致，最終確診依據(jù)為病理組織學(xué)，若無(wú)法行病理診斷則為PET/CT等影像學(xué)檢查共同診斷[7]。按部位復(fù)發(fā)分為中心性復(fù)發(fā)(包括宮頸、陰道或?qū)m體)，宮旁復(fù)發(fā)(包括盆壁)，中心性復(fù)發(fā)和宮旁復(fù)發(fā)統(tǒng)稱為盆腔復(fù)發(fā)；遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)(或轉(zhuǎn)移)指盆腔外全身不同部位的腫瘤轉(zhuǎn)移(包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、腦轉(zhuǎn)移等)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床基線資料

對(duì)照組患者年齡(47.0±3.7)歲(40～55歲)，體質(zhì)指數(shù)(BMI)(21.7±2.6)kg/m2(18.6～26.8kg/m2)；宮頸癌組年齡(46.7±3.9)歲(43～54歲)，BMI(21.6±2.5)kg/m2(18.4～27.1kg/m2)。兩組對(duì)比無(wú)差異(t=-0.533、-0.300，P=0.594、0.764)。

2.2 兩組各指標(biāo)檢測(cè)水平

宮頸癌組血清TAP、ICAM-1水平及高危型HPV陽(yáng)性率均高于對(duì)照組(均P<0.001)。見表1。

表1 術(shù)前兩組各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)水平對(duì)比

2.3 宮頸癌組術(shù)后1年復(fù)發(fā)情況

隨訪1年，統(tǒng)計(jì)圍絕經(jīng)期宮頸癌患者預(yù)后情況，分為復(fù)發(fā)組(37例)及未復(fù)發(fā)組(95例)，兩組臨床基線資料對(duì)比未見差異(P>0.05)。見表2。

表2 宮頸癌術(shù)后1年不同預(yù)后患者臨床基線資料對(duì)比

2.4 宮頸癌組術(shù)后不同時(shí)期隨訪指標(biāo)檢測(cè)水平

血清TAP、ICAM水平及高危型HPV陽(yáng)性率，術(shù)前、術(shù)后3個(gè)月復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組未見差異(均P>0.05)；術(shù)后12個(gè)月，復(fù)發(fā)組均高于術(shù)后3個(gè)月，未復(fù)發(fā)組均低于術(shù)前及術(shù)后3個(gè)月，且復(fù)發(fā)組各指標(biāo)水平均高于未復(fù)發(fā)組(均P<0.001)。見表3。

表3 兩組不同時(shí)期各指標(biāo)檢測(cè)水平對(duì)比

2.5 外周血TAP、ICAM-1及HPV預(yù)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)效能

ROC曲線分析顯示，血清TAP、ICAM-1及HPV聯(lián)合檢測(cè)曲線下面積(AUC)高于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。見表4。

表4 TAP、ICAM-1、HPV預(yù)測(cè)宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)價(jià)值

2.6 TAP、ICAM-1、HPV與圍絕經(jīng)期宮頸癌變患者手術(shù)預(yù)后的相關(guān)性

Spearman相關(guān)系數(shù)分析顯示，TAP、ICAM-1水平及高危型HPV陽(yáng)性率與患者手術(shù)預(yù)后均呈正相關(guān)(r=0.788、0.728、0.748，均P<0.001)。

3 討論

臨床數(shù)據(jù)表明，宮頸癌患者接受手術(shù)治療后5年內(nèi)再?gòu)?fù)發(fā)率為15%，術(shù)后復(fù)發(fā)是導(dǎo)致患者死亡率上升的重要危險(xiǎn)因素，而復(fù)發(fā)的重要機(jī)制及臨床特征為惡性腫瘤細(xì)胞增殖并遷移，術(shù)后復(fù)發(fā)是導(dǎo)致宮頸癌患者死亡的重要原因[8]。臨床中雖然對(duì)宮頸癌術(shù)式進(jìn)行不斷改良，使其趨向操作簡(jiǎn)單化、微創(chuàng)化發(fā)展，臨床療效也得到有效提升，但對(duì)患者而言，體內(nèi)存在的癌變細(xì)胞已喪失正常細(xì)胞形態(tài)及功能，具有難以抑制和易轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，且多數(shù)患者就診較晚，手術(shù)治療后仍會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)現(xiàn)象。尋找有效的預(yù)測(cè)和診斷標(biāo)志物，對(duì)術(shù)后早期預(yù)警尤為重要[9-10]。

本研究結(jié)果顯示，圍絕經(jīng)期宮頸癌變患者術(shù)前TAP、ICAM-1水平及高危型HPV陽(yáng)性率均呈水平異常升高，術(shù)后出院時(shí)均明顯降低水平趨向正常，而1年隨訪中，復(fù)發(fā)患者各指標(biāo)水平與未復(fù)發(fā)患者存在明顯差異，提示TAP、ICAM-1及高危型HPV陽(yáng)性率與宮頸癌變發(fā)生發(fā)展有關(guān)。分析可能機(jī)制：TAP是惡性腫瘤患者機(jī)體中癌細(xì)胞進(jìn)行新陳代謝所排放的一類異常糖蛋白與鈣-組蛋白的復(fù)合物，患者體內(nèi)正常細(xì)胞在癌變過(guò)程中，細(xì)胞膜表面的聚糖結(jié)構(gòu)受其影響而導(dǎo)致分支增加，這一過(guò)程誘導(dǎo)TAP大量釋放，因而宮頸癌變術(shù)后復(fù)發(fā)患者TAP指標(biāo)異常升高，楊雙祥等[11]研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。細(xì)胞黏附分子(CAM)泛指一類調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互結(jié)合和起黏附作用的膜表面糖蛋白，目前發(fā)現(xiàn)有ICAM-1、ICAM-2和ICAM-3[12]。國(guó)內(nèi)一項(xiàng)關(guān)于宮頸癌變機(jī)制的研究顯示，宮頸癌的原發(fā)灶及淋巴轉(zhuǎn)移灶中檢測(cè)到 ICAM-1 表達(dá)，轉(zhuǎn)移灶中 ICAM-1表達(dá)明顯高于原發(fā)灶，分析原因可能 ICAM-1能與淋巴細(xì)胞功能相關(guān)蛋白結(jié)合，從而參與機(jī)體免疫、炎癥及腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移等過(guò)程[13]。HPV是臨床已知能夠?qū)е聦m頸癌發(fā)生的重要因素之一，已感染病毒的患者若不及時(shí)采取積極有效的治療方案，很有可能導(dǎo)致病毒進(jìn)一步發(fā)展，進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌變，甚至出現(xiàn)浸潤(rùn)瘤[14]。HPV病毒的感染方式具有多樣性。相關(guān)研究表明，宮頸炎的發(fā)生與HPV的感染率關(guān)系較低，而宮頸癌變發(fā)生受HPV的感染率影響較高，可見，宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)與HPV感染也具有相關(guān)性[15]。本研究對(duì)宮頸癌根治術(shù)患者隨訪觀察，明確根治術(shù)能夠有效切除患者的腫瘤病灶，有效抑制了宮頸癌細(xì)胞的進(jìn)一步分化，避免了癌細(xì)胞嚴(yán)重惡化，減少患者體內(nèi)TAP、ICAM-1、HPV等產(chǎn)生。ROC曲線分析，3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)患者術(shù)后復(fù)發(fā)有較高效用，且3項(xiàng)指標(biāo)與患者預(yù)后均密切相關(guān)，表明腹腔鏡宮頸癌根治術(shù)后監(jiān)測(cè)TAP、ICAM-1、高危型HPV等指標(biāo)對(duì)評(píng)估患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)具有重要參考價(jià)值。

綜上所述，腹腔鏡宮頸癌根治術(shù)后患者，聯(lián)合TAP、ICAM-1、高危型HPV可提高疾病復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)效能，以盡早預(yù)后評(píng)估并對(duì)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)做出針對(duì)性處理，提高宮頸癌患者的術(shù)后生存率。