周海文 程欣宇 魏 濤 鄭 一 李鳴鶴

食管癌是惡性腫瘤中病死率較高的惡性腫瘤[1-2]。多西他賽+順鉑化療方案(TP)是目前臨床治療食管癌的基礎化療方案[3-4]。放射治療是食管癌的有效治療方式之一，但單獨采用放射治療的效果不理想。目前有研究[5]提示，TP方案聯(lián)合放療能夠有效提高食管癌療效、延長患者壽命，減輕不良反應，但有關TP方案聯(lián)合放療提高食管癌療效的可能機制少有報道。為此，本文以80例食管癌患者為研究對象，通過隨機對照研究，探討TP聯(lián)合放射治療食管癌的療效及其對miR-802、Smad4及食管黏膜組織黏蛋白1表達的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2019年12月安陽市腫瘤醫(yī)院收治的食管癌患者80例，其中男性39例，女性41例；年齡65～72歲，平均(67.00±2.50)歲；病程48～71周，平均(59.50±9.20)周；腫瘤發(fā)生部位：胸中段27例，頸段及胸上段30例，胸下段23例；臨床分期[6]：Ⅲ期35例，Ⅳ期25例。按照隨機數(shù)字表法，將患者隨機分為對照組和觀察組，各40例。兩組患者的年齡、性別、病程、發(fā)病部位、臨床分期等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。納入標準：①所有患者均符合《實用腫瘤內(nèi)科學》[7]中食管癌的診斷標準；②未進行過TP和放射治療者；③無病灶轉移者；④患者均為成年人；⑤患者及家屬對本研究均知情同意并簽署知情同意書。排除標準：①合并有嚴重腎臟損傷者；②合并有自身免疫功能疾病者；③不能配合治療者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理會批準通過[批準文號：(2018)倫審第(52)號]。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 常規(guī)治療 兩組患者治療期間每周查血常規(guī)及肝腎功能，出現(xiàn)Ⅱ度及以上中性粒細胞下降時予重組人粒細胞集落刺激因子升白細胞，出現(xiàn)Ⅱ度及以上血小板減少時予重組人白細胞介素-11或重組人血小板生成素升血小板。給予患者常規(guī)利尿、水化、止吐、保護胃黏膜等對癥處理。

1.2.2 對照組 對照組患者給予放射治療。操作方法：患者取仰臥姿態(tài)，使用螺旋CT模擬機，對患者腫瘤部位進行定位。根據(jù)圖像，對患者靶區(qū)進行勾畫，GTV為患者并病變范圍，向病變范圍外進行擴放，在前后左右各向外擴0.4～0.7 cm、再向上外擴3 cm，向下外擴4 cm為CTV，將CTV進行均勻外放0.5 cm稱為PTV。患者均使用6MV-X射線行三維適形調強放療進行放療，放射劑量為50-64 GY。

1.2.3 觀察組 觀察組在對照組的基礎上聯(lián)合TP方案治療。TP治療方法：在放療期間進行靜脈滴注多西他賽(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準字：H20020543，規(guī)格：20毫克/支)，使用劑量75 mg/m2，治療2 d后，肌肉注射順鉑[齊魯制藥(海南)有限公司，國藥準字：H20073652，規(guī)格：10毫克/支]，使用劑量20 mg/m2。連續(xù)治療2個療程(1個療程為7 d)。

1.2.4 觀察指標及判定標準 治療2個療程后，觀察并比較兩組患者臨床療效、不良反應發(fā)生率，miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1表達水平和CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平的變化情況。①臨床療效。依據(jù)實體瘤療效評價標準[8](response evaluation criteria in solid tumors，RECIST)進行評價：完全緩解(complete response，CR)為患者腫瘤部位消失，并且持續(xù)4周以上；部分緩解(partial response，PR)為腫瘤比治療前縮小比例大于30%；客觀緩解率(objective response rate， ORR),ORR=(CR+PR)例數(shù)/總病例數(shù)×100%。②不良反應發(fā)生率。治療2個療程過程中統(tǒng)計兩組脫發(fā)、食欲不振、身體乏力、頭痛不良反應發(fā)生情況。不良反應發(fā)生率=發(fā)生不良反應例數(shù)/總例數(shù)×100%。③食管黏膜組織黏蛋白1、Smad4水平。采用酶聯(lián)免疫實驗法檢測，試劑盒購自上海美軒生物科技有限公司，操作過程嚴格按照說明書進行。顯色后使用酶標儀比色讀數(shù)，并計算出食管黏膜組織黏蛋白1、Smad4表達量。④T淋巴細胞亞群指標。采用流式細胞儀對兩組患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平進行檢測。⑤miR-802水平。應用熒光定量PCR法檢測miR-802水平，采用Trizol(北京恩碩科技有限公司)提取總RNA，SYBR Green RCR master mix 試劑為北京恩碩科技有限公司。其中miR-802以U6為內(nèi)參基因，miR-802正向引物：5’-ACCTGAAAGCGAAAGGGAAAC-3’，反向引物：5’-CACCCATCTCCTCCTTCTAGCC-3’；U6正向引物：5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’，反向引物：5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’，反應體系共為20 μL，每個樣品3個生物學重復，熒光定量PCR儀反應，設定：95 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，72 ℃ 15 s，共42個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。采用2-ΔΔCt算法計算 miR-802的相對表達量。按照反轉錄試劑盒(北京天根生化科技有限公司)操作步驟，將2 μg RNA反轉錄為cDNA。

2 結果

2.1 兩組患者ORR比較 治療2個療程后，觀察組患者的ORR高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者ORR比較

2.2 兩組患者不良反應率比較 治療后，觀察組不良反應總發(fā)生率(62.50%)高于對照組(60.00%)，但差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.053,P=0.818)。見表2。

表2 兩組患者不良反應發(fā)生情況比較(例)

2.3 兩組患者腫瘤標志物表達量比較 治療后，觀察組患者的miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1表達量均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組miR-802、Smad4及食管黏膜組織黏蛋白1表達量比較

2.4 兩組患者T淋巴細胞亞群水平比較 觀察組患者CD4+、CD4+/CD8+水平均高于對照組，CD8+水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 兩組患者T淋巴細胞亞群水平比較

3 討論

食管癌具有發(fā)病率高、易轉移、易復發(fā)、治療難度大等特點，早期癥狀不典型，大多數(shù)患者就診時已失去手術機會。對中晚期食管癌，以放療、化療為主[9]。放療作為一種有效治療本病的方法，其敏感性高，但復發(fā)率較高，副作用較強[10]。而采用TP方案聯(lián)合放療的療效要高于單純放療[11]，TP具有較高的抗腫瘤的活性，有效發(fā)揮干擾細胞生長和分裂等功能，誘導腫瘤細胞死亡。本文探討TP方案+放射治療對食管癌患者miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1表達的影響，旨為該治療方案有效的可能機制提高參考依據(jù)。

本組資料顯示，治療2個療程后，觀察組ORR明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且兩組不良反應率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，表明TP聯(lián)合放射治療食管癌可顯著提高臨床療效，且不增加副作用。與魏磊等[12]研究結果較為一致。

TP方案抗腫瘤活性高,對各種實體瘤具有廣泛的細胞毒性作用，能夠導致細胞死亡。放療可以通過激活人體的免疫系統(tǒng)從而達到抵抗腫瘤的作用[13]。miR-802作為一種非編碼的小RNA分子，其可通過調控患者下游基因表達，參與腫瘤的形成和代謝，miR-802作為抑癌基因，在食道癌細胞的增殖和遷移過程中miR-802的高表達可以發(fā)揮抑制癌細胞的作用[14]。Smad4作為Smad家族蛋白中的一員，在信號傳導的過程中起到了重要的作用。Smad4作為一種腫瘤抑制基因，其表達水平與食道癌中癌細胞的發(fā)生發(fā)展相關，Smad4高表達可以抑制食道癌細胞的發(fā)生[15]。而食管黏膜組織黏蛋白1作為患者食管黏膜組織中一類高分子量糖蛋白，能夠對細胞組織起到一定的保護作用，參與了信息傳導通路的調節(jié)功能[16]。食管黏膜組織黏蛋白1蛋白結構主要由MUC-N和MUC-C亞基構成，食管黏膜組織黏蛋白1的過表達可以降低食道癌細胞的粘附作用，抑制癌細胞的侵襲[17]。TP方案聯(lián)合放療在抵抗食管癌細胞過程中蛋白信號通路會被激活，miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1會通過蛋白信號通路參與抑制食管癌細胞的增殖和遷移，從而導致miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1水平增加[18]?；诖?本研究中對患者的miR-802、Smad4水平進行了檢測，研究結果發(fā)現(xiàn)，觀察組miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1表達量均顯著高于對照組(P<0.05)，表明TP聯(lián)合放射治療可提高食管癌患者的miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1表達量，且效果顯著。

CD4+、CD8+、CD4+/CD8+在臨床上通常用來診斷患者細胞免疫功能，能夠對食管癌患者起到輔助診斷的作用[19]。采用TP方案聯(lián)合放療可以促進抗原釋放刺激淋巴細胞，進而激活淋巴細胞，使其參與抗癌活動，故能夠有效提高T淋巴細胞亞群水平使患者免疫功能得到有效提高。因此，本文研究中對患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平進行了檢測，發(fā)現(xiàn)觀察組患者CD4+、CD4+/CD8+水平高于對照組，CD8+水平低于對照組，表明使用TP聯(lián)合放療對食管癌患者進行治療，能夠改善患者免疫能力。

綜上所述，TP聯(lián)合放射治療食管癌療效顯著，該治療方案能夠調控患者體內(nèi)miR-802、Smad4、食管黏膜組織黏蛋白1表達水平，增強免疫能力。