喬永志，梁麗亞，馮 銳

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050000；2.石藥集團歐意藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050000）

馬來酸左氨氯地平屬1，4-二氫吡啶類鈣拮抗劑［1］，于1999年在全球上市，且為我國1.3類創(chuàng)新藥，其降壓作用持久，臨床療效較穩(wěn)定、確切［2-3］，藥品不良反應(yīng)輕微，使用方便。與第一代鈣離子通道阻滯劑（如硝苯地平）相比，其具有生物半衰期長、降壓平穩(wěn)等優(yōu)點［4-5］。目前，馬來酸左氨氯地平在合成過程中會產(chǎn)生9種雜質(zhì)，其中天冬氨酸氨氯地平為主要雜質(zhì)，其余為未知雜質(zhì)，含量甚微［6］。由于天冬氨酸氨氯地平是一種僅伴隨氨氯地平合成而出現(xiàn)的馬來酸副產(chǎn)物［7］，市售稀少，試驗數(shù)據(jù)缺乏。為此，本研究旨在建立一種天冬氨酸氨氯地平的合成工藝，以完善馬來酸左氨氯地平的特有雜質(zhì)檔案，并為藥品質(zhì)量控制提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：LC-10A型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；YRT-3型熔點測定儀（上海楚工實業(yè)有限公司）；DZF-6030A型真空干燥箱（上海申賢恒溫設(shè)備廠）；JJJ1000型電子天平（常熟市雙節(jié)測試儀器廠）。

試藥：馬來酸左氨氯地平（按專利［8］方法自制）；左氨氯地平堿（常州瑞明藥業(yè)有限公司，批號為20200518）；馬來酸（工業(yè)級，湖北如天生物工程有限公司，批號為20200705）；異丙醇、三乙胺、二氯甲烷、無水硫酸鈉、乙酸乙酯均為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 合成路線

路線見圖1。

圖1 天冬氨酸氨氯地平合成路線Fig.1 Synthetic route of amlodipine aspartate

2.2 樣品制備

取左氨氯地平堿14.3 g，三乙胺7.08 g，精密稱定，精密量取異丙醇115 mL，均置于同一四口瓶中，升溫回流，待料液溶清后，滴加混合溶液（馬來酸4.06 g+異丙醇28 mL），滴畢保溫反應(yīng)8 h，減壓濃縮得油狀物；加入二氯甲烷300 mL使溶解，并滴加20%氫氧化鈉溶液調(diào)pH至14，靜置分層，保留水層，將水層pH調(diào)至2，加入二氯甲烷250 mL，攪拌后靜置，收集二氯甲烷層，將水層用二氯甲烷200 mL萃取后，并入已收集的二氯甲烷層，加無水硫酸鈉20 g，脫水，濾過，減壓濃縮濾液，得黃褐色油狀物8.04 g，將油狀物放入真空干燥箱（40℃，0.095 MPa）干燥，得黃褐色固體。將黃褐色固體用乙酸乙酯重結(jié)晶，得類白色固體（熔點為179～183℃），即得天冬氨酸氨氯地平樣品。

2.3 雜質(zhì)定位

2.3.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-0.7%三乙胺溶液（35∶15∶50，V/V/V，pH 3.0）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：237 nm；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。

2.3.2 溶液制備

取馬來酸左氨氯地平適量，加入2.3.1項下流動相（下同）適量，溶解并稀釋制成每1 mL中含1 mg的馬來酸左氨氯地平供試品溶液。取2.2項下天冬氨酸氨氯地平樣品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL含1 mg的天冬氨酸氨氯地平供試品溶液。

2.3.3 定位結(jié)果

取2.3.2項下馬來酸左氨氯地平供試品溶液適量，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，相關(guān)數(shù)據(jù)見表1，色譜見圖2 A?？梢姲闯龇鍟r間先后順序，依次為馬來酸、天冬氨酸氨氯地平、左氨氯地平堿（保留時間分別為2.801，6.967，7.435 min）。

表1 馬來酸左氨氯地平供試品溶液高效液相色譜數(shù)據(jù)Tab.1 HPLC data of L-amlodipine maleate test solution

取2.3.2項下天冬氨酸氨氯地平供試品溶液適量，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，相關(guān)數(shù)據(jù)見表2，色譜見圖2 B。可見，2號峰為天冬氨酸氨氯地平主峰，其余3個峰為未知雜質(zhì)峰。

圖2 高效液相色譜圖1.Maleic acid 2.Amlodipine aspartate 3.L-amlodipine 4，5，6.Unknown impurityA.L-amlodipine maleate test solution B.Amlodipine aspartate test solutionFig.2 HPLC chromatograms

表2 天冬氨酸氨氯地平供試品溶液高效液相色譜數(shù)據(jù)Tab.2 HPLC data of amlodipine aspartate test solution

馬來酸左氨氯地平與天冬氨酸氨氯地平供試品溶液對比圖譜見圖3。通過對比，確定出峰時間在6.9 min時的物質(zhì)為天冬氨酸氨氯地平。

圖3 馬來酸左氨氯地平與天冬氨酸氨氯地平高效液相色譜圖對比Fig.3 Comparison of HPLC chromatograms of L-amlodipine maleate and amlodipine aspartate

3 討論

左氨氯地平和貝那普利對新發(fā)腦卒中合并高血壓患者均有較好的降壓效果，且前者對腦卒中復(fù)發(fā)率的控制效果優(yōu)于后者［9］。恒清湯聯(lián)合馬來酸左氨氯地平片可有效改善原發(fā)性高血壓患者血壓晝夜節(jié)律，降低血壓變異性，提高杓型血壓［10］比例，并有效控制晨峰血壓，改善相關(guān)動態(tài)血壓參數(shù)［10-11］，臨床療效顯著［12-13］。

馬來酸左氨氯地平活性組合物主要包含馬來酸左氨氯地平、右旋氨氯地平、天冬氨酸氨氯地平、雜質(zhì)D，基本不含雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)E、雜質(zhì)F、雜質(zhì)G、雜質(zhì)H，該藥物活性組合物構(gòu)成能滿足馬來酸左氨氯地平的質(zhì)量要求［6］。通過控制馬來酸左氨氯地平副產(chǎn)物的生成可控制藥物質(zhì)量，天冬氨酸氨氯地平作為馬來酸左氨氯地平的主要副產(chǎn)物，加大了藥物純化的難度。通過對藥物合成過程的分析，得出天冬氨酸氨氯地平是氨氯地平上的氨基取代基與馬來酸上的雙鍵進行Michael加成反應(yīng)得到。歐洲專利合成該特有雜質(zhì)均采用熔融法［8］，此方法的缺點是反應(yīng)溫度較高（200～300℃），合成過程復(fù)雜，不易操作，存在危險性，且其制備的天冬氨酸氨氯地平為消旋體。本研究中采用三乙胺為催化劑，用左氨氯地平堿及馬來酸為反應(yīng)原料，制備出的天冬氨酸氨氯地平為左旋體，具有旋光性。該合成產(chǎn)品可與馬來酸左氨氯地平的雜質(zhì)種類進行對比分析，逐步提出馬來酸左氨氯地平合成過程中此雜質(zhì)的降解方法與控制策略，以優(yōu)化藥品質(zhì)量，降低潛在藥品不良反應(yīng)發(fā)生率，提高臨床療效及用藥安全。本研究不足之處是制備的天冬氨酸氨氯地平仍存在未知雜質(zhì)，需要不斷優(yōu)化該合成工藝來提高該反應(yīng)產(chǎn)物的純度。

綜上所述，本研究所合成的天冬氨酸氨氯地平可作為馬來酸左氨氯地平的雜質(zhì)標準品，補充其雜質(zhì)試驗數(shù)據(jù)，進一步完善雜質(zhì)檔案。