李欣， 李小明， 黎小年， 林杰， 吉祥靈

(1.海南省婦女兒童醫(yī)學中心兒科綜合內(nèi)科，海南省?？谑?70206；2.?？谑协偵絽^(qū)婦幼保健院兒科，海南省?？谑?71100)

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是兒科常見急性發(fā)熱出疹性傳染病，主要由腸道病毒感染引起，傳染性較強，以柯薩奇病毒A16型(Coxsackievirus A16，CA16)、A6型(CA6)和腸道病毒71型(Enterovirus 71，EV-71)最為常見，呼吸道、消化道以及密切接觸是主要的傳播方式。大部分HFMD患兒的病情呈自限性，1周內(nèi)會自行恢復，而少部分患兒病情發(fā)展迅速，進入HFMD重癥階段，對患兒心腦血管構(gòu)成潛在風險，威脅患兒生命[1]。細胞免疫是預防病毒侵襲的重要屏障，HFMD的發(fā)生及進展與機體細胞免疫功能抑制存在密切聯(lián)系[2]。因此，本研究就HFMD患兒的T淋巴細胞亞群和腸道病毒分型進行分析，探討其與HFMD病情程度的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2017年3月—2020年7月本中心收治的HFMD患兒92例(HFMD組)，其中男53例，女39例，年齡(4.13±1.21)歲；均符合《手足口病診療指南》[3]診斷標準及分型。對照組選取同期本院體檢的健康兒童40例，男24例，女16例，年齡(4.21±1.25)歲。兩組以上資料比較差異無顯著性(P<0.05)。HFMD組按照病情程度分為輕癥組59例，重癥組33例。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準。所有研究對象家屬知情同意。納入標準：患兒的臨床體征符合手足口病診斷標準；患兒監(jiān)護人均知情同意。排除標準：入院前1周使用免疫抑制藥；合并嚴重臟器疾?。话橛忻庖咝约膊〉取?/p>

1.2 腸道病毒分型檢測[4]

HFMD組于入院第2天清晨抽取2 mL靜脈血，離心后置于-20 ℃保存，具體檢驗方法依據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[5]執(zhí)行。采用ABI 7500熒光定量 PCR儀(美國ABi 公司)實時熒光定量聚合酶鏈反應法測定CA16、CA6、EV-71及其他EV RNA，RNA檢測試劑盒購自上海晅科生物科技有限公司，操作步驟嚴格按照說明書執(zhí)行。

1.3 T淋巴細胞亞群檢測[6]

HFMD組于入院第2天清晨，對照組兒童于體檢當日清晨抽取2 mL靜脈血，采用NovoCyte流式細胞儀[安捷倫生物(杭州)有限公司]檢測血清T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平，并計算CD4+/CD8+，T淋巴細胞亞群試劑盒購自上海烜雅生物科技有限公司。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果2.1 輕癥組和重癥組一般資料的比較

輕癥組和重癥組受累器官分布差異有顯著性(P<0.05；表1)，其他指標比較差異無顯著性(P>0.05；表1)。

表1 輕癥組與重癥組一般資料的比較

2.2 各組腸道病毒分型的比較

HFMD組患兒腸道病毒感染以單一感染為主，其中CA16和CA6構(gòu)成比較高。重癥組與輕癥組病毒分型情況比較差異無顯著性(P>0.05；表2)。

表2 不同病情程度HFMD患兒腸道病毒分型的比較 單位：例(%)

2.3 各組T淋巴細胞亞群水平的比較

CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平HFMD組低于對照組，重癥組低于輕癥組(P<0.05;圖2和表3)。

圖1 各組T淋巴細胞亞群的流式細胞圖

表3 各組T淋巴細胞亞群水平的比較

3 討 論

HFMD的臨床特征為發(fā)熱和手、足、口、臀等多部位皮疹，主要是由CA16和CA6引起，少部分由EV71和其他腸道病毒感染引起，中國腸道病毒感染病原體以CA16和C6型最為常見[7]。本研究分析發(fā)現(xiàn)，92例HFMD患兒以CA16感染為主，其次為CA6感染，少部分患者以EV71、CA16與CA6混合感染或其他EV感染所致，此結(jié)果與既往研究報道相吻合[8]。本研究同時對不同病情程度下的患兒腸道病毒分型統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，患兒的病情程度與病毒分型之間并無明顯聯(lián)系。

基于HFMD進展為重癥后有較高致殘率和致死率，重癥HFMD病情進展的早期診斷指標成為近些年的關(guān)注點。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，HFMD在3歲以下嬰幼兒中發(fā)病率較高，且極易發(fā)展為重癥，與患兒細胞免疫功能低下有關(guān)[9]。另有研究證明，機體在感染病毒后，淋巴細胞分泌的干擾素-γ、白細胞介素-6、白細胞介素-8等多種炎癥因子表達水平顯著增高，且各炎癥因子水平增加程度與病情相關(guān)[10]。這說明細胞免疫在HFMD的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，而T淋巴細胞的作用尤為重要。T淋巴細胞能夠反映機體免疫狀態(tài)，在免疫過程中分化為CD3+、CD4+等不同亞群，各亞群具有不同的作用。當機體感染病毒時，免疫系統(tǒng)被激發(fā)，短時間內(nèi)清除病原，有助緩解病情[11]。故有學者認為T淋巴細胞可作為HFMD的預測指標。本研究結(jié)果顯示，HFMD患兒的CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+明顯低于健康兒童，說明HFMD存在免疫異常，重癥HFMD患兒CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+低于輕癥患兒，提示患兒病情越重，T淋巴細胞亞群數(shù)值越低，說明在遭受病毒侵襲后，免疫系統(tǒng)激活的T淋巴細胞減少，亞群比例失衡，免疫功能發(fā)生紊亂而無法發(fā)揮作用，從而導致致病原進一步擴散，使病情加重，該結(jié)果與同類研究結(jié)論相一致[12]，表明外周血T淋巴細胞亞群變化可為臨床診斷及病情程度的判斷提供科學依據(jù)。本研究較先前研究的優(yōu)勢在于，首次同時分析了HFMD患兒的EV型與T細胞亞類情況，從分子流行病學、免疫學和診斷學等多方面為HFMD的疾病認知增添了解。

綜上所述，HFMD患兒存在T細胞免疫功能削弱，尤其是重癥HFMD患兒，盡早進行T淋巴細胞亞群檢測可幫助早期診斷并區(qū)分輕重癥，從而及時采取干預措施以防病情向重癥轉(zhuǎn)化，在HFMD的診斷和治療過程中具有重要參考價值。