劉京偉

(臨沂市中心醫(yī)院，山東 臨沂 276400)

平衡易位為常見的染色體結(jié)構(gòu)異常，女性攜帶者在生育過程中易出現(xiàn)反復(fù)自然流產(chǎn)、胚胎停止發(fā)育和新生兒多發(fā)畸形等[1]。羅伯遜易位又稱著絲粒融合，是一種特殊的染色體平衡易位，是指發(fā)生于近端著絲粒染色體D組(13號(hào)、14號(hào)、15號(hào))和G組(21號(hào)、22號(hào))組內(nèi)或組間的易位方式，其在人群中的發(fā)病率約為1/1000[2]。羅伯遜易位攜帶者通常具有正常的發(fā)育表型，但可能導(dǎo)致反復(fù)流產(chǎn)、胎停和多發(fā)畸形等。因此，染色體易位攜帶者是有創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的指征之一。本研究通過聯(lián)合應(yīng)用染色體核型分析和染色體微陣列分析(Chromosomal microarray analysis，CMA)技術(shù)對(duì)兩例羅伯遜易位攜帶者孕婦進(jìn)行分子細(xì)胞遺傳學(xué)分析，以明確胎兒的染色體是否正常，為妊娠期遺傳咨詢提供診斷依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 孕婦1，27歲，平素月經(jīng)規(guī)律，孕3產(chǎn)0，連續(xù)2次胚胎停止發(fā)育，本次妊娠系宮內(nèi)單胎妊娠，由于孕婦為羅伯遜易位攜帶者遂行中孕期介入性產(chǎn)前診斷，其核型為45, XX, der (13;14)(q10; q10)。孕婦2，32歲，平素月經(jīng)規(guī)律，孕4產(chǎn)1，有胚胎停育史，由于孕婦為羅伯遜易位攜帶者遂行中孕期介入性產(chǎn)前診斷，其核型為45,XX,der(14;21)(q10;q10)。2例患者夫妻均非近親結(jié)婚，否認(rèn)家族遺傳病史、藥物過敏史及孕期有毒有害物質(zhì)接觸史。

1.2方法

1.2.1羊水細(xì)胞培養(yǎng)及染色體核型分析 超聲下羊膜腔穿刺獲取羊水20 mL，置于37℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6～7 d。制備染色體并進(jìn)行G顯帶分析，分析標(biāo)準(zhǔn)參照人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(2020版)。使用MetaClient染色體圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)50個(gè)分裂相，分析10個(gè)核型，發(fā)現(xiàn)嵌合體或異常核型時(shí)加數(shù)至100個(gè)分裂相。

1.2.2CMA 按照QIAamp?DNA Mini Kit說明書進(jìn)行羊水細(xì)胞基因組DNA提取。實(shí)驗(yàn)操作流程包括消化鏈接、PCR產(chǎn)物純化、片段化、標(biāo)記、芯片雜交、芯片洗染和芯片掃描。使用Affymetrix CytoScan 750K Array芯片進(jìn)行羊水細(xì)胞基因組DNA檢測(cè)。雜交后的芯片進(jìn)行激光掃描(GeneChip 3000 Scanner with 7G upgrade)得到掃描圖，再通過控制軟件(GeneChip Command Console)和染色體分析軟件(Affymetrix Chromosome Analysis Suite，ChAS 2.1)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果

2.1胎兒染色體核型分析 孕婦1胎兒染色體核型為45,XN,der(13;14)(q10;q10)mat，為羅伯遜易位攜帶者，見封二圖1A；孕婦2胎兒染色體核型為46,XN,der(14;21)(q10;q10),+21,mat，為羅伯遜易位型21三體綜合征，見封二圖1B。

2.2胎兒CMA結(jié)果 孕婦1胎兒在全基因組水平上未見染色體的缺失或重復(fù)，見封二圖2A；孕婦2胎兒提示arr(21)×3，結(jié)合染色體核型分析確診為易位型的21三體綜合征，見封二圖2B。

3 討論

依據(jù)羅伯遜易位累積的兩條染色體是否同源可分為非同源型羅伯遜易位和同源型羅伯遜易位兩種類型[3]。非同源型羅伯遜易位攜帶者雖然表型正常，但在形成配子時(shí)理論上可形成6種配子，一種正常，一種為羅伯遜易位攜帶型，另外4種為三體或單體；前2種配子在與正常配子結(jié)合后，通?？梢曰町a(chǎn)正常個(gè)體，而后4種三體或單體配子在與正常配子結(jié)合后，由于人類對(duì)單倍體耐受弱與三倍體，單倍體胚胎通常表現(xiàn)為自然流產(chǎn)或胚胎早期停止發(fā)育，而三倍體胚胎則存在活產(chǎn)的可能性[4]。同源型羅伯遜易位攜帶者在配子形成過程中只能產(chǎn)生兩種類型配子，一種為三體，一種為單體，均為異常配子，受精后形成三體或單體合子，理論上不能生育正常后代[5]。

本研究對(duì)2例羅伯遜易位攜帶者孕婦進(jìn)行分子細(xì)胞遺傳學(xué)分析，結(jié)果顯示：孕婦1胎兒染色體核型為45,XN,der(13;14)(q10;q10)mat，為羅伯遜易位攜帶者，未見染色體的缺失或重復(fù)；孕婦2胎兒染色體核型為46,XN,der (14;21)(q10;q10),+21,mat，為羅伯遜易位型21三體綜合征。2例孕婦均為非同源型羅伯遜易位攜帶者，易位類型分別為D/D型和D/G型，并且都存在不良孕產(chǎn)史，因此均符合有創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的指征。

綜上所述，本研究通過應(yīng)用染色體核型分析和CMA技術(shù)對(duì)2例羅伯遜易位攜帶者孕婦胎兒進(jìn)行了精確診斷，為妊娠期遺傳咨詢提供了可靠依據(jù)。