王 瑋，劉憲麗

（鄒城市檢驗檢測中心，山東濟寧 273500）

現(xiàn)以山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳組織開展的種植業(yè)領(lǐng)域能力驗證活動為例，將實施方案及關(guān)鍵控制點分析如下。

1 材料與方法

1.1 考核樣品

本次考核共發(fā)放A和B兩組樣品，每組樣品均包括1份考核樣和1份空白樣，每份樣品的質(zhì)量約200 g。A組樣品的基質(zhì)為甘藍，B組樣品的基質(zhì)為芹菜。樣品發(fā)放采用郵寄的方式，收到快遞立即檢查樣品狀態(tài)，仍為冷凍勻漿狀態(tài)[1]。

1.2 考核項目及檢測方法

蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測項目及檢測方法見表1。

表1 蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測項目及檢測方法

1.3 檢測儀器設(shè)備

根據(jù)給定的考核項目及檢測方法確定每個項目所用儀器及檢測方法，有無檢測資質(zhì)，依托檢測方法以氣相色譜儀、液相色譜儀定量為主，氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀定性為輔，多個儀器比對來定量為原則，綜合考量，確定上報結(jié)果，檢測項目所用的比對儀器見表2。儀器型號為安捷倫8890A-7000D氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、WATERS液相色譜儀和安捷倫7890A氣相色譜儀。

表2 蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測項目所用的比對儀器

2 考核前的準(zhǔn)備工作

2.1 購買有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

按給定的農(nóng)藥殘留檢測項目購買農(nóng)業(yè)農(nóng)村部定制的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

2.2 確定前處理方法

前處理方法按照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法》（NY/T 761—2008）進行處理。

2.3 前處理用品準(zhǔn)備

申請新的未拆封甲醇、正己烷、丙酮和氯化鈉（可140 ℃烘4 h）；玻璃器皿如樣品分裝瓶、具塞量筒（做好檢漏測試）、漏斗、稱量勺、移液管、10 mL玻璃離心管清洗干凈備用（最后用三級水清洗）；移液管助吸器充滿電備用；標(biāo)液配制專用針校準(zhǔn)清洗備用；檢查均質(zhì)機和氮吹儀，清洗干凈刀頭和氮吹針，洗刀頭的杯子4個，清洗順序為超純水→乙腈→丙酮→超純水[2]。

2.4 儀器維護

GC及GC-MS的維護：①檢查儀器設(shè)備所用氣源壓力是否正常，所使用載氣、助燃?xì)饽軌驖M足檢測需要，檢查氣體管路是否有漏氣；②更換進樣口的襯管、隔墊、O型圈；③更換進樣針，保證洗針溶劑與進樣溶劑相匹配，洗針瓶和廢液瓶清洗干凈備用；④檢查色譜柱兩端是否需要截取，柱子是否需要老化；⑤檢查分流平板是否需要清洗或更換；⑥檢查氣質(zhì)離子源和燈絲并進行調(diào)諧。

HPLC的維護：清洗系統(tǒng)，拆卸色譜柱，按水∶乙腈∶甲醇∶異丙醇=1∶1∶1∶1的比例輸送液體，清洗后，用水∶甲醇=1∶1的比例充分清洗。

LC/MS/MS的維護：檢查離子化、噴霧是否正常、清洗離子源、檢查碰撞器、氮氣發(fā)生器、做質(zhì)量調(diào)諧。

2.5 準(zhǔn)備空白基質(zhì)

準(zhǔn)備空白基質(zhì)（不含農(nóng)藥殘留且與考核樣品同類型的空白樣品）供后期模擬實驗及添加回收實驗使用（添加回收實驗可在添加后冷凍過夜后再做）。

2.6 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

配制高濃度（10 mg·L-1）的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，作為加標(biāo)溶液使用（上機前繼續(xù)稀釋成1.0 mg·L-1的混合溶液作為配制標(biāo)準(zhǔn)使用溶液用，標(biāo)準(zhǔn)使用溶液要使用基質(zhì)配制）。配標(biāo)原則是逐級稀釋。

2.7 建立儀器檢測方法

優(yōu)化檢測方法，使被檢測的化合物在色譜柱上盡可能分開，氣相色譜儀、氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀上新?lián)Q的襯管要反復(fù)進標(biāo)準(zhǔn)溶液，使稱管穩(wěn)定飽和后再測定樣品。

2.8 模擬能力驗證

進行能力驗證的模擬實驗，提前熟悉實驗過程，發(fā)現(xiàn)問題及時解決。

3 樣品前處理過程

3.1 上機標(biāo)液的配制

兩人合作進行，一人配標(biāo)一人輔助洗針。

3.2 樣品分裝

樣品有1個考核樣，1個空白樣，每盒約200 g。樣品到達實驗室后應(yīng)避光、室溫解凍，然后由2～3人將樣品分裝到50 mL具塞廣口瓶中，每個瓶中稱25.0 g，瓶上做好標(biāo)記并記錄好質(zhì)量。稱樣時用勺子攪拌均勻后再稱，樣品不要沾到具塞廣口瓶壁上。

3.3 樣品提取

樣品要在剛剛解凍的狀態(tài)下進行提取，前處理方法采用NY/T 761—2008的方法。

（1）第一次實驗：初篩。每組做3個空白、4個樣品，其中一個空白做空白樣品CK，另兩個空白樣品用于配基質(zhì)標(biāo)，再做3個預(yù)先準(zhǔn)備的空白基質(zhì)來做加標(biāo)回收驗證，兩組共計20個樣品。25 g樣品加入50 mL乙腈（容量瓶量?。?，均質(zhì)2 min，然后過濾到加有10～14 g氯化鈉的具塞量筒中（多放氯化鈉保證鹽析效果，過濾時保證濾液盡可能多，足夠使用），劇烈振搖2 min，避光靜置30 min（靜置時提前調(diào)節(jié)好氮吹儀，溫度設(shè)到40 ℃）。吸取靜置好的乙腈溶液1 mL到10 mL容量瓶，用甲醇-水溶液（1∶9）定容后進小瓶上液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，然后用移液管再吸取30 mL乙腈溶液到3個玻璃離心管中，每個離心管10 mL，分別用于氮吹復(fù)溶后上氣相色譜儀的FPD檢測器、ECD檢測器和液相色譜儀的紫外檢測器測定，吸取上層液時要避免吸到下層液體，氮吹時氣流不要過大，后期要勤觀察，固定1～2人看氮吹，保證不吹干，大約剩半滴，微微濕潤；上氣相ECD的樣品用針吸取正己烷2 mL復(fù)溶，上氣相FPD和氣質(zhì)質(zhì)的共用一個樣品，用針吸4 mL丙酮復(fù)溶，上液相的樣品用針吸2.5 mL乙腈-水溶液（1∶9）復(fù)溶，進小瓶后準(zhǔn)備上機測定；序列編輯順序為試劑空白（丙酮、正己烷或甲醇）→樣品空白（CK）→白標(biāo)→基質(zhì)標(biāo)→樣品溶液→加標(biāo)回收→白標(biāo)→基質(zhì)標(biāo)→樣品溶液→加標(biāo)回收[3]。

（2）第二次實驗。經(jīng)過初篩確定了所加農(nóng)藥的種類，每組做了5個空白，4個樣品。其中，2個空白用于基質(zhì)配標(biāo)，3個空白用于加標(biāo)回收，兩組共計18個樣品。根據(jù)第一次的定量結(jié)果，加標(biāo)樣的濃度應(yīng)與樣品濃度接近，配標(biāo)濃度也應(yīng)和樣品濃度接近[4]。

4 關(guān)鍵控制點

①整個能力驗證實驗包括前處理過程和儀器分析過程。前處理實驗過程中要保證操作過程準(zhǔn)確，避免發(fā)生對結(jié)果造成重大誤差的不規(guī)范操作，要求操作人員細(xì)心、準(zhǔn)確和操作平穩(wěn)；而儀器分析過程則要求檢測項目在儀器上有很好的分離度和響應(yīng)。②進行前處理時，多放氯化鈉保證鹽析效果，均質(zhì)均勻，過濾時保證濾液盡可能多，足夠使用，振搖要劇烈充分，靜置時間要足夠，吸取上層液時要避免吸到下層液體，氮吹后期要勤觀察，保證不吹干，大約半滴微微濕潤[5]。③多次能力驗證結(jié)果均發(fā)現(xiàn)第一次結(jié)果定量最為準(zhǔn)確，可以第一次實驗時盡量多處理幾個樣品，避免后續(xù)樣品由于冷凍時間過久和反復(fù)解凍造成農(nóng)藥降解，使定量結(jié)果偏小。④液質(zhì)上農(nóng)藥殘留可先配不加基質(zhì)的大混標(biāo)對待測樣快速定性和初步定量，再根據(jù)目標(biāo)物濃度準(zhǔn)確配制與之濃度接近的基質(zhì)標(biāo)來單點校正，這樣可以節(jié)省很多配標(biāo)時間。為提高回收率，最后一步進樣品瓶前可不過濾膜。⑤氣質(zhì)質(zhì)上農(nóng)藥殘留定量必須用基質(zhì)標(biāo)，可降低基質(zhì)效應(yīng)，且峰形較好。

5 結(jié)語

綜上所述，本文以山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳組織開展的種植業(yè)領(lǐng)域能力驗證為例制定實施方案并對關(guān)鍵控制點進行分析，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機構(gòu)提高能力驗證水平提供參考與借鑒。