張 郡，夏紅蕾，楊沁惠

（蘭州市婦幼保健院，甘肅 蘭州 730030）

乳腺癌是女性腫瘤中發(fā)病率占第一位的腫瘤[1]。近年來(lái)，腫瘤全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)ARID1A基因在多種腫瘤中存在大量突變[2]，ARID1A基因突變導(dǎo)致的ARIDA亞基缺失會(huì)影響SW1/SNF復(fù)合物功能的完整性，從而影響下游靶基因的轉(zhuǎn)錄、DNA復(fù)制和修復(fù)。浸潤(rùn)性乳腺癌中ARID1A表達(dá)的研究，檢索國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)相關(guān)報(bào)道較少。本研究中，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)ARID1A基因在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)并分析ARID1A基因在浸潤(rùn)性乳腺癌、乳腺良性病變及正常乳腺組織中的表達(dá)及與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本收集及臨床資料

收集蘭州市婦幼保健院2014年1月—2017年1月病理診斷為乳腺浸潤(rùn)性癌的病例101例，并取其癌旁正常組織19例，收集診斷為乳腺纖維腺瘤的患者48例，收集納入病例完整的臨床資料及隨訪信息。以上信息獲得患者的知情同意。

1.2 HE染色及免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)

組織經(jīng)4%的中性甲醛固定，常規(guī)石蠟切片、HE染色。免疫組化染色抗體ARID1A購(gòu)自蘇州百道生物有限公司。免疫組化采用SP法。實(shí)驗(yàn)設(shè)置陽(yáng)性、陰性對(duì)照，依據(jù)報(bào)道，ARID1A因子以細(xì)胞核呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，ARID1A陽(yáng)性的判定以＜5%的陽(yáng)性細(xì)胞為0-+，5%～10%的陽(yáng)性細(xì)胞為++。＞10%的陽(yáng)性細(xì)胞為+++，將++、+++定義為陽(yáng)性，0-+定義為陰性。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色的組織切片由2位病理科副主任醫(yī)師對(duì)切片獨(dú)立評(píng)估并獨(dú)立評(píng)分，而不知道患者特征。最終選取其一致性結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料

101例浸潤(rùn)性乳腺癌患者均為女性，年齡27～84歲，中位年齡52歲，其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌98例，內(nèi)分泌癌1例，粘液癌2例，有脈管侵犯1例，同側(cè)乳腺多發(fā)病灶4例，雙側(cè)乳腺癌1例。

2.2 結(jié)果分析

根據(jù)ARID1A在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，將101例乳腺癌患者分為陽(yáng)性組和陰性組，陽(yáng)性患者32例，陰性患者69例。

在101例浸潤(rùn)性乳腺癌中ARID1A陽(yáng)性表達(dá)32例，陽(yáng)性率為31.68%。對(duì)照組中乳腺纖維腺瘤及癌旁正常乳腺組織中ARID1A陽(yáng)性表達(dá)率均較浸潤(rùn)性乳腺癌組織中增高，分別為43.75%、68.42%，兩者與乳腺癌組比較差異有顯著性（P<0.05）（表1）。

表1 浸潤(rùn)性乳腺癌組和對(duì)照組中ARID1A的表達(dá)

在浸潤(rùn)性乳腺癌患者組織中ARID1A的表達(dá)與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），且在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中（陽(yáng)性率18.03%）陽(yáng)性表達(dá)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（陽(yáng)性率52.50%），而與患者年齡、組織分級(jí)、腫瘤的大小及TNM分期無(wú)關(guān)（P＞0.05）（表2）。

表2 ARID1A在浸潤(rùn)性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征之間的關(guān)系

ARID1A在浸潤(rùn)性乳腺癌、乳腺纖維腺瘤及癌周 正常乳腺組織中表達(dá)均定位于細(xì)胞核（見圖1—圖4）。

圖1 ARID1A在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中呈陽(yáng)性表達(dá)

圖2 ARID1A在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中呈陰性表達(dá)

圖3 ARID1A在乳腺纖維腺瘤中呈陽(yáng)性表達(dá)

圖4 ARID1A在正常乳腺組織中呈陽(yáng)性表達(dá)

3 討論

ARID1A基因又名BAF250A、SMARCF1或P270，ARID1A基因位于人染色體1P35.3，結(jié)構(gòu)分析以及體外實(shí)驗(yàn)顯示，ARID1A可以以序列非特異性的方式與富含AT的DNA序列結(jié)合發(fā)揮作用[3]。

ARID1A基因是一種腫瘤抑制基因[4]，是染色質(zhì)重塑復(fù)合物SW1/SNF的核心亞基，在癌細(xì)胞中具有較高的突變率[5]。SW1/SNF是一種多亞基的染色質(zhì)重塑復(fù)合物，在DNA轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、損傷修復(fù)中發(fā)揮重要的作用。ARID1A基因可與富含AT的DNA序列非特異性結(jié)合，通過蛋白質(zhì)之間的相互作用介導(dǎo)相關(guān)蛋白發(fā)揮作用。在DNA復(fù)制、重組、修復(fù)及轉(zhuǎn)錄過程中，染色質(zhì)的包裝及相應(yīng)DNA分子發(fā)生改變，稱為染色質(zhì)重塑，SW1/SNF是多亞基染色質(zhì)重塑復(fù)合物，依賴ATP水解能量來(lái)重新定位核小體，以此來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)[6]。

以往研究表明，ARID1A的表達(dá)與細(xì)胞周期有關(guān)，其在G0-G1期表達(dá)最高，在S期和G2-M期明顯降低，在分裂旺盛的細(xì)胞中幾乎完全缺失。P21/WAF可與細(xì)胞周期蛋白CDK2/CDK4復(fù)合物結(jié)合并抑制其活性，從而使細(xì)胞周期停滯于G1期，ARID1A可調(diào)節(jié)P21/WAF1基因的表達(dá)[7]。

近年來(lái)多項(xiàng)研究顯示，磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K/AKT）信號(hào)通路與腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、代謝等多種細(xì)胞功能中發(fā)揮重要作用。ARID1A在腫瘤發(fā)生中的作用與PI3K信號(hào)通路的激活相關(guān)[8]。研究發(fā)現(xiàn)ARID1A突變常與PI3KCA激活突變和/或PTEN表達(dá)缺失共存，這兩者都可導(dǎo)致PI3K/AKT下游信號(hào)通路的激活。ARID1A可通過使PI3K/AKT信號(hào)通路蛋白的變化、EMT（上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化）、細(xì)胞周期、與原位癌基因P53等相互作用調(diào)控細(xì)胞的增殖。

近年來(lái)，有文獻(xiàn)報(bào)道ARID1A在卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌、胃癌、乳腺癌中發(fā)生突變，但其在乳腺癌中的研究較少。在卵巢癌中，ARID1A通過上調(diào)P21和SMAD3基因的表達(dá)來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，在腦膠質(zhì)瘤中，ARID1A通過影響PI3K/AKT信號(hào)通路來(lái)抑制細(xì)胞增殖，但在肝癌、胃癌、乳腺癌中的作用機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

張倩等[9]通過以慢病毒為載體的RNA干擾技術(shù)，發(fā)現(xiàn)干擾ARID1A的表達(dá)促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移及侵襲能力。在干擾掉ARID1A后，Akt磷酸化水平升高，P21表達(dá)量下降，細(xì)胞周期S期上升，G2期下降，過表達(dá)ARID1A后，Akt磷酸化水平下降，P21表達(dá)上升，S期下降，G2期上升，細(xì)胞凋亡比例上升。乳腺癌中ARID1A可能通過調(diào)節(jié)Akt磷酸化以及細(xì)胞周期來(lái)調(diào)控細(xì)胞的增殖。

Zhang等[10]研究了112例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中ARID1A的表達(dá)，結(jié)果顯示，ARID1A mRNA在乳腺癌中的表達(dá)低于正常乳腺組織（P＜0.001），且與腫瘤大小、較高的臨床分期有關(guān)，發(fā)現(xiàn)低ARID1A表達(dá)是總體生存率的預(yù)測(cè)因素，而不是獨(dú)立因素。Samartzis等[11]研究，ARID1A敲低后，MCF7乳腺癌細(xì)胞對(duì)AKT抑制劑MK-2206和perifosine及PI3K抑制劑buparlisib的敏感性顯著增加。Uncel和Diniz[12]在292例乳腺癌標(biāo)本中檢測(cè)到123例存在ARID1A基因表達(dá)缺失，且ARID1A缺失與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有顯著性差異（P=0.001）。

本研究結(jié)果顯示，ARID1A在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率低于乳腺纖維腺瘤及癌周正常乳腺組織，且在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中陽(yáng)性表達(dá)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，這與之前文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)論有相似之處。提示ARID1A因子的突變或缺失與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，進(jìn)一步提示ARID1A在浸潤(rùn)性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起保護(hù)性作用，ARID1A有望成為乳腺良、惡性病變鑒別的分子生物學(xué)參考指標(biāo)之一。