王錦，周三云，曹婉，高喜樂，王艷娟，李龍英（浙江圣兆藥物科技股份有限公司，杭州 310051）

精神分裂癥因其特殊性需長(zhǎng)期治療，目前給藥依從性差是精神分裂癥長(zhǎng)期治療的主要問題，禮來制藥公司將活性成分奧氮平和雙羥萘酸結(jié)合生成一種難溶性化合物（奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物），該難溶性化合物在注入肌肉后形成藥物儲(chǔ)庫(kù)，持續(xù)緩慢地釋放奧氮平，以達(dá)到延長(zhǎng)給藥周期的目的，解決了依從性差的問題，具有臨床優(yōu)勢(shì)[1]，目前已在歐洲（商品名：Zypadhera）和美國(guó)（商品名：Zyprexa Relprevv）上市[2]。

原料藥奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物僅收錄于歐洲藥典[3]，《中國(guó)藥典》尚未收載。目前合成該原料藥的工藝溶劑主要有二甲基亞砜（DMSO）和二甲基甲酰胺（DMF），因二者的沸點(diǎn)較高，生產(chǎn)工藝中通過水洗較難去除完全，《中國(guó)藥典》2020年版四部通則中0861 殘留溶劑測(cè)定法[4]和ICH Q3C（R5）均將DMSO 和DMF 分別列為第三類溶劑和第二類溶劑，限度依次為0.5%、0.088%。本文根據(jù)公司實(shí)際使用需要，將原料藥奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物中DMSO 限度收嚴(yán)至0.3%。目前有多篇文獻(xiàn)報(bào)道了DMF 或DMSO殘留量的檢測(cè)方法，均采用氣相色譜法[5-10]。奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物熔點(diǎn)高達(dá)210℃且熔融分解，極易污染氣相色譜柱，氣相直接進(jìn)樣不適用于該品種；而DMSO 和DMF 沸點(diǎn)較高，頂空進(jìn)樣同樣不適用；DMSO 與DMF 沸點(diǎn)極性相近，氣相色譜較難實(shí)現(xiàn)兩者的完全分離，已報(bào)道文獻(xiàn)不能同時(shí)檢出這兩種組分。另有文獻(xiàn)報(bào)道了水和廢水中的DMF、DMAC、DMSO 的HPLC 分析方法[11]，但因水和廢水與奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物性質(zhì)差異較大，該文獻(xiàn)方法中的樣品處理及色譜系統(tǒng)均不適用于奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物中DMSO 和DMF 的檢測(cè)，目前尚未見奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物中DMSO 和DMF 殘留量檢測(cè)方法的文獻(xiàn)報(bào)道。本文建立了一種測(cè)定奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物中DMSO 和DMF 殘留量的高效液相色譜方法，完成了方法學(xué)驗(yàn)證，該方法專屬性好，簡(jiǎn)便靈敏，準(zhǔn)確，具有較好的參考價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料

WATERS Arc 高效液相色譜儀（配有紫外檢測(cè)器，美國(guó)Waters 公司）；MSA225S-1CE-DA 電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物（浙江圣兆藥物科技股份有限公司，批號(hào)分別為P-3M、P-4M、P-5M）；正己胺、甲醇（色譜級(jí)，TEDIA）；DMSO[色譜級(jí)，GC 測(cè)定純度≥99.9%，阿拉丁試劑（上海）有限公司]；DMF（色譜級(jí)，HPLC 測(cè)定純度≥99.9%，TEDIA）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse RX C8（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；紫外檢測(cè)器；波長(zhǎng)：210 nm；流速：0.75 mL·min－1；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：水（A）和甲醇（B），梯度洗脫（0 ～8 min，10%B，8 ～15 min，10%B →90%B，15 ～20 min，90%B，20 ～20.1 min，90%B →10%B，20.1 ～30 min，10%B）。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液 取DMSO 約1500 mg、DMF 約440 mg，精密稱定，置于100 mL 量瓶?jī)?nèi)，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密移取上述溶液1 mL，置于50 mL 量瓶?jī)?nèi)，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL 中含DMSO、DMF 約300 μg、88 μg 的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 精密移取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置20 mL 量瓶中，用5%正己胺甲醇溶液（以下簡(jiǎn)稱稀釋劑）稀釋至刻度，得到每1 mL 中含DMSO、DMF 約15 μg、4.4 μg 的對(duì)照品溶液。

2.2.3 樣品溶液 準(zhǔn)確稱取適量樣品，加稀釋劑溶解并稀釋制成每1 mL 中含樣品約5 mg 的溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

依次取稀釋劑進(jìn)樣1 次、對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖，結(jié)果稀釋劑在DMSO 和DMF保留時(shí)間處均無干擾峰，DMSO 峰面積和DMF 峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.5%和1.0%，DMSO 峰和DMF 峰的分離度均大于1.5，證明該方法系統(tǒng)適用性良好。

2.4 專屬性試驗(yàn)

依次取稀釋劑、對(duì)照品溶液及樣品溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明，溶劑及樣品溶液在DMSO 和DMF 保留時(shí)間處均無干擾，各組分分離良好，方法專屬性好，見圖1。

圖1 專屬性試驗(yàn)色譜圖Fig 1 Chromatograms of specificity test

2.5 檢測(cè)限和定量限

精密量取對(duì)照品溶液用稀釋劑稀釋制成系列濃度溶液，取上述系列濃度溶液10 μL 注入色譜儀，當(dāng)DMSO 和DMF 信噪比（S/N）為10 時(shí)，計(jì)算DMSO 和DMF 的定量限分別為15.284 ng 和8.842 ng。取定量限溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 針，DMSO和DMF 峰面積RSD分別為1.3%、0.70%。

當(dāng)DMSO 和DMF 的信噪比（S/N）為3 時(shí)，計(jì)算DMSO 和DMF 的檢測(cè)限分別為4.58 ng 和2.65 ng。

2.6 線性關(guān)系考察

分別量取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用稀釋劑稀釋制成DMSO 質(zhì)量濃度為1.517、3.035、7.587、15.174、22.760、30.347、37.934 mg·L－1，DMF 質(zhì)量濃度為0.882、2.206、4.412、6.618、8.824 mg·L－1的系列混合對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度X（mg·L－1）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

得DMSO 線性方程：Y＝9.243×103X－652.5，相關(guān)系數(shù)為0.9996，表明DMSO 在1.517 ～37.934 mg·L－1內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。DMF 線性方程：Y＝4.964×104X－2.092×103，相關(guān)系數(shù)為0.9998；表明DMF 在0.882 ～8.824 mg·L－1內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

2.7 回收試驗(yàn)

分別量取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用稀釋劑稀釋制成DMSO 質(zhì)量濃度為1.527、7.634、15.084、30.347 mg·L－1，DMF 質(zhì)量濃度為0.0824、2.206、4.412、5.295 mg·L－1的系列混合對(duì)照品溶液。精密稱取12 份已測(cè)定DMSO 和DMF 殘留量的樣品約50 mg，每組3 份，用上述系列混合對(duì)照品溶液定容至10 mL。進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算DMSO、DMF 回收率。結(jié)果不同質(zhì)量濃度DMSO 的平均回收率在95.2%～119.4%，RSD在0.28%～2.2%；不同質(zhì)量濃度DMF 的平均回收率在97.6% ～99.5%，RSD在0.31% ～1.4%。表明該方法下DMSO 和DMF 的回收率良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物6 份，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法配制后進(jìn)樣測(cè)定，DMSO 和DMF含量分別為0.0754%和0.0038%，RSD分別為1.2%和8.2%，結(jié)果表明方法重復(fù)性好。

2.9 耐用性考察

考察了流速為0.65 mL·min－1和0.85 mL·min－1，柱溫為33℃和37℃，起始流動(dòng)相中有機(jī)相比例為8%和12%下的系統(tǒng)適用性，結(jié)果在上述各條件下，連續(xù)進(jìn)樣6 針對(duì)照品溶液的DMSO、DMF 峰面積RSD均小于5%，DMSO 和DMF 理論塔板數(shù)均大于2000，拖尾因子均小于2.0，各色譜峰間的分離度均大于1.5，結(jié)果表明方法耐用性良好。

2.10 溶液穩(wěn)定性

取對(duì)照品溶液，于室溫下放置，分別在0、24、55 h 進(jìn)樣測(cè)定，記錄各組分的峰面積，計(jì)算DMSO 和DMF 峰面積RSD分別為1.0%、0.68%，表明對(duì)照品溶液在室溫下放置55 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.11 樣品的測(cè)定

取3 批奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物，按“2.2.3”項(xiàng)下方法配制測(cè)試，結(jié)果見表1。

表1 樣品檢測(cè)結(jié)果Tab 1 Content of sample

3 結(jié)論

本文建立了同時(shí)測(cè)定難溶性藥物奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物中DMSO 和DMF 殘留量的高效液相色譜法，該方法可實(shí)現(xiàn)DMSO 和DMF 的完全分離，且樣品處理簡(jiǎn)單，所需樣品量少，對(duì)色譜系統(tǒng)、色譜柱無損害，操作方便，準(zhǔn)確度和重復(fù)性好，可實(shí)現(xiàn)奧氮平雙羥萘酸鹽一水合物中DMSO 和DMF 殘留量的準(zhǔn)確定量，為其他藥物中高沸點(diǎn)殘留溶劑的測(cè)定提供了思路和參考。