吳志偉 周海松 潘璐璐 李敏捷 韓碧華 馬景臣 辛延濤 呂為剛 曲建民趙玉良

1河北省疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究所，石家莊 050021；2正定縣疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項(xiàng)目辦公室，石家莊 050800；3大名縣疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項(xiàng)目辦公室，邯鄲 056900；4邯鄲市永年區(qū)疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項(xiàng)目辦公室，邯鄲 056000；5淶水縣疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項(xiàng)目辦公室，保定 074100

輪狀病毒感染是5歲以下兒童嚴(yán)重腹瀉的最常見病因，據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，每年約21.5萬(wàn)例5歲及以下兒童死于輪狀病毒感染，這些兒童中大多數(shù)生活在低收入國(guó)家。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2007年中國(guó)5歲以下兒童中有1 210萬(wàn)例輪狀病毒腹瀉病例，導(dǎo)致350萬(wàn)人次門診和22萬(wàn)人次住院，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，接種輪狀病毒疫苗是預(yù)防該病的有效途徑。盡管目前我國(guó)上市的輪狀病毒疫苗有蘭州羔羊輪狀病毒疫苗（LLR）和五價(jià)輪狀病毒活疫苗RotaTeq，但仍需成本效益高和安全有效的輪狀病毒疫苗作為補(bǔ)充。武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司研制的六價(jià)重配輪狀病毒活疫苗經(jīng)過(guò)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)開展臨床試驗(yàn)（批件號(hào)：2015L01112），本研究就口服六價(jià)重配輪狀病毒活疫苗在18周歲以上成人、2~6周歲的兒童以及6~12周齡的嬰兒中開展隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照設(shè)計(jì)的Ⅰ期臨床試驗(yàn)的安全性研究結(jié)果報(bào)告如下。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

2016年7月至2017年8月在河北省疫苗臨床研究基地正定縣疾病預(yù)防控制中心開展研究，招募符合年齡要求的當(dāng)?shù)爻Ｗ艏丝诘?8周歲以上成年人40名、2~6周歲的兒童40名和6~12周齡的嬰兒120名，共納入200名受試者。入選標(biāo)準(zhǔn)：18歲以上健康成人和2～6歲健康兒童，可有輪狀病毒疫苗免疫史、無(wú)疫苗接種禁忌癥者；6～12周齡健康嬰兒，無(wú)輪狀病毒疫苗免疫史、無(wú)疫苗接種禁忌癥者。排除標(biāo)準(zhǔn)：有過(guò)敏、驚厥、癲癇、腦病和精神病等病史或家族史者；對(duì)研究疫苗中任何成分過(guò)敏者，既往有任何疫苗接種嚴(yán)重過(guò)敏史；患免疫缺陷癥、接受免疫抑制劑治療者等。本研究經(jīng)河北省疾病預(yù)防控制中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（審批號(hào)：IRB2016-002），研究對(duì)象在篩選前由本人或其監(jiān)護(hù)人充分知情后自愿簽署書面知情同意書。

二、試驗(yàn)疫苗

試驗(yàn)疫苗為武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn)的口服六價(jià)重配輪狀病毒活疫苗，該疫苗是人-?；蛑嘏漭啝畈《疽呙纾蠫1、G2、G3、G4、G8和G9共6個(gè)血清型，疫苗規(guī)格2 mL/瓶，分為高劑量（10FFU）、中劑量（10FFU）、低劑量（10FFU）3個(gè)劑量水平，疫苗批號(hào)及有效期分別為20151104（2017年8月4日）、20151103（2017年8月4日）和20211102（2017年8月1日）。對(duì)照疫苗分為安慰劑1（不含抗原及抗酸劑）和安慰劑2（不含抗原但含有抗酸劑），規(guī)格為2.0 mL/瓶，疫苗批號(hào)及有效期分別為20151101（2017年8月1日）、20151105（2017年8月15日）。試驗(yàn)疫苗和安慰劑均經(jīng)過(guò)中國(guó)食品藥品檢定研究院檢驗(yàn)合格，疫苗均在2~8℃條件下運(yùn)輸和保存，在有效期內(nèi)使用。

三、疫苗接種

采用隨機(jī)、盲法、安慰劑對(duì)照、劑量遞增設(shè)計(jì)，研究分為三個(gè)年齡組，按照成人、兒童、嬰幼兒的順序序貫進(jìn)行。每個(gè)年齡層的研究對(duì)象按2∶1∶1的比例隨機(jī)服用試驗(yàn)疫苗、安慰劑1或安慰劑2。不同劑量的試驗(yàn)疫苗接種方法為：18歲以上成人組及兒童組口服1劑次高劑量疫苗；嬰幼兒組分為3個(gè)劑量組（低劑量、中劑量、高劑量），每個(gè)劑量組研究對(duì)象按照2∶1∶1的比例口服3劑試驗(yàn)疫苗、安慰劑1和安慰劑2，免疫程序?yàn)?、28、56 d。

四、安全性觀察

研究對(duì)象每次接種后需在現(xiàn)場(chǎng)留觀至少30 min，觀察30 min內(nèi)的即時(shí)反應(yīng)，通過(guò)日記卡和聯(lián)系卡收集研究對(duì)象接種后0~28 d的所有不良反應(yīng)。按照《預(yù)防用疫苗臨床試驗(yàn)不良反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)原則》進(jìn)行不良反應(yīng)嚴(yán)重程度的分級(jí)判定，分為輕度（1級(jí)）、中度（2級(jí)）、嚴(yán)重（3級(jí)）和潛在的生命威脅（4級(jí)）共四級(jí)：24 h內(nèi)嘔吐1～2次，攝入基本正常且不影響活動(dòng)為1級(jí)；24 h內(nèi)嘔吐3～5次，攝入顯著降低，或活動(dòng)受限為2級(jí)；24 h內(nèi)嘔吐＞5次，無(wú)明顯攝入，需靜脈輸液為3級(jí)；由于低血壓休克需要住院或其他途徑營(yíng)養(yǎng)為4級(jí)。其他分級(jí)表現(xiàn)：輕微或一過(guò)性腹瀉，2～3次稀便/d，或輕微腹瀉持續(xù)＜1周為1級(jí)；中度或持續(xù)性腹瀉，4～5次/d，或腹瀉＞1周為2級(jí)；＞6次水樣便/d，或血樣腹瀉，直立性低血壓，電解質(zhì)失衡，需靜脈輸液＞2 L為3級(jí)；低血壓休克，需住院治療為4級(jí)。體溫37.1～37.5℃為1級(jí)，37.6～39.0℃為2級(jí)，>39.0℃為3級(jí)。所有受試者均需要監(jiān)測(cè)嚴(yán)重不良反應(yīng)的發(fā)生情況直至完成全程免疫后6個(gè)月。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SAS9.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用

x

±

s

描述，組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和率描述，組間比較采用χ檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié) 果

一、基本情況

40名成年人中，試驗(yàn)組、安慰劑1組和安慰劑2組的年齡分別為（39.06±8.33）歲、（39.12±7.80）歲、（36.53±5.07）歲，男女性別比分別0.81∶1、0.43∶1、0.43∶1，組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（年齡：

F

=0.43，

P

=0.654；性別：確切概率法，

P

=0.757）；40名兒童中，試驗(yàn)組、安慰劑1組、安慰劑2組的年齡分別為（4.83±1.22）歲、（4.54±1.29）歲和（5.04±1.08）歲，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

F

=0.44，

P

=0.650），男女性別比分別為1∶1、0.11∶1和2.3∶1，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（確切概率法，

P

=0.019）；120名嬰幼兒中，高劑量組、中劑量組、低劑量組、安慰劑1組和安慰劑2組的年齡分別為（9.29±1.03）、（9.48±1.14）、（9.88±1.34）、（9.39±1.54）和（9.48±1.43）歲，男女性別比分別為0.67∶1、0.82∶1、4∶1、1∶1和1.31∶1，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（年齡：

F

=0.57，

P

=0.686，性別：確切概率法，

P

=0.093）?？傮w上，試驗(yàn)組和對(duì)照組的受試者的年齡和性別構(gòu)成基本均衡。

二、成人組的安全性

由表1可見，成人組中，接種1劑高劑量疫苗后共收集到7例不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為17.50%（7/40）；試驗(yàn)組5例發(fā)生不良反應(yīng)，安慰劑1和2組各1例，三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（確切概率法，

P

=0.642）。試驗(yàn)組出現(xiàn)1例2級(jí)不良反應(yīng)，其他6例均為1級(jí)不良反應(yīng)。試驗(yàn)組和安慰劑組均無(wú)3級(jí)不良反應(yīng)發(fā)生。

表1 成人組及兒童組口服1劑高劑量輪狀病毒疫苗不良反應(yīng)發(fā)生情況（例）

注：試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；安慰劑1組：口服不含抗原及抗酸劑安慰劑；安慰劑2組：口服不含抗原但含抗酸劑安慰劑

?

三、兒童組的安全性

兒童組中，接種1劑高劑量疫苗后共有16例發(fā)生不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為40.00%（16/40）。試驗(yàn)組共8例發(fā)生不良反應(yīng)，安慰劑1組和安慰劑2組分別有5例和3例發(fā)生不良反應(yīng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（確切概率法，

P

=0.646）。1級(jí)不良反應(yīng)發(fā)生試驗(yàn)組6例，安慰劑1組3例，安慰劑2組為2例；2級(jí)不良反應(yīng)發(fā)生試驗(yàn)組3例，安慰劑1組2例，安慰劑2組1例。試驗(yàn)組和安慰劑組均無(wú)3級(jí)不良反應(yīng)發(fā)生（表1）。

四、嬰兒組的安全性

嬰兒組中，接種3劑疫苗后共有73例發(fā)生可能與接種相關(guān)的不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為60.83%（73/120）。高、中、低劑量組分別有16例，13例和11例發(fā)生不良反應(yīng)；安慰劑1組和安慰劑2組的不良反應(yīng)發(fā)生率分別為50.00%（15/30）和60.00%（18/30），各組不良反應(yīng)發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ=5.00，

P

=0.287）。不良反應(yīng)主要為發(fā)熱和腹瀉，以1級(jí)不良反應(yīng)為主，中劑量組和高劑量組各有1例發(fā)生腹瀉，嚴(yán)重程度達(dá)到3級(jí)（表2）。

表2 6~12周齡嬰兒口服3劑輪狀病毒疫苗不良反應(yīng)發(fā)生率比較（例）

注：低劑量試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；中劑量試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；高劑量試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；安慰劑1組：口服不含抗原及抗酸劑安慰劑；安慰劑2組：口服不含抗原但含抗酸劑安慰劑

?

討 論

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、衛(wèi)生條件的改善及安全飲水的普及，細(xì)菌性感染導(dǎo)致的腹瀉病呈逐漸下降趨勢(shì)，而病毒性感染導(dǎo)致的腹瀉病則日趨嚴(yán)重，其中輪狀病毒成為5歲以下嬰幼兒重癥脫水性腹瀉的主要致病原。輪狀病毒主要通過(guò)糞-口途徑傳播，據(jù)報(bào)道我國(guó)5歲以下門診腹瀉兒童輪狀病毒檢出率為22.9%，而河北省盧龍縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)2013—2017年住院腹瀉兒童輪狀病毒檢出率為46.59%，輪狀病毒腹瀉給醫(yī)療保健系統(tǒng)和患兒家庭帶來(lái)巨大的負(fù)擔(dān)。研究顯示輪狀病毒疫苗可明顯降低輪狀病毒性胃腸炎，特別是重癥胃腸炎的發(fā)生率，接種疫苗是預(yù)防輪狀病毒感染最經(jīng)濟(jì)有效的辦法。WHO建議將輪狀病毒疫苗納入國(guó)家免疫規(guī)劃，因此迫切需要研發(fā)出安全、有效、成本效益更佳的疫苗。

中國(guó)輪狀病毒主要的流行株從1990年的G1型變?yōu)?000年的G3型，到2010年變?yōu)镚9型，提示一些亞型在我國(guó)的流行和變遷。武漢生物制品研究所研制的口服六價(jià)重配輪狀病毒活疫苗是全球首個(gè)包含6種血清型的輪狀病毒疫苗，本文對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，無(wú)論是成年人、兒童、還是嬰兒組，試驗(yàn)組的不良反應(yīng)發(fā)生率與對(duì)照組的不良反應(yīng)發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且不良反應(yīng)大多為1級(jí)，主要為發(fā)熱和腹瀉，與其他關(guān)于輪狀病毒疫苗的安全性研究報(bào)道相一致。本研究中的不良反應(yīng)發(fā)生率嬰幼兒組高于成人組，主要原因可能是嬰幼兒免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未成熟，容易受到疾病的侵襲，同時(shí)嬰幼兒接種過(guò)程中正值流行性感冒、急性胃腸炎等疾病流行期，但出現(xiàn)的腹瀉和發(fā)熱無(wú)法排除與疫苗無(wú)關(guān)，因此判定為與疫苗接種可能有關(guān)。

為了保護(hù)輪狀病毒進(jìn)入胃內(nèi)免受胃酸破壞，試驗(yàn)疫苗中添加有抗酸成分，考慮抗酸成分可能會(huì)對(duì)嬰兒有不良反應(yīng)，因此在本研究中設(shè)置了2個(gè)安慰劑組，安慰劑1不含抗酸成分，安慰劑2含抗酸成分。結(jié)果表明，安慰劑1和2組的不良反應(yīng)發(fā)生率無(wú)差異，說(shuō)明含有抗酸成分的安慰劑在受試者中具有良好的安全性。

根據(jù)《疫苗臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，Ⅰ期臨床試驗(yàn)是小范圍研究（20~30人），必要時(shí)，可采取高、中、低三種劑量，每組8~10人，觀察臨床耐受性。用于嬰幼兒的疫苗，在進(jìn)行人體安全性評(píng)價(jià)時(shí)，應(yīng)按先成人、后兒童、最后嬰幼兒的順序（各20~30人）分步進(jìn)行，本研究滿足以上規(guī)范要求，但是由于樣本量較小，可能無(wú)法觀察到罕見不良反應(yīng)，因此需要進(jìn)一步的大樣本研究來(lái)確認(rèn)其安全性和有效性。

利益沖突

所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

吳志偉：研究設(shè)計(jì)、收集數(shù)據(jù)、起草文章；周海松、潘璐璐、李敏捷、韓碧華、馬景臣、辛延濤、呂為剛、曲建民：研究實(shí)施、收集數(shù)據(jù)；趙玉良：研究設(shè)計(jì)、論文審閱、工作支持