HIV耐藥是導(dǎo)致艾滋病抗病毒治療失敗的重要原因之一。在2020版《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》繼續(xù)包含艾滋病耐藥檢測(cè)的內(nèi)容。關(guān)于艾滋病耐藥檢測(cè)我們要了解的哪些內(nèi)容呢？

什么是艾滋病耐藥

也稱艾滋病病毒（HIV）耐藥，是指由HIV遺傳變異引起的、對(duì)抗病毒藥物抑制作用敏感性降低或不敏感的現(xiàn)象。

艾滋病耐藥從何而來(lái)

（1）直接感染。當(dāng)感染的毒株為HIV耐藥毒株時(shí)，即發(fā)生了原發(fā)性耐藥，也稱傳播性耐藥。

（2）藥物選擇。HIV是一種復(fù)制速度快且極易變異的病毒，在沒(méi)有抗病毒藥物時(shí)，HIV耐藥突變株會(huì)隨機(jī)出現(xiàn)，但沒(méi)有復(fù)制優(yōu)勢(shì)，不會(huì)在體內(nèi)積累;在抗病毒治療時(shí)，當(dāng)藥物濃度不足時(shí)，HIV復(fù)制不能被完全抑制，HIV耐藥突變株的復(fù)制優(yōu)勢(shì)會(huì)顯現(xiàn)出來(lái)，繼而耐藥突變株逐漸積累增多，從而產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥，也稱獲得性耐藥。

艾滋病耐藥如何檢測(cè)

（1）基因型檢測(cè)。通過(guò)測(cè)序或基因芯片雜交等方法，檢測(cè)HIV基因組中是否有耐藥相關(guān)突變?；蛐蜋z測(cè)通常使用測(cè)序法，檢測(cè)流程如下：以HIV的基因組RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增目的基因片段，測(cè)序獲得HIV基因序列，與野生型序列進(jìn)行比對(duì)，判斷是否有耐藥相關(guān)基因突變，再通過(guò)耐藥數(shù)據(jù)庫(kù)的算法關(guān)聯(lián)耐藥程度。樣本類型可為血漿和干血斑。測(cè)序方法通常采用Sanger測(cè)序法，隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，也逐漸開始使用深度測(cè)序法。

（2）表型檢測(cè)。又稱體外藥敏實(shí)驗(yàn)，以50%抑制濃度（IC50）來(lái)表示，將待測(cè)毒株與野生型毒株的IC50比較，通過(guò)倍數(shù)改變（Fold change，F(xiàn)C）來(lái)評(píng)估耐藥程度。待測(cè)病毒可為直接從感染者體內(nèi)PBMC中分離培養(yǎng)的病毒，也可為含感染者HIV基因的重組病毒。

一般來(lái)說(shuō)，基因型檢測(cè)的操作更簡(jiǎn)單，而且檢測(cè)周期短，所以在臨床上使用得更多，但是表型檢測(cè)針對(duì)復(fù)雜突變和新型藥物的耐藥檢測(cè)更有優(yōu)勢(shì)。

基因型耐藥檢測(cè)結(jié)果如何看

（1）耐藥突變的表示方法。耐藥突變是HIV基因核苷酸序列的變化，但采用氨基酸的變化來(lái)表示，格式如下：野毒株的氨基酸+氨基酸的位置+突變后的氨基酸，如K103N，是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的第103位氨基酸從賴氨酸（K）突變?yōu)樘於０罚∟）。

（2）耐藥解釋系統(tǒng)。指具有耐藥程度算法的數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)算法可將耐藥突變結(jié)果轉(zhuǎn)換為耐藥程度。例如，在應(yīng)用較廣泛的Stanford HIVdb耐藥解釋系統(tǒng)中，K103N突變的耐藥程度為對(duì)奈韋拉平（NVP）和依非韋倫（EFV）高度耐藥。

HIV耐藥檢測(cè)的注意事項(xiàng)

（1）檢測(cè)時(shí)機(jī)。由于HIV極易突變，當(dāng)耐藥患者停藥或中斷治療時(shí)，體內(nèi)沒(méi)有抗病毒藥物時(shí)，野生株的復(fù)制優(yōu)勢(shì)顯現(xiàn)并逐漸積累，最后將檢測(cè)不出耐藥，因此耐藥檢測(cè)的最佳時(shí)機(jī)為患者正在抗病毒治療時(shí)，或中斷治療一個(gè)月內(nèi)。

（2）警惕樣本間交叉污染，檢測(cè)過(guò)程中需要設(shè)置空白和陰性對(duì)照，并通過(guò)序列進(jìn)化樹分析，排除交叉污染。

（3）未檢出耐藥突變時(shí)，不排除比例較低的耐藥毒株存在。這是因?yàn)楫?dāng)耐藥毒株在個(gè)體內(nèi)病毒準(zhǔn)種中的比例低于10～20%時(shí)，利用Sanger測(cè)序法通常檢測(cè)不到其存在。

（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心）