葉 明,郭術(shù)俊,王成輝,趙 萍,謝長好

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種可累及多系統(tǒng)器官的自身免疫性疾病，病人體內(nèi)產(chǎn)生的多種自身抗體是導致SLE病理性損害的關鍵原因，而B細胞活化產(chǎn)生自身抗體過程中需要活化T細胞的輔助。已有研究[1-2]表明，T淋巴細胞活化需要抗原信號(第一信號)和共刺激信號(第二信號)的共同作用，其中B7/CD28、CD137L/CD137是T細胞活化最重要的共刺激信號，其在SLE病人淋巴細胞上的表達可能影響著疾病的發(fā)生發(fā)展。同時，淋巴細胞共刺激分子在一定條件下可從細胞表面脫落至血清中成為可溶性分子，其在SLE病人血清中含量變化情況以及與病情活動性的關系尚不清楚。本研究檢測了SLE病人血清中可溶性CD28(sCD28)、可溶性CD137(sCD137)的含量，并以正常對照組做比較，探討其與SLE臨床表現(xiàn)、相關實驗室指標以及病情活動性的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年6月至2020年10月在蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院風濕免疫科確診的SLE病人54例，所有病人臨床診斷均符合1997年美國風濕病學會修訂的系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類標準，并除外其他全身性疾病和感染性疾病。其中男3例，女51例；年齡18～63歲，平均年齡(32.5±10.7)歲。入選病人均知情，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意。同時選擇蚌埠市中心血站健康獻血員26名組成健康對照組，其中男4名，女22名；年齡20～50歲，平均年齡(30.6±9.5)歲。2組在年齡、性別構(gòu)成等方面均具有可比性。

1.2 分組 收集SLE病人臨床資料及實驗室檢測數(shù)據(jù)，根據(jù)SLE疾病活動指數(shù)(SLEDAI-2000)評分,采用歐洲抗風濕病聯(lián)盟(EULAR)提出的標準，將疾病活動分為輕度活動組(SLEDAI-2000≤6分，n=24)、中度活動組(SLEDAI-2000為7～12分，n=22)和重度活動組(SLEDAI-2000>12分，n=8)[3-4]。

1.3 方法 抽取SLE病人外周靜脈血2 mL，離心分離出血清，-80 ℃保存。同上，收集健康對照外周靜脈血2 mL，離心分離出血清，-80 ℃保存。實驗時取出凍存SLE病人和健康對照血清標本至室溫解凍、離心。采用生物素-親和素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(BA-ELISA)分別檢測血清sCD28、sCD137含量。試劑盒購自Invitrogen公司，嚴格按照說明書進行操作，反應終止后用酶標儀在450 nm波長處測量吸光度值。以不同含量CD28、CD137標準品對應OD值分別制作標準曲線(見圖1、2)，根據(jù)標準曲線計算樣本sCD28、sCD137含量。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用t檢驗、χ2檢驗、方差分析和q檢驗。

2 結(jié)果

2.1 SLE病人組和健康對照組血清sCD28、sCD137的含量比較 SLE病人組血清sCD28和sCD137水平均顯著高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)(見表1)。

表1 2組血清sCD28、sCD137的含量比較

2.2 不同活動度SLE病人組血清sCD28、sCD137的含量比較 SLE中度活動組血清sCD28和sCD137水平均高于輕度活動組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；SLE重度活動組血清sCD28和sCD137水平均高于中度活動組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)(見表2)。

表2 不同活動度SLE病人血清sCD28、sCD137水平及SLEDAI評分

2.3 SLE病人外周血sCD28和sCD137水平與SLEDAI評分和實驗室指標的相關性分析 SLE病人sCD28、sCD137的水平與SLEDAI評分、抗核抗體(ANA)水平呈正相關，與C3水平呈負相關(P<0.01)(見表3)。

表3 SLE病人血清sCD28、sCD137水平與SLEDAI評分和實驗室指標相關性(r)

3 討論

T細胞與B細胞相互作用是發(fā)揮其免疫功能的基礎，其活化及功能異常在SLE的發(fā)生發(fā)展中起著十分重要的作用。已有研究[5]表明，T細胞表面CD28與抗原提呈細胞(antigen presenting cell，APC)表面的B7-1/B7-2結(jié)合，在T細胞活化中起關鍵的共刺激作用，但它主要在T細胞活化的早期起作用。用抗CD28 Fab′片段治療NZB / NZW F1小鼠，發(fā)現(xiàn)可明顯阻斷狼瘡性腎炎的發(fā)展和延長生存期[6]。CD137(又稱4-1BB)是近年發(fā)現(xiàn)的T細胞活化的又一重要的共刺激分子，表達在T細胞表面的CD137與APC表面的CD137L結(jié)合，主要作用在反應的后階段、CD28表達下調(diào)時支持T細胞活化，提示其可能在長期免疫反應下起延長免疫應答的作用，與SLE的發(fā)病有密切關系[7-8]。

已知存在于T淋巴細胞表面的sCD28、sCD137等共刺激分子在一定條件下可從細胞表面脫落至血清中。SLEDAI是評估SLE病情嚴重程度和活動性指標，其評分越高活動度越大，病情越嚴重[4]。本研究按照EULAR提出的標準，將病人分為輕度活動組、中度活動組和重度活動組。結(jié)果顯示，3組之間sCD28和sCD137的水平均有明顯差異，與病人SLEDAI評分呈正相關。同時分析SLE病人實驗指標發(fā)現(xiàn)，血清高水平sCD28、sCD137與病人的血清ANA水平呈正相關，與血清C3水平呈負相關，提示sCD28、sCD137的水平變化與病情活動度及自身抗體的產(chǎn)生有一定相關性。

已有研究[9]表明，SLE病人T淋巴細胞表面CD28、CD137等共刺激信號分子表達有所增加，與SLE病人自身抗體產(chǎn)生密切相關。但SLE病人免疫細胞在受到抗原刺激后活化及分泌細胞因子的功能反而有所降低[10]，分析可能與病人脫落至血清中sCD28、sCD137有關。sCD28、sCD137雖脫落但保持其完整結(jié)構(gòu)，可與活化APC表達的B7、CD137L結(jié)合，阻斷或減少了B7、CD137L與T細胞表面CD28、CD137的結(jié)合能力，從而減弱了第二信號的傳遞，影響機體正常細胞免疫功能發(fā)揮，其有關機制及意義有待進一步研究探討。

綜上所述，SLE病人血清sCD28、sCD137的含量與SLE病情活動、自身抗體產(chǎn)生等有明顯相關性，有望作為判斷病情活動的指標之一。但SLE病人往往病程較長、常合并感染及其他并發(fā)癥，其含量變化受多方面因素影響，有待進一步觀察分析。