馬博，周軍，李建剛，王俊

[1.新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 普外科，新疆 烏魯木齊 830063；2.中山大學(xué)第二附屬醫(yī)院（孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院）普外科，廣東 廣州 510120]

結(jié)直腸癌是一種源于大腸腺上皮的下消化道惡性腫瘤，發(fā)病率及病死率居高不下[1-2]。目前結(jié)直腸癌的臨床治療方案中以根治術(shù)應(yīng)用較廣泛，通過(guò)切除肉眼可見(jiàn)癌變病灶及部分相鄰癌旁組織，以提高治愈率或延長(zhǎng)生存期。但近年來(lái)研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，多數(shù)患者無(wú)法達(dá)到臨床預(yù)期[3]。相關(guān)研究認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展涉及遺傳或表觀遺傳等多種基因變異層面，因此尋找一項(xiàng)或多項(xiàng)上游調(diào)控因素，對(duì)預(yù)測(cè)腫瘤進(jìn)展具有重要的參考價(jià)值[4]。

核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1（special A-T rich sequence binding protein 1,SATB1）是SATB 家族成員之一，可通過(guò)結(jié)合特定序列DNA，誘導(dǎo)形成染色質(zhì)環(huán)，為基因表達(dá)調(diào)控的染色質(zhì)空間相互作用提供平臺(tái)。SATB1 還可介導(dǎo)染色質(zhì)重塑因子和蛋白修飾酶，改變對(duì)應(yīng)染色質(zhì)區(qū)段的染色質(zhì)構(gòu)象，調(diào)控基因組功能。既往研究結(jié)果表明，SATB1 在實(shí)體瘤生成、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的調(diào)控作用[5]。色素框蛋白7（chromobox 7,CBX7）是表觀遺傳調(diào)控復(fù)合物多梳蛋白家族（polycomb group,PcG）中的成員之一，與其他家族成員具有共同結(jié)構(gòu)域N 端的染色質(zhì)區(qū)，可參與基因表達(dá)和異染色質(zhì)的調(diào)控，在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)下調(diào)[6]。近年來(lái)，SATB1、CBX7 表達(dá)與實(shí)體瘤進(jìn)展的關(guān)系一直是臨床研究的熱題，但其能否準(zhǔn)確預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)尚處于求證階段。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

回顧性分析2018年4月—2021年2月新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的104 例行結(jié)直腸癌根治術(shù)患者的臨床資料，取其留存的癌組織蠟塊進(jìn)行分析。其中，女性47 例，男性57 例；年齡47～76 歲，平均（63.15±4.02）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)①符合《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）》[7]結(jié)直腸癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；②行結(jié)直腸癌根治術(shù)，并保留癌組織；③年齡＞18 歲；④臨床分期Ⅰ、Ⅳ期；⑤卡氏功能狀態(tài)評(píng)分≥60 分；⑥臨床資料完整。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)①肝臟、骨骼等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或合并其他惡性腫瘤；②合并結(jié)腸息肉等良性疾?。虎鄹?、腎衰竭；④自身免疫性疾?。虎菪g(shù)前接受化療等標(biāo)準(zhǔn)化抗腫瘤治療方案；⑥預(yù)期生存期＜6 個(gè)月。

1.3 臨床資料收集

在患者術(shù)后住院期間收集并整理患者的臨床資料，包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)（body mass index,BMI）、合并癥（糖尿病、高血壓等）、腫瘤部位、臨床分期、腫瘤分化類(lèi)型、腫瘤生長(zhǎng)方式、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵犯、脈管侵犯等。

1.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)SATB1、CBX7的表達(dá)

術(shù)中留存標(biāo)本石蠟包埋，4 μm 厚切片。將切片放置恒溫箱中60℃烘烤30 min 后取出，二甲苯梯度浸泡，10 min/次，依次用95%、75%乙醇浸泡，5 min/次，然后蒸餾水浸泡5 min。在切片上滴加適量3%雙氧水溶液，維持10 min 消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。PBS 沖洗3 次，5min/次。置于pH=6.0 的枸櫞酸緩沖液中，水浴煮沸5 min，保溫10 min 修復(fù)抗原。冷卻后PBS 沖洗3 次，5 min/次。加入羊血清孵育10 min 后，分別添加CBX7 一抗（1∶100）和SATB1 一抗（1∶1 000）2 滴，4℃恒溫過(guò)夜。PBS 沖洗3 次，5 min/次。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，維持10 min。PBS 沖洗3 次，5 min/次。切片中滴加1 滴DBA 顯色液，室溫顯色1 min，待切片呈中度棕褐色后用自來(lái)水沖洗。蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封片、鏡檢。

結(jié)果評(píng)估：SATB1、CBX7 均定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色或棕褐色，由2 位臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師共同閱片。

陽(yáng)性細(xì)胞范圍得分：陽(yáng)性細(xì)胞范圍為0%計(jì)0 分、＜25% 計(jì)1 分、25%～＜50% 計(jì)2 分、50%～75%計(jì)3 分、＞75%計(jì)4 分；染色強(qiáng)度得分：不著色計(jì)0 分、淡黃色計(jì)1 分、黃色計(jì)2 分、黃褐色計(jì)3 分。陽(yáng)性細(xì)胞范圍得分×染色強(qiáng)度得分≥1 分為陽(yáng)性，＜1 分為陰性。

1.5 隨訪及預(yù)后分組

兩組患者均隨訪12 個(gè)月，每3 個(gè)月復(fù)查1 次，隨訪時(shí)間截至2022年2月1日，期間經(jīng)影像學(xué)或病理檢查發(fā)現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移均記錄為術(shù)后復(fù)發(fā)，作為復(fù)發(fā)組；預(yù)后良好無(wú)復(fù)發(fā)者作為未復(fù)發(fā)組。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；采用多因素Logistic 回歸分析結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)因素；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線評(píng)估SATB1、CBX7 表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后復(fù)發(fā)結(jié)局

104 例結(jié)直腸癌患者中73 例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為70.19%。

2.2 影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析

復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組性別、年齡、BMI、合并癥（糖尿病、高血壓）、腫瘤部位、腫瘤生長(zhǎng)方式、神經(jīng)侵犯、脈管侵犯比較，經(jīng)t或χ2檢驗(yàn)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組臨床分期、腫瘤分化類(lèi)型、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SATB1 和CBX7 表達(dá)情況比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），復(fù)發(fā)組臨床分期Ⅲ和Ⅳ期、腫瘤低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SATB1陽(yáng)性表達(dá)、CBX7 陽(yáng)性表達(dá)、SATB1 和CBX7 均陽(yáng)性表達(dá)占比均高于未復(fù)發(fā)組，SATB1、CBX7 均陰性表達(dá)占比低于未復(fù)發(fā)組。見(jiàn)表1。

表1 影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析

續(xù)表1

2.3 影響結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素分析

多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，臨床分期Ⅲ和Ⅳ期、腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SATB1 陽(yáng)性表達(dá)及CBX7 陽(yáng)性表達(dá)均為結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表2、3。

表2 賦值表

表3 影響結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素Logistic回歸分析參數(shù)

2.4 SATB1、CBX7表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)分析

ROC 曲線結(jié)果顯示，SATB1 陽(yáng)性、CBX7 陽(yáng)性、SATB1 和CBX7 均陽(yáng)性、SATB1 和CBX7 均陰性預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積（area under curve,AUC）分別為0.640（95% CI：0.524，0.756）、0.659（95% CI：0.546，0.771）、0.739（95% CI：0.641，0.837）和0.743（95% CI：0.633，0.853）。見(jiàn)表4和圖1。

圖1 ATB1、CBX7預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC曲線

表4 SATB1、CBX7表達(dá)預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的效能分析

3 討論

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快及人們飲食習(xí)慣的改變，結(jié)直腸癌發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì)，且病死率極高，嚴(yán)重危及患者的生命安全[8-9]。根治性切除術(shù)雖然可有效提高部分早期結(jié)直腸癌治愈率，但是臨床上以中晚期結(jié)直腸癌患者占比較多，預(yù)后不佳[10-11]。因此如何進(jìn)一步監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌患者的病情進(jìn)展或預(yù)后復(fù)發(fā)，成為改善患者預(yù)后、延長(zhǎng)生存期的治療方向。部分病理學(xué)及遺傳學(xué)學(xué)者研究得出，惡性腫瘤的進(jìn)展極大可能取決于環(huán)境、基因等相關(guān)因素的聯(lián)合調(diào)控，因此可通過(guò)甄別基因變異上游的相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)，間接評(píng)估腫瘤進(jìn)展[12-13]。相關(guān)研究報(bào)道，實(shí)體瘤中SATB1、CBX7 蛋白特異性表達(dá)，且SATB1、CBX7 均參與遺傳或表觀遺傳的表達(dá)過(guò)程[14-15]。

本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率為70.19%，提示結(jié)直腸癌患者術(shù)后仍存在較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)定期復(fù)診。多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，SATB1 陽(yáng)性表達(dá)、CBX7 陽(yáng)性表達(dá)均為結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。SATB1 表達(dá)水平可影響結(jié)直腸癌的預(yù)后，可能與SATB1 調(diào)控下游靶基因有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，T 細(xì)胞中SATB1 可復(fù)合細(xì)胞膜中黏附因子β-catenin，從而乙酰化組蛋白H3 賴氨酸9（histone H3 lysine9,H3K9），調(diào)控下游靶基因[16]。還有研究發(fā)現(xiàn)SATB1 除可調(diào)控H3K9 的乙?；^(guò)程外，還可從表觀遺傳層面參與招募核轉(zhuǎn)錄因子等過(guò)程，干預(yù)腫瘤相關(guān)蛋白表達(dá)，增強(qiáng)促癌基因活性，下調(diào)抑癌基因，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率增加[17]。而CBX7 可影響結(jié)直腸癌患者復(fù)發(fā)可能與其參與胚胎干細(xì)胞分化途徑有關(guān)。在胚胎干細(xì)胞增殖階段，CBX7 表達(dá)可動(dòng)態(tài)維持胚胎干細(xì)胞的自我更新及多向分化等多功能特性；當(dāng)胚胎干細(xì)胞進(jìn)入分化階段后，CBX7 被家族中CBX4、CBX2 等同類(lèi)取代，而CBX家族中此類(lèi)調(diào)控循環(huán)對(duì)維持細(xì)胞持續(xù)分化和腫瘤形成具有重要推動(dòng)作用[18]。有研究報(bào)道，CBX7 與高遷移率蛋白A1 發(fā)揮協(xié)同作用，加速癌前病變進(jìn)展至結(jié)腸癌[19]。本研究結(jié)果顯示，臨床分期Ⅲ和Ⅳ期、腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均提示結(jié)直腸癌患者病情進(jìn)展較快，可增加患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。且本研究Ⅰ、Ⅱ期患者術(shù)后復(fù)發(fā)率略高于既往研究，筆者認(rèn)為可能與患者神經(jīng)侵犯、脈管侵犯等有關(guān)。ROC 曲線結(jié)果顯示，SATB1、CBX7 表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)具有較高的預(yù)測(cè)效能，且SATB1、CBX7 均陰性及SATB1、CBX7 均陽(yáng)性預(yù)測(cè)效能更高，進(jìn)一步證實(shí)SATB1、CBX7 表達(dá)與結(jié)直腸癌的預(yù)后進(jìn)展密切相關(guān)。

本研究的不足之處：未對(duì)結(jié)直腸癌患者的癌旁組織進(jìn)行分析篩查，其是否同樣存在SATB1、CBX7異常表達(dá)暫未可知；其次，本研究納入樣本量有限，后續(xù)可開(kāi)展大樣本隨機(jī)對(duì)照研究證實(shí)本結(jié)論。綜上所述，SATB1、CBX7 表達(dá)預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)效能較高，且聯(lián)合預(yù)測(cè)效能更高。