賈 哲，桑志祥，張夢(mèng)馨，丁凌霄，徐海軍

（皖西學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，安徽 六安 237000）

鞣花酸又名沒食子酸，廣泛存在于水果和堅(jiān)果中，比如石榴、葡萄、核桃、草莓等。鞣花酸具有抗炎、抗氧化、抗癌、抑菌、調(diào)控細(xì)胞周期、保護(hù)胃腸道和緩解機(jī)體中毒病理變化等生物活性[1-2]。李佳豪等[3]在1歲純血馬日糧中添加30 mg·kg-1體重的鞣花酸，發(fā)現(xiàn)鞣花酸可促進(jìn)消化利用率及營養(yǎng)物質(zhì)的沉積，并顯著提高馬匹總增重及日增重。孫慧等[4]研究發(fā)現(xiàn)鞣花酸能夠改善由馬兜鈴酸Ⅰ引起的小鼠急性腎損傷，并發(fā)現(xiàn)鞣花酸能通過抑制小鼠腎臟NF-κB通路，降低炎癥因子水平，從而達(dá)到緩解腎臟損傷。龍毅等[5]通過連續(xù)灌胃小鼠14 d不同濃度的鞣花酸后，進(jìn)行腹腔注射四氯化碳（CCl4）造模，發(fā)現(xiàn)鞣花酸能夠顯著降低模型小鼠血漿中丙二醛（MDA）水平，并顯著提高超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）及過氧化氫酶（CAT）水平，表明鞣花酸可能通過抗自由基和抑制脂質(zhì)過氧化機(jī)制來緩解肝臟損傷。黃小霞[6]通過鞣花酸對(duì)慢性應(yīng)激模型小鼠的影響研究發(fā)現(xiàn)，鞣花酸能夠降低小鼠血液中炎性因子水平，能夠改善氨基酸代謝、脂代謝和腸道菌群來緩解小鼠慢性應(yīng)激。脂多糖（Lipopolysacccharide，LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，LPS可以激活機(jī)體免疫反應(yīng)，繼而促進(jìn)炎癥介質(zhì)的生成。若LPS過量刺激機(jī)體時(shí)，則會(huì)導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)[7]。有研究表明鞣花酸可以緩解脂多糖誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)，降低細(xì)胞分泌炎癥因子濃度[8]，但關(guān)于鞣花酸對(duì)脂多糖應(yīng)激炎癥模型血常規(guī)影響的報(bào)道較少。因此，本研究以腹腔注射脂多糖小鼠建立應(yīng)激炎癥模型，研究鞣花酸對(duì)脂多糖所致小鼠應(yīng)激模型血常規(guī)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明小白鼠45只，體重（20±2）g，購自安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)環(huán)境溫度為24～26℃，濕度55%～65%，自由飲食。

1.2 試劑和儀器

鞣花酸，購于五峰赤誠生物科技股份有限公司；邁瑞B(yǎng)C-2800VET型血細(xì)胞分析儀，購自深圳邁瑞動(dòng)物醫(yī)療科技股份有限公司；LPS，購自白鯊科技有限公司。

1.3 動(dòng)物分組與給藥方法

將45只小鼠隨機(jī)分為3組，即空白組（CT）、脂多糖模型組（LMT）和鞣花酸組（EAT），每組15只?？瞻捉M和脂多糖模型組正常飼喂鼠糧，鞣花酸組鼠糧添加1 g·kg-1鞣花酸，飼喂15 d后稱重，并分別對(duì)脂多糖模型組和鞣花酸組小鼠按照1 mg·kg-1體重的劑量腹腔注射脂多糖，空白組小鼠腹腔注射對(duì)應(yīng)體積的生理鹽水。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

腹腔注射脂多糖6 h后進(jìn)行水合氯醛麻醉，處死小鼠，采集抗凝血。

1.4.1 小鼠器官指數(shù)

處死小鼠后，分別采集小鼠心臟、肝臟、腎臟和脾臟并稱重，器官指數(shù)=器官重量/小鼠體重。

1.4.2 血常規(guī)指標(biāo)

按照邁瑞B(yǎng)C-2800VET型血細(xì)胞分析儀要求，檢測(cè)采集的抗凝血液樣本，測(cè)定小鼠白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量及血紅蛋白、血細(xì)胞比容和平均紅細(xì)胞容積等指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，P＜0.05表示差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 鞣花酸對(duì)小鼠體重的影響

飼養(yǎng)15 d后，測(cè)定小鼠體重，結(jié)果見表1，鞣花酸組小鼠體重較CT組和LMT組有所增加，但差異不顯著（P＞0.05）。

表1 鞣花酸對(duì)小鼠體重的影響g

2.2 鞣花酸對(duì)器官指數(shù)的影響

器官指數(shù)測(cè)定結(jié)果見表2，LMT組脾臟指數(shù)較CT組、EAT組有顯著性提高（P＜0.05）；其他臟器指數(shù)各組間無差異性差異（P＞0.05）。

表2 鞣花酸對(duì)小鼠各器官指數(shù)的影響%

2.3 鞣花酸對(duì)小鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

2.3.1 鞣花酸對(duì)LMT組小鼠白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的影響

LMT組小鼠的白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比顯著高于CT組、EAT組小鼠（P＜0.05），EAT組小鼠白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比顯著高于CT組（P＜0.05）。LMT、EAT組小鼠淋巴細(xì)胞數(shù)比CT組小鼠有所降低，但差異不顯著（P＞0.05）。LMT小鼠淋巴細(xì)胞百分比顯著低于CT組和EAT組小鼠（P＜0.05)；單核細(xì)胞百分比各組間比較無顯著性差異變化（P＞0.05）。見表3。

表3 鞣花酸對(duì)小鼠白細(xì)胞的影響

2.3.2 鞣花酸對(duì)小鼠紅細(xì)胞的影響

EAT、CT和LMT各組間RBC、HGB和HCT數(shù)值無顯著性差異（P＞0.05），LMT小鼠MCV較CT組有顯著性升高（P＜0.05）。見表4。

表4 鞣花酸對(duì)小鼠紅細(xì)胞的影響

3 討論與結(jié)論

炎癥是與很多疾病密切相關(guān)的基礎(chǔ)病理過程之一，LPS作為革蘭陰性菌細(xì)胞壁的主要成分之一，可以誘發(fā)炎癥細(xì)胞因子和相關(guān)炎癥介質(zhì)的大量釋放，進(jìn)而引起全身失控性炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致休克而死亡。目前研究已有較多途徑通過LPS來構(gòu)建不同疾病或器官炎癥模型[9-11]。鐘友寶[12]對(duì)仔豬使用LPS腹腔注射發(fā)現(xiàn)初期LPS會(huì)引起仔豬嘔吐腹瀉、食欲降低、體溫上升等癥狀，仔豬脾臟重及指數(shù)明顯增大，并引起外周血細(xì)胞成分發(fā)生變化，細(xì)胞數(shù)量和比例發(fā)生顯著變化。本試驗(yàn)按照1 mg·kg-1進(jìn)行腹腔注射脂多糖來建立急性炎癥模型，注射后小鼠出現(xiàn)蜷縮、不喜活動(dòng)等現(xiàn)象。血常規(guī)結(jié)果顯示：LMT組小鼠的白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比顯著高于CT、EAT組小鼠（P＜0.05），LMT組小鼠淋巴細(xì)胞數(shù)比CT組小鼠有所降低，差異不顯著（P＞0.05）。LMT組小鼠淋巴細(xì)胞百分比顯著低于CT組小鼠（P＜0.05）；單核細(xì)胞百分比無顯著性差異（P＞0.05）。表明腹腔注射LPS能顯著提高小鼠血液白細(xì)胞數(shù)目，其中以中性粒細(xì)胞升高為主。結(jié)合注射后小鼠行為變化、器官指數(shù)及血細(xì)胞的變化，說明腹腔注射LPS構(gòu)建的小鼠急性炎癥模型構(gòu)建成功。

鞣花酸具有抗炎、抗氧化、抗癌、抑菌、調(diào)控細(xì)胞周期、保護(hù)胃腸道、緩解機(jī)體中毒病理變化等生物活性。趙銘偉等[8]在斷奶仔豬日糧中添加鞣花酸發(fā)現(xiàn)鞣花酸可提高仔豬日增重、降低腹瀉率、改善胃腸道菌群，并在體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，50 μg·mL-1的鞣花酸能夠顯著降低LPS誘導(dǎo)的IPEC-J2細(xì)胞炎癥水平。通過本研究發(fā)現(xiàn)，鞣花酸對(duì)小鼠生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，能夠提高小鼠體重，但差異不顯著。該結(jié)果可能與小鼠自身體重小，在生長(zhǎng)過程中體重變化區(qū)間較小且個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育有差異性有關(guān)，雖能發(fā)現(xiàn)鞣花酸對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能有促進(jìn)作用，但差異不顯著。后續(xù)試驗(yàn)可考慮在生長(zhǎng)發(fā)育較快的動(dòng)物上進(jìn)一步探究其能否提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能。脾臟是重要免疫器官，在清除和吞噬血液中病原時(shí)易遭受損傷而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[13]。鐘友寶[12]研究發(fā)現(xiàn)腹腔注射LPS后，豬脾臟出現(xiàn)充血腫大，造成脾臟指數(shù)升高。雷媛娣[14]研究發(fā)現(xiàn)鞣花酸能通過抗氧化和抗凋亡途徑明顯改善硫酸鈹所致大鼠的脾臟病理變化，降低硫酸鈹染毒組的脾臟指數(shù)并抑制脾淋巴細(xì)胞異常增殖。本研究發(fā)現(xiàn)EAT組小鼠的脾臟指數(shù)較LMT顯著性降低，表明鞣花酸對(duì)脂多糖應(yīng)激造成的脾臟損傷有一定的保護(hù)作用。白細(xì)胞作為反應(yīng)機(jī)體重要的血液炎癥指標(biāo)，有研究發(fā)現(xiàn)鞣花酸能夠降低BeSO4免疫損傷模型大鼠模型白細(xì)胞總數(shù)。曾鴻芳等[15]使用中藥天抗對(duì)LPS炎癥模型進(jìn)行研究，結(jié)果能夠降低脾臟指數(shù)、降低血液中炎癥因子的表達(dá)水平來緩解機(jī)體炎癥反應(yīng)。對(duì)于本試驗(yàn)中外周血細(xì)胞的變化，較LMT而言，EAT小鼠的白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞百分比和平均紅細(xì)胞體積均有顯著性降低，與雷媛娣[14]的研究結(jié)果一致。說明鞣花酸能夠降低LPS對(duì)小鼠造成的應(yīng)激反應(yīng)，緩解機(jī)體炎癥反應(yīng)，對(duì)小鼠有一定的保護(hù)作用，但具體通過何種途徑產(chǎn)生的作用仍有待進(jìn)一步探究。