李嘉敬，韋明肯，盧勇杰，陳心如，鄺春議，朱 穎，孫 巍

廣東石油化工學(xué)院，生物與食品工程學(xué)院，廣東 茂名 525000

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑與儀器材料

福晨(天津)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的4-氨基苯磺酰胺(分析純)，天津大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)的N-(1-萘基)-乙二胺二鹽酸鹽(分析純)、亞硝酸鹽鈉(分析純)、高錳酸鉀(分析純)、草酸鈉(優(yōu)級(jí)純)，西隴科學(xué)股份有限公司生產(chǎn)的三氯甲烷(分析純)、磷酸(分析純)、硫酸(分析純)。

實(shí)驗(yàn)室級(jí)超純水機(jī)(南京易普達(dá)科技發(fā)展有限公司)、酶標(biāo)儀(BIO-RAD imark酶標(biāo)儀)、移液槍(Eppendorf艾本德)、移液器槍頭(RonMark 榮碼)。

1.1.2 試劑配制

顯色劑：于100 mL燒杯中加入25 mL純水，然后移入5 mL磷酸，再加入4 g 4-氨基苯磺酰胺，將0.2 g N-(1-萘基)-乙二胺二鹽酸鹽溶解，轉(zhuǎn)移到100 mL的容量瓶中定容，加純水稀釋到標(biāo)線，搖勻，貯于一個(gè)棕色的試劑玻璃瓶中避光低溫2～5 ℃保存。

磷酸：使用15 mol/L(質(zhì)量濃度1.70 g/mL)磷酸。

高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(1/5 K2MnO4,0.05 mol/L)：于1 000 mL燒杯中將0.8 g高錳酸鉀溶于600 mL的純水中，再煮沸0.5～1 h，使體積降至500 mL左右，放置一個(gè)晚上后，用漏斗過濾，貯于一個(gè)棕色的試劑玻璃瓶中避光保存。

草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(1/2 Na2C2O4,0.050 mol/L)：于100 mL燒杯中將經(jīng)烘箱105 ℃烘燒2 h的無水草酸鈉(GR)0.335 g溶于75 mL純水中，轉(zhuǎn)移到100 mL的容量瓶中定容，加純水稀釋到標(biāo)線，搖勻，貯于玻璃瓶中保存。

亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)貯備液(質(zhì)量濃度 250 mg/L)：于100 mL 燒杯中將0.123 2 g亞硝酸鈉溶于15 mL純水中，轉(zhuǎn)移到100 mL的容量瓶中定容，加純水稀釋到標(biāo)線，搖勻，貯于一個(gè)棕色的試劑玻璃瓶中避光低溫2～5 ℃保存一個(gè)月。

硫酸：使用18 mol/mL(質(zhì)量濃度 1.84 g/mL)硫酸。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 反應(yīng)體系的體積優(yōu)化設(shè)計(jì)

1.2.2 小體系反應(yīng)的顯色時(shí)間優(yōu)化設(shè)計(jì)

1.2.3 小體系反應(yīng)的顯色劑用量?jī)?yōu)化設(shè)計(jì)

1.2.4 小體系反應(yīng)適用的pH范圍

1.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制與樣品測(cè)定方法

按照國(guó)標(biāo)的測(cè)定方法，繪制小體系下分光光度法的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

2)加入20 μL顯色劑，混勻，反應(yīng)20 min。

3)用1 mL移液槍移0.3 mL待測(cè)樣液到標(biāo)準(zhǔn)平底96孔酶標(biāo)板中，放入酶標(biāo)儀內(nèi)在540 nm的波長(zhǎng)下測(cè)定各個(gè)待測(cè)樣液的吸光度(Ab)，記錄待測(cè)樣液的吸光度。

1.4.2 新方法實(shí)測(cè)環(huán)境樣品的準(zhǔn)確性驗(yàn)證

2 結(jié)果與討論

2.1 小體系測(cè)定體積優(yōu)化

圖1 不同體積對(duì)測(cè)定含量的影響Fig.1 Effect of different volumes ondetermination of content

2.2 小體系測(cè)定顯色時(shí)間優(yōu)化

圖2 不同顯色時(shí)間對(duì)小體系測(cè)定含量的影響Fig.2 Effect of different color developmenttime on determination of content in small system

2.3 小體系測(cè)定顯色劑用量?jī)?yōu)化

圖3 不同顯色劑用量對(duì)小體系測(cè)定含量的影響Fig.3 Effect of different amount of developer ondetermination of content in small system

2.4 pH對(duì)小體系反應(yīng)的影響

圖4 不同pH對(duì)小體系測(cè)定含量的影響Fig.4 Effect of different pH on determination of content in small system

2.6 小體系測(cè)定的線性檢測(cè)范圍

圖5 小體系與國(guó)標(biāo)法測(cè)定含量的線性擬合與正交擬合驗(yàn)證曲線Fig.5 Linear fitting and orthogonal fittingverification curve for determination of content by small system andnational standard method

2.7 樣品中實(shí)測(cè)的準(zhǔn)確性驗(yàn)證

圖6 小體系快速測(cè)定淡水中的濃度范圍Fig.6 Concentration range of in freshwater quickly determined by small system

表1 小體系與國(guó)標(biāo)法測(cè)定環(huán)境樣品含量的結(jié)果比較Table 1 Comparison of determination results of in environmental samples by small systemand national standard method

3 結(jié)論