霍佳歡，郭思柔，栗佳寧，王建華，溫曉蕾，馮麗娜，齊慧霞*

（1板栗產(chǎn)業(yè)技術(shù)教育部工程研究中心 秦皇島 066004；2河北科技師范學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院/河北省作物逆境生物學(xué)重點實驗室（籌））

板栗富含多種維生素及礦物質(zhì)，具有補脾健胃，緩解高血壓、冠心病等功效[1]。作為板栗原產(chǎn)國，近年來我國板栗栽培面積和產(chǎn)量穩(wěn)定增長，均居世界首位，據(jù)統(tǒng)計，2018年我國板栗種植面積達(dá)34.1萬hm2，總產(chǎn)量高達(dá)196.5萬t[2]。伴隨板栗產(chǎn)業(yè)高速發(fā)展，板栗病害也愈發(fā)嚴(yán)重，在貯存不當(dāng)?shù)那闆r下板栗內(nèi)腐病造成種仁腐爛率高達(dá)50%左右，嚴(yán)重制約板栗經(jīng)濟(jì)效益的穩(wěn)定和提升[3]。

加強板栗內(nèi)腐病的防治是提高板栗品質(zhì)的重要環(huán)節(jié)，目前化學(xué)防治仍是防治板栗內(nèi)腐病的重要手段。本試驗針對兩種板栗內(nèi)腐病菌進(jìn)行了有效藥劑篩選，旨在為田間開展防治板栗內(nèi)腐病工作提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料 供試殺菌劑相關(guān)信息見表1。供試菌株為可可毛色二孢菌（L.theobromae）、茄病鐮刀菌（F.solani）。

表1 供試殺菌劑名稱及使用濃度

1.2 方法

1.2.1 室內(nèi)殺菌劑初篩 采用生長速率法[4]測定不同殺菌劑對L.theobromae和F.solani的抑制效果，針對2種致病菌株選用了7種殺菌劑，分別采用7種殺菌劑推薦使用的濃度作為中間濃度，進(jìn)行室內(nèi)抑菌試驗，篩選出對致病菌株抑制效果較好的殺菌劑。

1.2.2 殺菌劑室內(nèi)毒力測定 室內(nèi)殺菌劑初篩試驗后，對L.theobromae和F.solani抑制效果較好的殺菌劑，設(shè)置5種不同濃度進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，同樣采用生長速率法測定。將供試菌株在PDA平板上純化培養(yǎng)，選用直徑7 mm的打孔器從菌落外緣打取菌餅備用。在無菌環(huán)境下，將殺菌劑用無菌水稀釋到所需濃度后，添加到裝有100 mL PDA培養(yǎng)基的錐形瓶中，迅速搖勻，分裝于9 cm培養(yǎng)皿中，殺菌劑使用濃度見表2、表3，每個濃度重復(fù)3次，以不加藥的培養(yǎng)基作對照。將其置于25℃恒溫黑暗條件下培養(yǎng)，24 h后觀察記錄菌落直徑。使用SPASS軟件計算毒力回歸方程，并通過回歸方程計算EC50[5]。

表2 可可毛色二孢菌株室內(nèi)毒力測定殺菌劑使用濃度 /（mg/L）

表3 茄病鐮刀菌株毒力室內(nèi)測定殺菌劑使用濃度 /（mg/L）

生長抑制率/%=[（CK菌落直徑-處理菌落直徑）/（CK菌落直徑-7 mm）]×100

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺菌劑對2種板栗內(nèi)腐病菌毒力測定 通過對7種殺菌劑進(jìn)行初步的篩選，發(fā)現(xiàn)7種殺菌劑對可可毛色二孢菌均有一定的抑制效果，抑菌率如表4所示，其中咯菌腈抑菌效果最好，菌落生長2 d抑菌率為100%，其次為丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，抑菌效果分別在92.52%和79.49%，此外其它殺菌劑對該菌株也有一定的抑制效果，但抑菌率相對較低，抑菌效果均在50%以下；7種殺菌劑對茄病鐮刀菌也有明顯的抑制效果，其中抑菌率最高的為丙硫菌唑，培養(yǎng)6 d，抑菌率達(dá)82.25%，其次為苯醚甲環(huán)唑，抑菌率為62.95%，其余殺菌劑對該菌株抑制率均在50%以下。

表4 不同殺菌劑對2種致病菌株的室內(nèi)抑菌效果

2.2 所篩殺菌劑對2種板栗內(nèi)腐病菌毒力測定 對7種殺菌劑進(jìn)行初篩，將抑菌率在50%以上的殺菌劑繼續(xù)進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)煽擅呔志瘦^好；丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)η巡＄牭毒暌志Ч^好。將這幾種殺菌劑針對供試菌株進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，由表5可知：3種殺菌劑對可可毛色二孢菌抑制作用從大到小為丙硫菌唑＞咯菌腈＞苯醚甲環(huán)唑，丙硫菌唑?qū)υ摼种菩Ч^好，EC50為0.076 mg/L。由表6可知，2種殺菌劑丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)η巡＄牭毒泻芎玫囊种菩Ч?，丙硫菌唑?qū)υ摼囊种菩Ч^好，EC50為1.327 mg/L；而苯醚甲環(huán)唑的EC50為53.835 mg/L，相對丙硫菌唑而言效果較差。

表5 供試殺菌劑對可可毛色二孢菌毒力測定結(jié)果

表6 供試殺菌劑對茄病鐮刀菌毒力測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

通過對7種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)初步篩選發(fā)現(xiàn)，對L.theobromae菌株抑菌率較好的為咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，3種殺菌劑的抑菌率分別為100%、92.52%、79.49%，將3種殺菌劑繼續(xù)進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，得出丙硫菌唑的EC50為0.076 mg/L，其次為咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑；初篩試驗中對F.solani抑制效果較好的為丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，抑菌率分別為82.25%和62.59%，通過進(jìn)一步對2種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測定發(fā)現(xiàn)丙硫菌唑的效果優(yōu)于苯醚甲環(huán)唑，其EC50為1.327 mg/L，遠(yuǎn)低于苯醚甲環(huán)唑。

目前國內(nèi)關(guān)于板栗上L.theobromae和F.solani的有效防治殺菌劑鮮有研究，但關(guān)于兩種病原菌室內(nèi)毒力試驗也有相關(guān)報道，鄒東霞[6]等人對引起桉樹枝枯病的L.theobromae菌株進(jìn)行室內(nèi)殺菌劑篩選發(fā)現(xiàn)，25%苯醚甲環(huán)唑?qū)﹁駱渲莶【↙.theobromae）具有一定的防治效果，其EC50為3.473 mg/L，經(jīng)換算與本試驗中苯醚甲環(huán)唑的EC50為8.445 mg/L較為接近；劉樹森等[7]研究指出，96%苯醚甲環(huán)唑?qū).theobromae具有良好的抑制效果，其EC50為1.327 mg/L；試驗中97%咯菌腈對L.theobromae防治效果最佳，EC50為0.09 mg/L；與本試驗中咯菌腈對L.theobromae的EC50有所不同；翟雅娟等[8]對引起紅花根腐病的茄病鐮刀菌進(jìn)行了藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)10%苯醚甲環(huán)唑?qū).solani具有良好的防治效果，其EC50為0.4605 mg/L，與本試驗中苯醚甲環(huán)唑有效防治F.solani的EC50相差較多。

綜上可知同樣有效殺菌劑針對同種病原菌，其在不同的寄主植物上或在不同的環(huán)境、氣候等條件下，有效防治用藥量具有一定差異，因此在病害防治過程中，應(yīng)綜合考慮影響因素，從而確定出有效的防治方案。本試驗通過對板栗內(nèi)腐病菌的殺菌劑篩選發(fā)現(xiàn)，丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑2種殺菌劑對均有很好的抑制效果。本試驗對2種板栗內(nèi)腐病菌進(jìn)行了有效藥劑篩選，篩選出了咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，為田間開展防治板栗內(nèi)腐病工作提供理論支撐。