黎彩霞，李煥庭，陳登源

廣東省羅定市人民醫(yī)院 腫瘤放射科，廣東 羅定 527200

0 引言

CTCs監(jiān)測(cè)通過(guò)采集患者的血液樣本，提取其中由實(shí)體瘤脫落進(jìn)入外周循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞，在通過(guò)基因分析、抗體檢測(cè)等方式來(lái)判斷患者的腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)歸情況，該方式在多種腫瘤疾?。ǚ伟⑷橄侔?、胃癌等）監(jiān)測(cè)研究中均有良好的反饋，相關(guān)的報(bào)道表示多種實(shí)體腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與CTCs監(jiān)測(cè)具有密切的相關(guān)性，被認(rèn)為可有效監(jiān)測(cè)原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶之間的活動(dòng)，無(wú)論是對(duì)于腫瘤早期檢測(cè)，還是復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)，CTCs監(jiān)測(cè)對(duì)于腫瘤復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)性?xún)?yōu)于常規(guī)影像學(xué)檢查，但當(dāng)前對(duì)于鼻咽癌適形放療后進(jìn)行CTCs監(jiān)測(cè)的研究相對(duì)較少[1-2]。本次研究旨在了解CTCs監(jiān)測(cè)與鼻咽癌適形放療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)作用，以幫助患者早發(fā)現(xiàn)、早治療，更好地帶瘤生存并降低其經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核，選取廣東省羅定市人民醫(yī)院2020年6月-2022年4月間收診的50例III期至Ⅳa期的鼻咽癌患者，其中男35例，女15例；年齡22～79歲，平均（49.02±2.25）歲；III期、IVa期患者分別有28、22例。

入組患者均已按照UICC（2008年）[3]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，均執(zhí)行了根治性適形放療或誘導(dǎo)化療+根治性適形放療。本次研究最后1例患者出組時(shí)間2022年4月，期間入組患者在術(shù)后，術(shù)后3個(gè)月、術(shù)后6個(gè)月、術(shù)后12個(gè)月、術(shù)后24個(gè)月行CTCs檢測(cè)，每次檢測(cè)均在清晨取患者的肘后靜脈血5～10mL，并送至檢驗(yàn)室進(jìn)行相應(yīng)的CTCs檢測(cè)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理確診的鼻咽癌；②按照UICC（2008年）分期為III期至Ⅳa期且執(zhí)行了根治性適形放療或誘導(dǎo)化療+根治性適形放療；③預(yù)計(jì)生存期大于3個(gè)月，KPS評(píng)分≥70分；④自愿加入本研究，依從性好，配合隨訪復(fù)查。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①有嚴(yán)重的危害患者安全或影響患者完成研究的伴隨疾病；②既往有其他惡性腫瘤病史且接受過(guò)放化療治療；③原發(fā)灶和頸部轉(zhuǎn)移病灶接受過(guò)手術(shù)治療；④鼻咽癌為復(fù)發(fā)[4]。

1.2 方法

患者均接受執(zhí)行了根治性適形放療或誘導(dǎo)化療+根治性適形放療，在各節(jié)點(diǎn)進(jìn)行CTCs監(jiān)測(cè)時(shí)，取晨間肘中靜脈血約5mL，以真空抗凝管（ACD管）放置并迅速送檢驗(yàn)室，采用益善生物CanPatrol分型檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)。研究所用的多項(xiàng)分離液、緩沖液、單克隆抗體（抗CD45、抗Epcam）熒光劑，血樣采集容器等均由益善生物技術(shù)股份有限公司提供。

進(jìn)行CTCs檢測(cè)時(shí)，抽取血樣均需先放置抗凝管，離心處理兩次，轉(zhuǎn)速為2.5r/min，7min后將上清與下沉物分離，將下沉物再次離心處理2min，加入紅細(xì)胞裂解液等待15min，裂解液去除紅細(xì)胞，磁珠孵育混勻去除白細(xì)胞，待完全分離后分離上清與下沉物，之后相繼以0.4%濃度Tween20、2%濃度胎牛血清液進(jìn)行離心分離后取沉淀，分離液（或再次離心）分離富集腫瘤細(xì)胞，加入CD45-PE、Epcam-APC，避光孵育半小時(shí)后加入緩沖液，取沉淀物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以相應(yīng)的試劑盒觀察3項(xiàng)單克隆抗體的情況，以Epcam陽(yáng)性、CD45陰性為CTCs，數(shù)量超過(guò)＜2為陰性，≥2為陽(yáng)性。

1.3 觀察標(biāo)準(zhǔn)

本次研究，通過(guò)CTCs監(jiān)測(cè)，比較：①術(shù)后1周、術(shù)后1個(gè)月、術(shù)后3個(gè)月CTCs陽(yáng)性率；②術(shù)后3個(gè)月，陽(yáng)性、陰性患者的總緩解率（完全緩解：病灶完全消失、血清腫瘤標(biāo)志物水平正常。部分緩解：病灶直徑縮?。?0%。穩(wěn)定：無(wú)顯著變化?？偩徑饴?完全緩解率+部分緩解率）；③術(shù)后6個(gè)月、12個(gè)月、24個(gè)月，CTCs檢測(cè)陽(yáng)性患者無(wú)新增轉(zhuǎn)移率[5-6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher's檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本F檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者術(shù)后3個(gè)月內(nèi)陽(yáng)性率及CTCs數(shù)目比較

通過(guò)術(shù)后適形放療，患者的陽(yáng)性率顯著降低，術(shù)后1周、術(shù)后1個(gè)月、術(shù)后3個(gè)月CTCs陽(yáng)性率降低，同階段患者的CTCs數(shù)目持續(xù)減少，差異均有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 患者術(shù)后3 個(gè)月內(nèi)陽(yáng)性率及CTCs 數(shù)目比較

2.2 患者術(shù)后3個(gè)月總緩解率比較

術(shù)后3個(gè)月，CTCs檢測(cè)為陽(yáng)性有13例，陰性為37例，陽(yáng)性患者的總緩解率低于陰性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 患者術(shù)后3 個(gè)月總緩解率比較 [n（%）]

2.3 患者術(shù)后24個(gè)月內(nèi)的無(wú)新增轉(zhuǎn)移率比較

術(shù)后6個(gè)月CTCs陽(yáng)性患者無(wú)新增轉(zhuǎn)移率與陰性患者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05），術(shù)后12個(gè)月、24個(gè)月，CTCs檢測(cè)陽(yáng)性患者無(wú)新增轉(zhuǎn)移率均低于陰性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 患者術(shù)后24 個(gè)月內(nèi)的無(wú)新增轉(zhuǎn)移率比較[n（%）]

3 討論

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是原發(fā)于鼻咽黏膜被覆上皮的惡性腫瘤，是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，對(duì)于3mm以上的腫瘤，常規(guī)影像檢查能取得較高的檢測(cè)率，但對(duì)于3mm以下的腫瘤組織，當(dāng)前的影像檢測(cè)效果并不理想，血清標(biāo)志物檢測(cè)的靈敏度和特異性也相對(duì)較差，CTCs監(jiān)測(cè)在肺癌、乳腺癌、胃癌等多種實(shí)體腫瘤中均有良好的反饋，相關(guān)的報(bào)道均表示腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與CTCs密切相關(guān)，早于常規(guī)影像學(xué)檢查手段預(yù)估腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，CTCs監(jiān)測(cè)是一種效果極佳的腫瘤復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)方法[7-8]。

鼻咽癌患者在術(shù)后進(jìn)行適形放療是最常見(jiàn)的治療方法，研究結(jié)果顯示，50例患者術(shù)后、術(shù)后1個(gè)月、術(shù)后3個(gè)月CTCs陽(yáng)性率降低，且同節(jié)點(diǎn)患者的CTCs數(shù)目持續(xù)減少，分析認(rèn)為，適形放療對(duì)于原病灶腫瘤具有良好的滅活效果，而CTCs監(jiān)測(cè)能夠有效的觀察患者腫瘤微小病灶在血液循環(huán)中的活動(dòng)情況，通過(guò)CTCs監(jiān)測(cè)結(jié)果的變化情況，可發(fā)現(xiàn)患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移傾向，明確微小腫瘤病灶陽(yáng)性情況，這利于臨床醫(yī)師制定科學(xué)合理的化療方案，而患者在根據(jù)檢測(cè)結(jié)果執(zhí)行針對(duì)性的適形放療后，原病灶腫瘤細(xì)胞得到針對(duì)性的抑制，進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞因此減少，患者的CTCs數(shù)目和陽(yáng)性率因此不斷下降[9-11]。

另外原發(fā)灶經(jīng)淋巴系統(tǒng)進(jìn)入外周循環(huán)是遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)、惡性增殖的重要原因，因此術(shù)后適形放療效果的優(yōu)劣關(guān)系到患者有無(wú)新增轉(zhuǎn)移[12]，而CTCs監(jiān)測(cè)能輔助醫(yī)師開(kāi)展針對(duì)性化療，彭政[13]、楊健筌[14]等學(xué)者指出外周CTCs在鼻咽癌患者的早期診斷、病情發(fā)展預(yù)測(cè)和療效評(píng)估上具有重要參考價(jià)值，通過(guò)早期連續(xù)檢測(cè)CTCs，能有效抑制原發(fā)灶的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，因此術(shù)后6個(gè)月CTCs陽(yáng)性患者無(wú)新增轉(zhuǎn)移率與陰性患者差異較小，但術(shù)后12個(gè)月、24個(gè)月，CTCs檢測(cè)陽(yáng)性患者無(wú)新增轉(zhuǎn)移率均顯著低于陰性患者，分析認(rèn)為這說(shuō)明CTCs陽(yáng)性患者的總生存期更短，可見(jiàn)CTCs對(duì)患者預(yù)后預(yù)測(cè)作用顯著。

在術(shù)后3個(gè)月，CTCs檢測(cè)為陽(yáng)性有13例，陰性為37例，陽(yáng)性患者的總緩解率顯著低于陰性患者，分析認(rèn)為CTCs的變化與療效有關(guān)，通過(guò)更具有針對(duì)性的放療措施，原病灶術(shù)后殘余腫瘤細(xì)胞清除效果良好，可見(jiàn)CTCs的監(jiān)測(cè)結(jié)果也可作用鼻咽癌病情轉(zhuǎn)歸的有效參考與補(bǔ)充，但本次研究未對(duì)術(shù)后3個(gè)月之后的緩解情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，這可能對(duì)研究結(jié)果造成一定的偏畸，還需要增大樣本量，延長(zhǎng)觀察時(shí)間，開(kāi)展進(jìn)一步的深入研究。

綜上所述，鼻咽癌患者在進(jìn)行適形放療后，采用CTCs監(jiān)測(cè)能夠有效的檢測(cè)患者的CTCs陽(yáng)性情況，輔助醫(yī)師對(duì)患者進(jìn)行針對(duì)性的診治，從而幫助患者早發(fā)現(xiàn)、早治療，進(jìn)而改善患者的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間，可見(jiàn)聯(lián)合CTCs監(jiān)測(cè)的隨診復(fù)查效果優(yōu)于單純傳統(tǒng)腫瘤復(fù)診檢測(cè)項(xiàng)目，具有較高的相關(guān)性。