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        垂盆草總黃酮含量測(cè)定及分析

        2022-10-17 11:10:48馬生健何旭東
        農(nóng)產(chǎn)品加工 2022年18期
        關(guān)鍵詞:黃酮

        何 冰 , 馬生健 ,何旭東

        (1. 嶺南師范學(xué)院基礎(chǔ)教育學(xué)院,廣東 湛江 524048;2. 湛江幼兒師范專(zhuān)科學(xué)校,廣東 湛江 524084;3. 嶺南師范學(xué)院,廣東 湛江 524048)

        垂盆草(Sedum sarmentosum Bunge),又稱(chēng)爬景天、鼠牙半支蓮、養(yǎng)雞草、狗牙齒等[1],系景天科多年生草本多肉植物,在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布。該草可全株入藥,性涼、味甘、淡,用來(lái)泡水喝或煎湯有清熱解毒、利尿消腫、排膿生肌之效,常用于治療濕熱黃疸、小便不利、癰腫瘡瘍、慢性肝炎等癥;其莖葉脆嫩多汁、微酸,亦可作蔬菜食用,是一種可藥、可食、可觀賞的植物[2]。

        研究發(fā)現(xiàn),垂盆草中含有垂盆草苷、黃酮類(lèi)、甾醇類(lèi)和三萜類(lèi)等化合物[3-4],其中垂盆草苷對(duì)四氯化碳性肝細(xì)胞損傷有明顯保護(hù)作用,可控制乙肝和丙肝病情發(fā)展,對(duì)降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶有顯著療效,也可減輕甚至消除肝炎患者的口苦、胃口不好、小便黃等癥狀。潘金火等人[5-6]對(duì)垂盆草的保肝降酶活性成分進(jìn)行了一系列的研究,證明其具有保肝降酶作用的活性成分主要為苷類(lèi)和黃酮類(lèi)物質(zhì),可見(jiàn)黃酮是垂盆草保肝降酶、修復(fù)損傷肝細(xì)胞、抗腫瘤、抗炎抑菌的主要活性成分之一,對(duì)于心血管疾病、腫瘤以及癌癥等疾病都具有預(yù)防和治療價(jià)值,甚至可以作為弱雌性激素治療更年期綜合癥[7]。

        近年來(lái),對(duì)垂盆草的研究大多集中在肝病治療中的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[8-12],也有垂盆草HPLC 指紋圖譜[13-14]、救治蛇傷[15]、生長(zhǎng)[16-19]等部分相關(guān)報(bào)道。通過(guò)采用紫外分光光度法對(duì)新鮮采摘的垂盆草總黃酮含量進(jìn)行測(cè)量和分析,以提高其利用率,為進(jìn)一步提升垂盆草藥用價(jià)值及食用價(jià)值提供一定的科學(xué)依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

        1 材料和方法

        1.1 材料

        所用材料,均采摘于嶺南師范學(xué)院植物園內(nèi)自種藥材垂盆草。挑選生長(zhǎng)狀態(tài)相似的垂盆草,進(jìn)行分類(lèi)、洗凈、瀝水,用吸水紙吸干表面水分,備用。

        蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(供繪制測(cè)定黃酮浸出率標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)用),編號(hào)為100080-200707,中國(guó)食品藥品檢定研究院提供;4%NaOH 溶液、10%Al(NO3)3溶液、5%NaNO2溶液、50%乙醇等所用試劑,均為分析純(AR 級(jí))。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 待測(cè)樣品的制備

        取3 個(gè)不同植株的垂盆草材料,精密稱(chēng)取垂盆草藥材樣品3.000 g,置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中,加入12BV的50%乙醇溶液,100 ℃下回流提取1 h 至無(wú)色,待冷卻到室溫后取出樣品溶液。置于高速冷凍離心機(jī)以轉(zhuǎn)速5 000 r/min 條件下離心10 min,倒出上清液,再將沉淀加入12 BV 的50%乙醇溶液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,100 ℃進(jìn)行二次提取1 h,冷卻,以轉(zhuǎn)速5 000 r/min 離心10 min,得上清液。將2 次提取的上清液混合,加入50%乙醇定容至1 000 mL,即可得到樣品待測(cè)液。

        1.2.2 顯色反應(yīng)

        取待測(cè)樣品溶液各1 mL 于試管中,分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2溶液0.5 mL,搖晃均勻,放置6 min,再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的A(lNO)33溶液0.5 mL,混合均勻,放置6 min,然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的NaOH 溶液10 mL,最后加蒸餾水定容至12.5 mL,放置10 min 后即可得到3 個(gè)樣品標(biāo)準(zhǔn)液。

        1.2.3 垂盆草黃酮含量的計(jì)算

        根據(jù)待測(cè)樣品所測(cè)的吸光度(A),采用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程ρ=0.086 5A+0.001 2(相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8) 計(jì)算樣品溶液中黃酮的質(zhì)量濃度(ρ)。

        式中:V——樣品溶液體積(1 000 mL)。

        2 結(jié)果與分析

        測(cè)得樣品溶液的吸光度,計(jì)算樣品中所提取總黃酮質(zhì)量和黃酮含量。

        垂盆草不同樣品的黃酮含量見(jiàn)表1。

        表1 垂盆草不同樣品的黃酮含量

        根據(jù)3 組樣品測(cè)得數(shù)據(jù)的計(jì)算結(jié)果,其平均值為4.024,即垂盆草黃酮含量為4.024。結(jié)果表明,垂盆草黃酮含量較高,有較高的潛在開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

        3 結(jié)論

        采用紫外分光光度法從垂盆草中提取出總黃酮并測(cè)定了其含量,結(jié)果表明利用紫外分光光度法對(duì)垂盆草中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定,試驗(yàn)條件容易控制,操作簡(jiǎn)單,重現(xiàn)性好,可作為測(cè)定黃酮類(lèi)化合物的常用方法。

        采用硝酸鋁作為黃酮類(lèi)物質(zhì)比色測(cè)定的顯色劑,主要是因?yàn)辄S酮母核中含有堿性氧原子,一般又多帶酚羥基,能與鋁離子產(chǎn)生黃色絡(luò)合物。加入亞硝酸鈉和氫氧化鈉,可使之在堿性溶液中顯紅色,顯色反應(yīng)要及時(shí)測(cè)定,放置過(guò)久易褪色。

        在垂盆草回流提取總黃酮的過(guò)程中,溶劑可能會(huì)影響黃酮的純度,因?yàn)楫?dāng)溶劑濃度過(guò)高是會(huì)溶出更多溶于該溶劑的物質(zhì),最終導(dǎo)致與真實(shí)數(shù)據(jù)產(chǎn)生較大偏差,在考慮成本的前提下,參考了張瑞霞等人[20]獲得總黃酮最佳提取率的最優(yōu)工藝條件為乙醇體積濃度50%,溶媒量為12BV,提取的數(shù)量次數(shù)為2 次,每次1 h。試驗(yàn)參照此項(xiàng)工藝條件進(jìn)行,所得結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

        試驗(yàn)測(cè)得垂盆草的總黃酮含量較高,高于其他報(bào)道中的數(shù)據(jù)[21],除試驗(yàn)系統(tǒng)誤差外,推測(cè)原因可能為黃酮提取方法、條件及工藝不同導(dǎo)致。此外,垂盆草種植地的地理?xiàng)l件與氣候條件等因素也可能導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不同,如有試驗(yàn)表明夏枯草、金釵石斛、仙鶴草等藥料在種植過(guò)程中人為添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑會(huì)導(dǎo)致總黃酮升高[22-24],Adriana Elia?ová 等人[25]證明了黃酮含量受銨鹽影響。垂盆草的黃酮含量受生態(tài)環(huán)境因子的具體影響情況有待進(jìn)一步研究。

        我國(guó)垂盆草資源豐富,且大都處于野生狀態(tài),未進(jìn)行大規(guī)模的開(kāi)采利用。垂盆草中黃酮類(lèi)化合物含量較高,在醫(yī)藥、食用、觀賞和環(huán)保等方面具有潛在的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。此結(jié)果可為垂盆草代茶飲、垂盆草菜品、垂盆草餡料等功能保健系列產(chǎn)品的研究開(kāi)發(fā)和推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

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