李沖 閆曉娟 尚高峰

(1.陜西省商洛市中心血站檢驗(yàn)科,陜西 商洛 726000;2.武功縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西 咸陽(yáng) 712200)

異性病毒肝炎是臨床上最為常見(jiàn)的傳染病之一，主要由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)引起，以肝臟為靶器官，損傷其他多種器官[1]。由于ELISA靈敏度高，導(dǎo)致HBsAg假陽(yáng)性較高，導(dǎo)致血液來(lái)源的流失，影響臨床的供血需求[2-4]。因此如何對(duì)HBsAg初篩反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行確證，降低假陽(yáng)性率，一直是臨床研究的重點(diǎn)。本文通過(guò)對(duì)HBsAg ELISA反應(yīng)性標(biāo)本的S/CO值進(jìn)行確證，分析不同ELISA試劑的S/CO值臨界點(diǎn)，從而有效降低篩查的假陽(yáng)性，滿足臨床供血需求。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2020年12月期間我市采用兩種試驗(yàn)：初復(fù)兩次酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及核酸擴(kuò)增試驗(yàn)(NAT)篩查乙肝病毒表面抗原初篩出現(xiàn)反應(yīng)性結(jié)果的600例無(wú)償獻(xiàn)血者作為研究對(duì)象，其中男性336例，女性264例。初次獻(xiàn)血者419例，重復(fù)獻(xiàn)血者181例。年齡21～55歲，平均年齡(36.4±5.3)歲。

1.2方法 (1)EISA HBsAg檢測(cè)：初檢儀器：Tecan公司FreedomEVO前加樣系統(tǒng)，西門(mén)子公司BEPⅢ酶免后處理系統(tǒng)。復(fù)檢儀器：Tecan公司FreedomEVO前加樣系統(tǒng)，Ausbio公司FAME24/20酶免后處理系統(tǒng)。試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)，生產(chǎn)廠家分別為：北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司(以下簡(jiǎn)稱(chēng)北京萬(wàn)泰)，英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技股份有限公司(以下簡(jiǎn)稱(chēng)廈門(mén)新創(chuàng))質(zhì)控品：北京康徹思坦公司生產(chǎn)的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)血清(液體)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。(2)NAT檢測(cè)：儀器：羅氏COBAS201核酸檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó)Roche)；試劑：羅氏公司乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 人類(lèi)免疫缺陷病毒(1+2型)檢核酸試劑(PCR-熒光法)(Procleix UltrioAssay)。質(zhì)控品：北京康徹思坦公司生產(chǎn)的適用于羅氏二代混檢系統(tǒng)的血篩核酸混合(HBVDNA/HCVRNA/HIV -1RNA)(液體)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。以上所有使用的試劑均檢查合格且在試劑有效期內(nèi)使用；所有的儀器均按儀器說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行保養(yǎng)和維護(hù)，并確保儀器在正常工作狀態(tài)下運(yùn)轉(zhuǎn)。(3)獻(xiàn)血者HBsAg確證：珠海麗珠試劑股份有限公司提供的HBsAg確證試劑盒，上?？迫A生物工程有限公司提供的核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光法)。將任意初篩ELISA呈反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行中和試驗(yàn)，對(duì)結(jié)果不確定的標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，檢測(cè)步驟和判定標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1兩種ELISA試劑初篩結(jié)果對(duì)比 共有600例標(biāo)本呈HBsAg ELISA反應(yīng)性，將600例標(biāo)本再進(jìn)行中和試驗(yàn)，當(dāng)S/CO<0.8時(shí)，兩種ELISA初篩試劑的陰性率均為100%(487/487，80/80)；當(dāng)0.8≤S/CO<1時(shí)，北京萬(wàn)泰試劑假陽(yáng)性率為0，廈門(mén)新創(chuàng)試劑假陽(yáng)性率100%(4/4)；當(dāng)S/CO≥1時(shí)，北京萬(wàn)泰試劑和廈門(mén)新創(chuàng)試劑的ELSIA陽(yáng)性率分別為51.33%(58/113)、28.88%(149/516)。見(jiàn)表1。

表1 兩種ELISA試劑初篩結(jié)果對(duì)比

2.2ROC曲線繪制評(píng)估HBsAg ELISA初篩試劑S/CO的適宜臨界值 當(dāng)北京萬(wàn)泰試劑與廈門(mén)新創(chuàng)試劑的適宜S/CO值分別為1.628、3.229時(shí)，各自AUC值最大分別為0.995、0.968，靈敏度均為1，特異度分別為0.962、0.784。見(jiàn)表2。

表2 兩種HBsAg ELISA初篩試劑結(jié)果與HBsAg陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(S/CO值)

3 討 論

我國(guó)法律法規(guī)及相關(guān)部門(mén)對(duì)采血機(jī)構(gòu)進(jìn)行規(guī)定，需要采用兩種不同廠家的ELISA和一種NAT試劑篩查獻(xiàn)血者的HBV，從而降低血液相關(guān)疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)[5]。目前對(duì)血液篩查反應(yīng)性的獻(xiàn)血者進(jìn)行確證試驗(yàn)是血站篩查假陽(yáng)性的主要手段[6]。中和試驗(yàn)是目前確證HBsAg陽(yáng)性是否準(zhǔn)確的主要方法，但由于其操作繁瑣、成本較高，目前在血站難以大范圍推廣應(yīng)用[7]。且由于我國(guó)獻(xiàn)血量和臨床用血量存在一定缺口，也導(dǎo)致了假反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確證試驗(yàn)開(kāi)展不足[8]。因此HBsAg假陽(yáng)性一直存在，且發(fā)生率較高，導(dǎo)致了相當(dāng)一部分血液來(lái)源的流失。目前大部分研究發(fā)現(xiàn)[9]，中和試驗(yàn)的HBsAg確證結(jié)果的分級(jí)與ELISA初篩結(jié)果中的S/CO值呈明顯正相關(guān)。因此不少學(xué)者認(rèn)為ELISA初篩時(shí)具有一個(gè)S/CO臨界值，能反映患者是否存在假陽(yáng)性情況[10]。

本文對(duì)我市獻(xiàn)血者進(jìn)行研究，選取600例ELISA初篩呈反應(yīng)性的血液標(biāo)本進(jìn)行中和試驗(yàn)確證，采用ROC曲線找出不同ELISA試劑適宜的S/CO值，從而判斷HBsAg的陽(yáng)性情況，結(jié)果顯示，在S/CO<0.8時(shí)，兩種試劑的陰性率均為100%，表明在S/CO<0.8時(shí)ELISA試劑基本不存在假陽(yáng)性，診斷的靈敏度、特異度較高。當(dāng)0.8≤S/CO<1時(shí)，北京萬(wàn)泰試劑假陽(yáng)性率為0，廈門(mén)新創(chuàng)試劑假陽(yáng)性率為100%，提示不同ELISA試劑對(duì)HBsAg陽(yáng)性率的診斷效能不同，廈門(mén)新創(chuàng)試劑在S/CO超過(guò)0.8時(shí)，存在假陽(yáng)性，但北京萬(wàn)泰試劑仍然不存在假陽(yáng)性。在S/CO≥1時(shí)，北京萬(wàn)泰試劑和廈門(mén)新創(chuàng)試劑的陽(yáng)性率分別為51.33%、28.88%，提示當(dāng)S/CO值超過(guò)1時(shí)，ELISA存在假陽(yáng)性情況。對(duì)上述兩種ELISA試劑進(jìn)行ROC曲線繪制，結(jié)果顯示，北京萬(wàn)泰試劑和廈門(mén)新創(chuàng)試劑在S/CO值分別為1.628、3.229時(shí)，各自AUC值最大分別為0.995、0.968，靈敏度均為1，特異度分別為0.962、0.784。提示使用北京萬(wàn)泰試劑對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行ELISA初篩時(shí)，若S/CO值≥1.628，則可直接判斷為HBsAg陽(yáng)性，無(wú)需確證。而在使用廈門(mén)新創(chuàng)試劑對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行ELISA初篩時(shí)，若S/CO值≥3.229時(shí)，則可直接判斷為HBsAg陽(yáng)性，無(wú)需確證?？梢?jiàn)不同ELISA試劑的S/CO臨界值不同，通過(guò)ROC曲線判斷不同ELISA試劑診斷HBsAg陽(yáng)性的S/CO臨界值對(duì)采血機(jī)構(gòu)的初篩具有重要意義。

綜上所述，兩種HBsAg ELISA試劑均有各自的適宜S/CO值，檢測(cè)結(jié)果大于等于該值時(shí)，對(duì)HBsAg陽(yáng)性的診斷準(zhǔn)確率較高，可直接判斷為陽(yáng)性，無(wú)需確證。