李 毓，張 強

自身免疫性疾病是一組對自身抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答并造成組織損傷為特征的疾病，而大多數(shù)病因尚不清楚。有證據(jù)[1]表明，自身抗體出現(xiàn)比自身免疫性疾病發(fā)病要早數(shù)年，因此，抗核抗體(ANA)可能是疾病進程的中間標志物，也可能是增加自身免疫性疾病易感性的信號。ANA由B細胞分泌，并與大分子細胞成分如組蛋白、抗核糖體、DNA結(jié)合[2]，不同ANA類型和亞型與不同的自身免疫性疾病相關(guān)，例如抗DNA自身抗體與系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)顯著相關(guān)，而抗核蛋白與系統(tǒng)性硬化病相關(guān)。此外，自身抗體類型(IgG、IgA、IgM)根據(jù)具體疾病狀態(tài)而異，雖然ANA通常在自身免疫性疾病如SLE、類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)中被發(fā)現(xiàn)，但也在無癥狀個體中被發(fā)現(xiàn)，在健康人群中檢出率高達25%[3]，提示無癥狀個體ANA陽性可作為未來自身免疫性疾病發(fā)展的預測因子。解決無癥狀個體ANA陽性可作為疾病發(fā)生預測因子這一問題，了解ANA在自身免疫性疾病、其他疾病(如感染)和健康人群中陽性檢出情況十分必要。因此，本研究分析行ANA檢測受試者的ANA實驗室檢測結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年3月至2019年12月于我院進行ANA檢測的331名受試者為研究對象。其中男181名，女150名；年齡1～92歲；疾病類型：強直性脊柱炎(AS)75例，RA 63例，SLE 12例，干燥綜合征(SS)7例，感染126例，健康人群48名。排除標準：惡性腫瘤及血液系統(tǒng)疾病病人；目前正在接受已知能改變ANA滴度的藥物病人，藥物包括普魯卡因胺、氯丙嗪、異煙肼、奎寧和磺胺類等藥物。依據(jù)年齡將病人分為4組：<20歲組、<40歲組、<60歲組和≥60歲組。

1.2 方法 用不含抗凝劑的真空負壓采血管采集血液樣本，自然凝固15～20 min后，4 000 r/m離心10 min，以HEp-2細胞為底物，采用間接免疫熒光法檢測ANA，儀器為EUROBlotMasterⅡ全自動免疫印跡儀、LEICA DM500熒光顯微鏡及歐蒙原裝試劑盒。其中ANA滴度分為1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200；核型分為核顆粒型、核均質(zhì)型、核仁型、胞漿顆粒型、著絲點型、核膜型和其他型；ANA譜分為抗核糖核蛋白/抗史密斯(nRNP/Sm)、抗史密斯(Sm)、抗SS A(SS-A)、抗SS B(SS-B)、抗硬皮病70(Scl-70)、抗PM-Scl(PM-Scl)、抗Jo-1(Jo-1)、抗著絲粒蛋白B(CENP B)、抗增殖蛋白(PCNA)、抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)、抗核小體(AnnA)和抗組蛋白(AHA)。根據(jù)試劑盒的操作說明，按照臨床標準程序檢測，結(jié)果判讀要求為兩名經(jīng)驗豐富的專職工作人員共同完成。細胞核顯示特異性熒光模型為陽性，細胞核不顯示特異性熒光為陰性?？贵w滴度樣本稀釋度方法：將10.1 μL樣本加入1 000 μL PBS吐溫緩沖液中并充分混勻(即起始稀釋度為1∶100)，在每100 μL的PBS吐溫緩沖液中加入11.1 μL前一步的濃縮液，并充分混勻，依次稀釋。

2 結(jié)果

2.1 ANA檢出情況 331份標本中檢出ANA陽性者共127份，檢出率為38.4%，其中男性陽性檢出率27.6%，女性51.3%。隨著滴度的增加，女性ANA陽性檢出率下降；男性以低滴度為主，高滴度ANA陽性檢出率變化較?。慌愿鞯味華NA檢出率高于男性。不同年齡組陽性檢出率高峰出現(xiàn)在<60歲組，為51.0%；<40歲組和<60歲組滴度增加陽性檢出率下降，≥60歲組滴度(1∶1 000)陽性檢出率高于滴度(1∶320)和滴度(1∶3 200)(見表1)。

表1 不同性別及年齡段受試者ANA陽性檢出情況[n；百分率(%)]

2.2 不同性別及年齡段受試者核型檢出情況 不同核型陽性檢出率女性均高于男性。男性核型陽性檢出率前三位為核顆粒型、胞漿顆粒型和核仁型；女性核型陽性檢出率前三位為核顆粒型、胞漿顆粒型和著絲點型。不同年齡組均以核顆粒型和胞漿顆粒型為主，略有差異的是第三位，<40歲組為核仁型，<60歲組為核均質(zhì)型和核仁型，≥60歲組為著絲點型(見表2)。

表2 不同性別及年齡段受試者核型陽性情況[n；百分率(%)]

2.3 不同性別及年齡段受試者ANA譜檢出情況 男性除Scl-70和Sm陽性檢出率略高于女性外，女性其他ANA譜陽性檢出率均高于男性。女性ANA譜陽性檢出率前三位為SS-A、CENP B和dsDNA/SS-B。<40歲組ANA譜陽性檢出率前三位為SS-A、nRNP/Sm及dsDNA、AnnA；<60歲組ANA譜陽性檢出率前三位為SS-A、nRNP/Sm和SS-B；≥60歲組ANA譜陽性檢出率前三位為Sm、CENP B和SS-A(見表3)。

表3 不同性別及年齡段受試者ANA譜陽性情況[n；百分率(%)]

2.4 不同疾病ANA核型及ANA譜檢出情況 AS、RA、SLE、SS、感染和健康人群ANA陽性檢出率分別為：36.0%、60.3%、91.7%、100.0%、29.4%和14.6%。AS與感染以低滴度為主，RA、SLE和SS在各滴度均有較高陽性檢出率，健康人群在低、中、高滴度中陽性檢出率相似。AS、RA、SS和健康人群以核顆粒型ANA核型為主，SLE以核顆粒型和著絲粒型為主。ANA譜方面，AS、RA、感染和健康人群未見特異性抗體，SS-A、dsDNA和AnnA在SLE中有較高陽性檢出率，nRNP/Sm、SS-A、SS-B和PM-Scl在SS中有較高陽性檢出率，其中SS-A和SS-B為100.0%陽性檢出(見表4)。另外，在陽性標本中，單一陽性核型為100例(78.7%)，兩種核型同時陽性為27例(21.3%)。ANA譜單一抗體陽性為25例(19.7%)，兩陽12例(9.4%)，三陽6例(4.7%)，四陽3例(2.4%)，五陽1例(0.8%)。

表4 不同疾病ANA核型及ANA譜陽性情況[n；百分率(%)]

續(xù)表4

3 討論

細胞內(nèi)抗原自身抗體水平異常是全身性結(jié)締組織疾病的標志，間接免疫熒光法是檢測ANA最常用的常規(guī)方法，ANA現(xiàn)已成為診斷和評價自身免疫性病人預后的可靠生物標志物。早期診斷自身免疫性疾病，在器官損傷發(fā)生前進行治療[4]，可顯著改善疾病臨床癥狀及延緩疾病進展。實驗室檢測的不斷改進，特別是檢測靈敏度和特異性的提高，以及公眾和臨床醫(yī)生對ANA和自身免疫結(jié)果的認識的提高，人們越來越重視對ANA篩查。對ANA檢查結(jié)果的分析，以了解ANA分布特征，滴度、核型和抗體譜的表現(xiàn)與疾病的關(guān)系，有利于臨床醫(yī)生對疾病進行診斷、分型及分期等。研究[5]發(fā)現(xiàn)ANA陽性率呈遞增趨勢，這可能是由于現(xiàn)在的生活方式改變，特別是在城市地區(qū)，也可能是由于檢測靈敏度的提高?，F(xiàn)在較為統(tǒng)一的認識，自身免疫性疾病在女性群體中較為高發(fā)，本研究結(jié)果顯示，女性ANA陽性檢出率高達51.3%，明顯高于男性，與王健等[6]研究結(jié)果相似。女性ANA陽性檢出率高于男性的原因，可能是由于性激素水平的改變，部分由以前懷孕引起的免疫狀態(tài)的改變，或者是由于代謝和環(huán)境因素。本研究結(jié)果顯示，ANA檢出率高峰出現(xiàn)在40～60歲人群，可能與這一年齡段人群女性性激素水平明顯變化有關(guān)。王澤筠等[7]研究結(jié)果顯示，自身免疫性疾病病人檢出ANA陽性率高峰人群為20～50歲，高達82.27%，與本研究結(jié)果差異較大，可能與年齡組劃分和研究對象不同有關(guān)。

ANA滴度和核型可以反映自身免疫性疾病的嚴重程度[8]，病人進入自發(fā)或免疫抑制劑誘導的緩解期，滴度往往逐漸下降。顆粒型核型與疾病活動性和免疫抑制劑治療的變化沒有密切的關(guān)系，顆粒型核型更趨向于癥狀緩解，然而從診斷的角度來看，顆粒型抗核抗體的滴度通常不是關(guān)鍵的，疾病活動性與非顆粒核型的滴度密切相關(guān)。因此在評估ANA滴度的意義時，需要區(qū)分ANA核型是顆粒型還是非顆粒型[9]。本研究結(jié)果顯示，顆粒型核型為主要的檢出核型，但在SLE病人中可以檢出25.0%的著絲粒核型。ANA在AS中有36%的陽性檢出率，與陳水綿等[10]結(jié)果基本相符。

ANA陽性也可見于非自身免疫性炎癥疾病，包括急性和慢性感染。當ANA試驗用于非特異性臨床癥狀(如發(fā)燒、關(guān)節(jié)疼痛、肌痛、疲勞、皮疹或貧血)病人的初始篩查時，感染導致陽性結(jié)果的可能性將增加[11]。本研究結(jié)果顯示，感染病人ANA陽性檢出率為29.4%，大部分為低滴度核顆粒型。周燕娟等[12]研究顯示，慢性阻塞性肺疾病病人ANA陽性率高達33.9%，但與疾病嚴重程度關(guān)聯(lián)性不高。另外一項研究[13]也表明，白血病化療感染病人比非感染病人ANA檢出率要高，對其可能的解釋為：自身免疫是由多種機制介導，包括分子擬態(tài)、多克隆T和B細胞反應(yīng)、交叉反應(yīng)抗原、新抗原的形成和隔離/隱蔽抗原的釋放。自身抗體的形成是分子模擬的結(jié)果，所有這些機制都可能有感染直接或間接參與。例如，人類氨基酸序列與細菌或病毒中發(fā)現(xiàn)的序列相似，研究[14]表明DNA具有免疫原性，可以引起過敏病人的超敏反應(yīng)?？笵NA自身抗體作為外來DNA抗原的異常反應(yīng)而產(chǎn)生，異常的B細胞導致產(chǎn)生交叉反應(yīng)的自身抗體。感染可以作為環(huán)境引物，誘導或促進遺傳性易感個體的自身免疫性疾病發(fā)病，或者刺激機體產(chǎn)生一過性的物質(zhì)，被ANA試劑盒的抗體所識別。當病人患有感染時，ANA陽性通常是短暫的，這解釋了為什么一些ANA陽性病人重復檢測后可能顯示正常結(jié)果。

當前診斷自身免疫的建議包括檢測ANA陽性、實驗室檢查、詳細分析病人的個人和家庭史以及環(huán)境/獲得性危險因素，因此要考慮感染所致的短暫ANA陽性，建議有必要進行此類病人的ANA結(jié)果復查。綜上，ANA在特定人群不同性別、不同年齡段有不同的陽性檢出率，此外，感染和健康人群陽性結(jié)果也應(yīng)給予一定的重視。