趙國敏，劉彩霞，盧守舟，孫 清，任文杰，孫 玲*

（1.山東省藥學科學院 山東省生物藥物重點實驗室，山東 濟南 250101；2.山東省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心，山東 濟南 250101）

索拉非尼（sorafenib）是一種新型多靶向性治療腫瘤的口服藥物，是全球公認的肝癌一線靶向藥物，具有雙重抗腫瘤作用，一方面，可通過抑制RAF/MEK/ERK信號傳導通路，直接抑制腫瘤生長；另一方面，又可通過抑制血管內皮生長因子受體（VEGFR）和血小板源生長因子受體（PDGFR）而阻斷腫瘤新生血管的形成，間接抑制腫瘤細胞生長，臨床上主要用于治療腎癌和肝癌[1-10]。

索拉非尼在合成過程中易殘留甲醇、丙酮、乙酸甲酯、叔丁醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲基異丁基酮和甲苯，根據(jù)《中國藥典》2020年版四部限量檢查法中殘留溶劑測定法[11]及國際人用藥品注冊技術協(xié)調會ICH Q3C（R8）規(guī)定，應對這些有機溶劑殘留進行測定。目前，國內外藥典尚未收載該品種，文獻報道的相關分析方法較少，有研究對甲苯磺酸索拉非尼中二氯甲烷等殘留溶劑進行測定[12-15]，富馬酸沃羅拉贊中乙酸乙酯等殘留溶劑進行測定[16]，由于生產(chǎn)工藝中使用有機溶劑種類不同，殘留溶劑測定方法不同，未見同時測定此8種殘留溶劑的報道。本文建立了頂空氣相色譜法準確測定索拉非尼中8種殘留溶劑的含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890B氣相色譜儀，7697A頂空進樣器（美國安捷倫科技有限公司）；氮氣（濟南德洋特種氣體有限公司，純度≥99.999 %）；XS-205型電子分析天平（十萬分之一天平，瑞士Mettler-Toledo公司）；氣相色譜柱（DB-624，30 m×530 μm×3 μm）。

1.2 試藥

索拉非尼（自制，批號：20210610，20210625，20210707，純度≥99.5 %），甲醇（批號：200803）、四氫呋喃（批號：201006）（均為色譜純，天津康科德，含量均≥99.9 %），丙酮（批號：20191209）、甲苯（批號：20180209）、乙酸甲酯（批號：20200801）（均為分析純，國藥集團，含量均≥99.9 %），叔丁醇（分析純，上海麥克林生化，含量≥99.0 %），乙酸乙酯（批號：200401，分析純，西隴化工，含量≥99.5 %），甲基異丁基酮（批號：191105，分析純，天津廣成，含量≥99.5 %），N-甲基吡咯烷酮（批號：20201105，分析純，天津科密歐，含量≥99.5 %）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管柱（30 m×530 μm×3 μm）；升溫程序：起始溫度40 ℃，保持5 min，然后以10 ℃/min速率升溫至100 ℃，再以20 ℃/min速率升溫至200 ℃，保持5 min；進樣口溫度為230 ℃；采用氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250 ℃；載氣為氮氣，流速為2.0 ml/min；頂空平衡溫度為80 ℃，平衡時間為20 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白溶劑 精密量取N-甲基吡咯烷酮2 ml，置入10 ml頂空瓶，密封。

2.2.2 供試品溶液 取索拉非尼約0.1 g，精密稱定，置入10 ml頂空瓶，精密加入2 ml N-甲基吡咯烷酮，緩緩振搖使其溶解，密封。

2.2.3 對照品溶液 分別精密稱取甲醇、丙酮、乙酸甲酯、叔丁醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲基異丁基酮、甲苯各適量置入于含有N-甲基吡咯烷酮的量瓶，并用N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，制成每1 ml中含甲醇0.15 mg、丙酮0.25 mg、乙酸甲酯0.25 mg、叔丁醇0.25 mg、乙酸乙酯0.25 mg、四氫呋喃0.036 mg、甲基異丁基酮0.25 mg、甲苯0.044 mg的混合溶液，搖勻，精密量取此混合對照品溶液2 ml，置入10 ml頂空瓶，密封。

2.3 專屬性試驗

分別精密量取空白溶劑、對照品溶液和供試品溶液2 ml，置入10 ml頂空瓶，密封，按上述色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。結果表明，空白溶劑不影響樣品測定，對照品溶液中各主成分峰的出峰順序依次為甲醇、丙酮、乙酸甲酯、叔丁醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲基異丁基酮、甲苯，且各峰之間分離度均大于1.5，表明專屬性良好。

圖1 氣相色譜圖

2.4 線性關系考察

精密稱取甲醇61.15 mg、丙酮103.10 mg、乙酸甲酯103.47 mg、叔丁醇103.65 mg、乙酸乙酯104.21 mg、四氫呋喃15.08 mg、甲基異丁基酮104.69 mg和甲苯18.29 mg置入50 ml量瓶，加N-甲基吡咯烷酮溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；分別精密量取1.0，2.0，3.0，5.0，7.0 ml，置入25 ml量瓶，加N-甲基吡咯烷酮溶解并定容至刻度，搖勻，作為線性1#～5#號溶液。分別精密量取2.0 ml，置入10 ml頂空瓶，密封。照上述色譜條件進行測定，以峰面積（Y）對濃度（X，μg/ml）繪制標準曲線。進行線性回歸，結果見表1。在表1所示線性范圍內，各溶劑峰面積與濃度呈良好的線性關系。

表1 各組分線性方程、線性范圍及相關系數(shù)

2.5 定量限和檢出限

取對照品溶液，加N-甲基吡咯烷酮進行稀釋，當甲醇、丙酮、乙酸甲酯、叔丁醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲基異丁基酮、甲苯的濃度分別為1.42，0.40，0.56，1.35，0.60，0.33，0.90，0.63 μg/ml時，其信噪比約為10，即為其定量限；當甲醇、丙酮、乙酸甲酯、叔丁醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲基異丁基酮、甲苯的濃度分別為0.43，0.12，0.17，0.41，0.18，0.10，0.27，0.19 μg/ml時，其信噪比約為3，即為其檢測限。

2.6 系統(tǒng)精密度試驗

精密量取6份線性1#溶液各2.0 ml，分別置入10 ml頂空瓶，密封，按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖，分別計算甲醇、丙酮、乙酸甲酯、叔丁醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲基異丁基酮、甲苯峰面積的RSD分別為2.34 %，1.32 %，1.13 %，2.99 %，1.63 %，2.32 %，2.89 %，2.91 %（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 準確度試驗

精密量取線性試驗項下貯備液2.4，3.0，3.6 ml（各3份），分別置入25 ml量瓶，加入N-甲基吡咯烷酮定容至刻度，搖勻，作為準確度試驗配樣溶液。精密稱取約0.1 g索拉非尼（9份，批號為20210610），每份加入上述配樣溶液各2 ml，振搖溶解后，作為準確度試驗供試品溶液。按上述殘留溶劑測定方法進行測定，扣除已知溶劑殘留量，以測得加入量與加入量計算回收率。結果見表2。

表2 回收率試驗結果（n=9）

2.8 耐用性試驗

取對照品溶液2 ml，分別置入10 ml頂空瓶，密封，在2.1項下色譜條件基礎上，分別調整程序升溫中初始溫度、載氣流速、檢測器溫度、進樣口溫度、程序升溫速率等條件，考察各峰之間分離度，均能完全分離，結果表明該法耐用性良好。

2.9 樣品測定

分別取2.2項下供試品溶液和對照品溶液各2 ml，分別置入10 ml頂空瓶，密封，進樣測定，按外標法以峰面積計算各有機溶劑殘留量，測定結果見表3。

表3 樣品測定結果（n=3）

3 討論

3.1 殘留溶劑的選擇

本品在合成和精制過程中，涉及到ICH規(guī)定限制使用和藥品GMP或其他質量要求限制使用的第二類溶劑四氫呋喃（限度0.072 %）、甲苯（限度0.089 %）、N,N-二甲基乙酰胺（限度0.109 %）、甲醇（限度0.3 %），第三類溶劑丙酮（限度0.5 %）、甲基異丁基酮（限度0.5 %）、乙酸乙酯（限度0.5 %）。同時，在合成過程中使用叔丁醇鉀，可能生成叔丁醇；合成過程中同時使用乙酰氯和甲醇，可能生成乙酸甲酯，故對叔丁醇（限度0.5 %）和乙酸甲酯（限度0.5 %）進行檢測。

3.2 色譜柱的選擇

分別選用DB-INNOWAX、HP-5、DB-624及DB-17毛細管柱進行測定，通過對比結果，采用DB-624作為測定色譜柱，同時對程序升溫進行優(yōu)化，最終采用初始溫度40 ℃，保持5 min，然后以10 ℃/min速率升溫至100 ℃，再以每 20 ℃/min速率升溫至200 ℃，保持5 min，在此條件下，各組分峰形較好，分離度符合要求。

3.3 瓶平衡溫度及平衡時間的選擇

本試驗考察了頂空瓶在不同平衡溫度（70，80，90，100 ℃）和不同平衡時間（10，20，30，45 min）條件下各主成分峰峰面積，結果表明，平衡溫度為80 ℃，平衡時間為20 min時，各峰峰面積達到最大值。溫度繼續(xù)升高、平衡時間繼續(xù)延長，各主成分峰峰面積不再增加，最終選擇平衡溫度為110 ℃，平衡時間為20 min，在此條件下，即達到測定效果，又能節(jié)約成本。

本實驗首次采用頂空毛細管氣相色譜法測定索拉非尼中8種殘留溶劑的含量，經(jīng)過方法學驗證和樣品的測定，結果表明，所建立的方法靈敏度高、操作簡便、準確可靠，能準確測定索拉非尼中8種殘留溶劑的含量，為提升索拉非尼的質量控制標準和全面評價其內在產(chǎn)品質量提供了依據(jù)。