楊丹陽(yáng)，于 歡，吳曉瑩，朱盈徽，徐萬(wàn)愛(ài)，吳靜雨，肖小林，龔千鋒（江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌 330004）

白術(shù)為菊科植物白術(shù)Atractylodes macrocephalaKoidz.的干燥根莖，味苦、甘，歸脾、胃經(jīng)，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎之功效，臨床上常用于脾虛食少、腹脹泄瀉、痰飲眩悸、水腫、自汗、胎動(dòng)不安等癥的治療[1]。傳統(tǒng)理論認(rèn)為，白術(shù)生品富含揮發(fā)油，辛燥性太強(qiáng)，而通過(guò)炮制后，可以減其油，緩和其辛燥之偏性?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，揮發(fā)油是白術(shù)發(fā)揮藥效的關(guān)鍵物質(zhì)基礎(chǔ)之一，同時(shí)也是白術(shù)燥性的來(lái)源，在炮制過(guò)程中其組成和含量的變化與白術(shù)不同飲片的功效變化及其藥性改變密切相關(guān)[2]。

目前，臨床上常見(jiàn)的白術(shù)炮制品有清炒白術(shù)、麩炒白術(shù)、土炒白術(shù)、米泔水漂白術(shù)等[3]。其中，米泔水漂白術(shù)是江西特色炮制技術(shù)流派樟幫的特色炮制品種，白術(shù)經(jīng)米泔水漂制后，其燥性減弱，健脾之力提高[4－5]。查閱相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前學(xué)者們主要集中研究了白術(shù)生品和清炒白術(shù)、麩炒白術(shù)、土炒白術(shù)這幾種炮制品，且炮制機(jī)制多與揮發(fā)性成分有關(guān)[2，6－8]；而對(duì)米泔水漂白術(shù)的揮發(fā)性成分研究較少，尤其是米泔水漂白術(shù)炮制過(guò)程中揮發(fā)性成分的動(dòng)態(tài)變化更是未見(jiàn)報(bào)道。中藥炮制過(guò)程中化學(xué)成分所發(fā)生的變化及規(guī)律是科學(xué)闡明中藥炮制機(jī)制的關(guān)鍵。因此，本研究采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)江西樟幫米泔水漂白術(shù)炮制過(guò)程中揮發(fā)性成分的變化進(jìn)行研究，為米泔水漂白術(shù)炮制工藝的確定及炮制機(jī)制的闡釋提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有7890A型氣相色譜-5975C型質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司，配備MassHunter質(zhì)譜工作站和NITS17.L標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)）、YF-1118型高速中藥粉碎機(jī)（瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）、GZX-9076MBE型鼓風(fēng)干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、TY2001型電子天平（上海衡平儀器儀表有限公司）。

1.2 主要藥品與糯米

白術(shù)藥材采自浙江省天臺(tái)市石梁鎮(zhèn)（批號(hào)20211214），經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院龔千鋒教授鑒定為菊科植物白術(shù)A.macrocephalaKoidz.的干燥根莖；長(zhǎng)糯米購(gòu)自湖北省孝感市云夢(mèng)縣，質(zhì)量等級(jí)為一級(jí)。

2 方法

2.1 米泔水的制備

取長(zhǎng)糯米適量，粉碎，過(guò)五號(hào)篩，每2 kg糯米粉兌清水100 kg，攪拌均勻，制成米泔水混懸液[9]。

2.2 江西樟幫米泔水漂白術(shù)的制備

取白術(shù)藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，浸泡2～4 h，撈起置于筐內(nèi)，上蓋濕麻布袋，經(jīng)常淋水，潤(rùn)透，縱切厚片；切片先用米泔水漂24 h，再用清水漂48 h，撈起，烘干[4]。其中，米泔水和清水的用量均為白術(shù)藥材的9倍（g/mL）。

2.3 不同漂制階段白術(shù)漂制品的制備

除生品外，本研究制備了米泔水漂白術(shù)5個(gè)不同漂制階段的白術(shù)漂制品：第1階段漂制品為生品用9倍量米泔水漂12 h（漂洗溫度為26℃，下同），撈起，烘干；第2階段漂制品是在第1階段的基礎(chǔ)上，用米泔水再漂12 h，撈起，烘干；第3階段漂制品是在第2階段的基礎(chǔ)上，用清水再漂12 h，撈起，烘干；第4階段漂制品是在第3階段的基礎(chǔ)上，用清水再漂12 h，撈起，烘干；第5階段漂制品是在第4階段的基礎(chǔ)上，用清水再漂24 h，撈起，烘干。將白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段的漂制品烘干后，粉碎，過(guò)三號(hào)篩，備用。

2.4 儀器分析條件

2.4.1 頂空進(jìn)樣條件 精密稱取白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品的樣品粉末各3 g，置于20 mL頂空瓶中，密封后依次置于樣品盤(pán)上，根據(jù)以下條件頂空進(jìn)樣：樣品瓶加熱溫度為120℃，定量環(huán)溫度為140℃，傳輸線溫度為160℃，樣品瓶平衡時(shí)間為15 min。

2.4.2 氣相色譜分析條件 色譜柱為DB-1701毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），采用程序升溫（起始柱溫為60℃，以20℃/min升溫至140℃，維持5 min；再以4℃/min升溫至240℃），進(jìn)樣口溫度為280℃，流速為1 mL/min，分流比為10∶1，進(jìn)樣量為1 μL，載氣為高純氦氣（99.99%），溶劑延遲時(shí)間為3 min。

2.4.3 質(zhì)譜檢測(cè)器分析條件 離子源為電子轟擊離子源，電子碰撞能量為70 eV，接口溫度為280℃，離子源溫度為230℃，采集方式為全掃描模式，掃描范圍為質(zhì)荷比（m/z）29～650。

2.5 白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品中揮發(fā)性成分分析

取白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品的樣品粉末，按“2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析。將檢測(cè)所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入DataAnalysis 2013軟件中，使用質(zhì)譜工作站積分器進(jìn)行積分，與美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院（National Institute of Standards and Technology，NIST）17.L標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，篩選出匹配度≥90%的化合物。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[6－8，10－12]及物質(zhì)的CAS號(hào)對(duì)揮發(fā)性成分進(jìn)行定性分析，并利用峰面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量。

3 結(jié)果

3.1 白術(shù)生品及其漂制品中揮發(fā)性成分的基本情況

按“2.4”項(xiàng)下條件分析后所得的總離子流疊加圖見(jiàn)圖1。從圖1可知，在所建立的條件下，各色譜峰的分離度良好。從白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段的漂制品中共定性鑒別出49個(gè)揮發(fā)性成分，其中分別從白術(shù)生品、第1～5階段漂制品中鑒別出了33、31、28、30、28、29種成分，其總相對(duì)百分含量分別為66.218%、64.711%、79.410%、65.419%、67.101%、66.818%，這些成分主要為倍半萜類、單帖類、酚類、醛類、酮類、酯類、醇類、烷烴類、芳烴類化合物。白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品的揮發(fā)性成分及相對(duì)百分含量見(jiàn)表1。

圖1 白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品揮發(fā)性成分的總離子流疊加圖

3.2 白術(shù)生品及其漂制品中共有揮發(fā)性成分的變化趨勢(shì)分析

由表1可知，在白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品中有20個(gè)共有揮發(fā)性成分（化合物1～20），其在白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品中的總相對(duì)百分含量依次為65.619%、62.605%、62.901%、61.715%、64.967%、64.239%。在炮制過(guò)程中各成分的相對(duì)百分含量均發(fā)生了不同變化。其中，大根香葉烯B的相對(duì)百分含量隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)基本呈上升趨勢(shì)；萜品油烯和β-瑟林烯這2個(gè)成分的相對(duì)百分含量隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)呈先下降后上升的趨勢(shì)；隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)，（4S，7S，9R）-silphiperfol-5-ene、（－）-silphinene、modhephene和β-石竹烯這4個(gè)揮發(fā)性成分相對(duì)百分含量的變化趨勢(shì)都是先上升后下降再上升，且含量都是生品中最低（分別為0.114%、0.272%、0.558%、3.859%），第3階段漂制品中最高（分別為0.449%、1.110%、2.015%、4.735%）；1，3-cyclohexadiene，1-（1，5-dimethyl-4-hexenyl）-4-methyl-和Β-倍半水芹烯這2個(gè)揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量都是生品中最高（分別為1.736%、2.118%），第1階段漂制品中最低（分別為1.056%、1.329%）；而作為白術(shù)的主要燥性成分——蒼術(shù)酮，其相對(duì)百分含量在整個(gè)炮制過(guò)程呈先下降后上升再下降的動(dòng)態(tài)變化，并且在第4階段漂制品中最高（41.206%），在第3階段漂制品中最低（35.926%）。

3.3 漂制過(guò)程中新增揮發(fā)性成分的變化趨勢(shì)分析

由表1可知，與白術(shù)生品比較，米泔水漂制過(guò)程中新增了16個(gè)揮發(fā)性成分（化合物21～36）。其中，第1～5階段漂制品中分別新增了6、4、9、5、7個(gè)揮發(fā)性成分，新增揮發(fā)性成分的總相對(duì)百分含量分別為1.890%、16.335%、3.674%、2.049%、2.470%。且有些新增的揮發(fā)性成分只在特定的漂制時(shí)間點(diǎn)才能檢測(cè)到，如γ-elemene只在第2階段漂制品中才能檢測(cè)到，而pethylbrene、anthracene，1，2，3，4，5，6，7，8-octahydro-9-methyl-、桉油烯醇和3，5，11-eudesmatriene這4個(gè)揮發(fā)性成分只在第3階段漂制品中才能檢測(cè)到。

3.4 漂制過(guò)程中消失不見(jiàn)及消失后又出現(xiàn)揮發(fā)性成分的變化趨勢(shì)分析

由表1可知，與生品比較，米泔水漂制過(guò)程中有8個(gè)揮發(fā)性成分（化合物37～44）消失不見(jiàn)，其在生品中的總相對(duì)百分含量為0.382%。其中，除了化合物41在經(jīng)歷至第3漂制階段后才消失外，其他幾個(gè)成分都是漂制后就消失了。此外，在米泔水漂白術(shù)漂制過(guò)程中有5個(gè)揮發(fā)性成分（化合物45～49）呈現(xiàn)出消失-出現(xiàn)或者消失-出現(xiàn)-消失的動(dòng)態(tài)變化，其在生品中的總相對(duì)百分含量為0.217%。

表1 白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品的揮發(fā)性成分及相對(duì)百分含量（%%）

4 討論

江西樟幫作為我國(guó)著名的四大傳統(tǒng)炮制技術(shù)流派之一，其中藥炮制自成體系，炮制風(fēng)格獨(dú)特。米泔水漂白術(shù)是江西樟幫獨(dú)具特色的傳統(tǒng)炮制品種，在江西地區(qū)的藥用歷史也較為悠久。在漂制米泔水漂白術(shù)時(shí)，都是取原藥材，去除雜質(zhì)，按大小分檔后再進(jìn)行漂制，以使藥材在浸潤(rùn)過(guò)程中的浸潤(rùn)程度保持一致。由于江西樟幫米泔水漂白術(shù)漂制方法中米泔水和清水的用量一般僅憑經(jīng)驗(yàn)，無(wú)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，故本研究在文獻(xiàn)[13]的基礎(chǔ)上，將米泔水和清水的用量都設(shè)為白術(shù)原藥材的9倍。

本研究發(fā)現(xiàn)，在米泔水漂制過(guò)程中既有新的揮發(fā)性成分產(chǎn)生，也存在已有揮發(fā)性成分消失，同時(shí)各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量也發(fā)生了變化。在白術(shù)生品及其5個(gè)不同漂制階段漂制品中揮發(fā)性成分的總相對(duì)百分含量分別為66.218%、64.711%、79.410%、65.419%、67.101%、66.818%，可見(jiàn)第1、3階段漂制品中揮發(fā)性成分的總相對(duì)百分含量較白術(shù)生品有所降低，其燥性減弱。此外，蒼術(shù)酮作為白術(shù)的主要燥性成分和質(zhì)量標(biāo)志物，其含量變化對(duì)米泔水漂白術(shù)飲片的質(zhì)量控制有著重要的參考價(jià)值[14]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，蒼術(shù)酮除了具有抗腫瘤、降血壓、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、保肝、抗流感病毒等廣泛的藥理作用外，還會(huì)與水發(fā)生氧化反應(yīng)，生成白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ～Ⅲ、表白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、雙白術(shù)內(nèi)酯5種成分。其中，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ具有健脾作用[15－16]，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ具有抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)胃腸功能作用[16]，白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、Ⅲ具有抗血小板作用[17－18]，雙白術(shù)內(nèi)酯具有提高記憶力、改善老年癡呆等作用[19－20]。本研究發(fā)現(xiàn)，蒼術(shù)酮的相對(duì)百分含量在整個(gè)炮制過(guò)程中呈先下降后上升再下降的動(dòng)態(tài)變化，且在第4階段漂制品中最高（41.206%），在第3階段漂制品中最低（35.926%）。

綜上所述，本研究通過(guò)采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析后發(fā)現(xiàn)，在第3漂制階段漂制品中揮發(fā)性成分的總相對(duì)百分含量和主要代表性燥性成分蒼術(shù)酮的相對(duì)百分含量均最低，因此可得到緩解白術(shù)燥性的米泔水漂制工藝為白術(shù)生品用9倍量米泔水漂24 h，再用9倍量清水漂12 h。考慮到不同產(chǎn)地、不同批次白術(shù)之間的化學(xué)成分存在一定差異[10]，為減少因藥材個(gè)體差異而可能引起的分析誤差，本研究?jī)H采用了一個(gè)產(chǎn)地、一個(gè)批次的白術(shù)藥材，存在藥材批次單一的問(wèn)題，后期應(yīng)增加樣品批次進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。