李志成，鐘志鴻，李詩鈺，郭奕軒，郭慶凱，江飚，李安興*

(1.中山大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，廣東省水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物良種繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510275; 2.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院 動(dòng)物科技學(xué)院，廣東 廣州 510225)

海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病是由眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲Amyloodiniumocellatum感染而引起的寄生蟲疾病[1]。 該病主要暴發(fā)于熱帶和亞熱帶地區(qū)，在中國、法國、印度、埃及和美國等地的海水養(yǎng)殖區(qū)均有發(fā)病報(bào)道，對養(yǎng)殖魚類具有嚴(yán)重危害性[2-6]。魚類感染眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲后的典型癥狀為攝食量減少，呼吸頻率加快，聚集于水面或氧氣充足的區(qū)域。感染嚴(yán)重時(shí)，病魚可在12 h內(nèi)窒息死亡[7-8]。病魚體表常分泌大量黏液，形成天鵝絨狀的白斑，故淀粉卵渦鞭蟲病又稱“海水魚天鵝絨病”[9]。淀粉卵渦鞭蟲病常暴發(fā)于封閉的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)和水族館中，該病已成為海水魚類養(yǎng)殖的主要寄生蟲病之一，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[10]。

眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲隸屬于肉足鞭毛門Sarcomastigophora鞭毛亞門Mastigophora植鞭綱Phytomastigophora腰鞭目Dinoflagellida胚溝科Blastodinidae淀粉卵渦鞭蟲屬Amyloodinium[11]。該寄生蟲于1931年被首次報(bào)道，Brown[1]發(fā)現(xiàn)，英國倫敦動(dòng)物學(xué)會(huì)水族館中養(yǎng)殖的海水觀賞魚類感染該寄生蟲后大量死亡。起初，眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲因形態(tài)與Chatton描述的Oodiniumpoucheti極其相似而被命名為“Oodiniumocellatum”(隸屬于卵圓蟲屬)，但通過對該蟲體形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性的進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，二者存在較大差異，Brown于1946年將其命名更正為“Amyloodiniumocellatum” (隸屬于淀粉卵渦鞭蟲屬，為一新屬)，并沿用至今[12]。隨后，越來越多的研究闡明了眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的生活史、形態(tài)結(jié)構(gòu)、生活習(xí)性和宿主范圍[13-15]。該寄生蟲主要寄生于熱帶、亞熱帶海水魚類的鰓、皮膚和鰭條等，是海水養(yǎng)殖魚類中最常見的寄生蟲之一，若條件適宜，幾乎可以感染所有海水魚類，已被列為重要的海洋魚類病原[9,16-17]。本文全面綜述了眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲生活史、流行危害、診斷方法和防控措施等方面的研究進(jìn)展，并提出未來研究和防控發(fā)展建議，以期為海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的科學(xué)防治提供有益參考。

1 生活史

眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲生活史簡單，為直接發(fā)育型，發(fā)育過程不需要中間宿主。眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲生活史可分為滋養(yǎng)體、包囊和渦孢子3個(gè)階段(圖1)，每個(gè)生命階段均具有不同的形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征[18]。

圖1 眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲生活史Fig.1 Life cycle of Amyloodinium ocellatum

滋養(yǎng)體為蟲體唯一的寄生生活階段，直徑為20.0～120.0 μm[12]。滋養(yǎng)體發(fā)育初期呈梨形，發(fā)育成熟后逐漸變?yōu)榍蛐?，可通過假根附著于宿主的上皮細(xì)胞并獲取營養(yǎng)(圖2A)，待發(fā)育成熟后滋養(yǎng)體縮回假根并從宿主脫落，沉到水底并發(fā)育形成包囊[9]。滋養(yǎng)體在不同宿主的寄生時(shí)間和發(fā)育大小存在差異[19]。在相同感染條件下，相比于云紋犬牙石首魚Cynoscionnebulosus，滋養(yǎng)體在大西洋笛鯛Lutjanuscampechanus組織中寄生的時(shí)間更長。

A—病魚鰓，紅色箭頭示寄生的滋養(yǎng)體；B—包囊，包囊處于分裂狀態(tài)；C—渦孢子,lf—縱向鞭毛，tf—橫向鞭毛。A—gill tissue of diseased fish,the red arrow showing the parasitic A.ocellatum trophonts; B—tomonts，tomonts which is in a split state; C—dinospores， lf—longitudinal flagellum， tf—transverse flagellum.圖2 眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲生活史各時(shí)期的電子顯微鏡觀察結(jié)果[18]Fig.2 Scanning electron microscope observation of Amyloodinium ocellatum in different periods during life cycle [18]

包囊為分裂增殖階段，包囊直徑為61.3～112.7 μm[20]。滋養(yǎng)體從宿主脫落后假根逐漸收縮，并在表面分泌纖維質(zhì)膜形成囊壁，發(fā)育形成包囊。包囊以均等二分裂的方式增殖并孵化出渦孢子(圖2B)。包囊發(fā)育受溫度影響較大，在23～27 ℃環(huán)境下包囊發(fā)育速度最快，在低于10 ℃時(shí)停止發(fā)育。一個(gè)發(fā)育成熟的包囊最多可分裂產(chǎn)生128個(gè)細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞孵化出2個(gè)渦孢子，即一個(gè)成熟的包囊可孵化出256個(gè)渦孢子[21]。

渦孢子為自由感染階段，具有侵染能力，蟲體直徑為12.0～15.0 μm，具有一個(gè)眼點(diǎn)，擁有橫溝、縱溝及兩條鞭毛(圖2C)。鞭毛是渦孢子的運(yùn)動(dòng)器官，其可通過鞭毛在水中自由游動(dòng)尋找新的宿主進(jìn)行寄生，完成一個(gè)生活史周期[14,22]。渦孢子從包囊孵化后，能保持較長時(shí)間的侵染能力，Bower等[16]發(fā)現(xiàn),渦孢子在孵化4 d后仍具有較強(qiáng)的感染能力。渦孢子不具有保護(hù)性外壁且對化學(xué)藥物敏感，故可針對此階段蟲體進(jìn)行藥物防控[23]。

在實(shí)驗(yàn)室條件下，研究人員為獲得足夠數(shù)量的包囊和渦孢子用于試驗(yàn)，可采用魚體傳代和細(xì)胞系體外傳代2種方法。Bower等[16]在實(shí)驗(yàn)室條件下，用眼斑雙鋸魚Amphiprionocellaris和雜交條紋鱸Moronesaxatilis×M.chrysops作為宿主，實(shí)現(xiàn)了眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的人工傳代。Noga[24]于1987年首次成功使用孔雀花鳉Poeciliareticulata鰓細(xì)胞系實(shí)現(xiàn)了眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲體外傳代，且蟲體體外感染時(shí)細(xì)胞病理和滋養(yǎng)體發(fā)育情況與魚體體內(nèi)感染相似。Oestmann等[25]用美國紅魚Sciaenopsocellatus背鰭細(xì)胞作為培養(yǎng)基，體外培養(yǎng)眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲，并在體外連續(xù)培養(yǎng)了10個(gè)生活史周期。

2 流行與危害

2.1 宿主

眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲為多宿主寄生蟲，寄主范圍廣，是少數(shù)既可以感染硬骨魚類又可以感染軟骨魚類的寄生蟲之一[9,26]。有研究報(bào)道，該寄生蟲可同時(shí)寄生于魚體和其他體型較大的寄生蟲上，如梅氏新本尼登蟲Neobenedeniamelleni，表明眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲能從非魚類宿主中獲得生長發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)[17]。自1931年在倫敦動(dòng)物學(xué)會(huì)水族館首次發(fā)現(xiàn)淀粉卵渦鞭蟲病以來，海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病先后在世界各地被報(bào)道(表1)。尤其在歐洲國家，淀粉卵渦鞭蟲病已成為限制歐洲海水魚池塘養(yǎng)殖的主要瓶頸[3,10]。海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病在中國海水養(yǎng)殖業(yè)中也時(shí)有報(bào)道，如牙鲆Paralichthysolivaceus暴發(fā)淀粉卵渦鞭蟲病，死亡率超過60%[27]；大黃魚Pseudosciaenacrocea暴發(fā)淀粉卵渦鞭蟲病，若防治措施不當(dāng)，死亡率可達(dá)100%[2]；紅鰭東方鲀Takifugurubripes嚴(yán)重感染眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲時(shí)，死亡率為70%[28]。

表1 海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的病例報(bào)道Tab.1 Reports of amyloodiniosis in marine fish

2.2 流行規(guī)律

當(dāng)水溫高于20 ℃ 時(shí)，養(yǎng)殖魚類易暴發(fā)淀粉卵渦鞭蟲病且死亡率較高[29,34]。淀粉卵渦鞭蟲病主要暴發(fā)于室內(nèi)封閉循環(huán)系統(tǒng)、池塘養(yǎng)殖等水體交換量小且養(yǎng)殖密度高的水體環(huán)境中[35]。在開放性湖泊、河口等水域中，野生魚類雖然可被眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲感染，但由于水體開放，魚群密度低，不易造成大量感染，一般不會(huì)引起死亡[36]。隨著高密度、工廠化和集約化養(yǎng)殖模式的建立及推廣，該養(yǎng)殖環(huán)境更有利于眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的增殖和傳播，淀粉卵渦鞭蟲病將越發(fā)普遍，需引起高度重視。

包囊和渦孢子階段是眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲傳播的主要時(shí)期。在室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖中，渦孢子可通過一些與水體直接接觸的工具進(jìn)行傳播。鳥類、野生動(dòng)物或其他陸生動(dòng)物在不同的養(yǎng)殖系統(tǒng)間遷移的過程中，也可能攜帶受感染的水體而傳播病原[9]。甚至有研究表明，眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲渦孢子由于體積較小，可通過氣溶膠進(jìn)行傳播[37]。另外，新引入的魚種也具有攜帶病原的風(fēng)險(xiǎn)，需對新引進(jìn)的魚種進(jìn)行消毒處理。死魚是潛在的病原攜帶媒介，因?yàn)樽甜B(yǎng)體可從死魚中脫落并在池底發(fā)育形成包囊。因此，盡快清除養(yǎng)殖系統(tǒng)中的死魚，并定期清除池底的污染物，有助于減少水體中的蟲體數(shù)量[1,9]。

迄今為止，世界各地流行的眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲病原是否屬于同一物種仍存在分歧。Levy等[38]對來自紅海、地中海和墨西哥灣等海域的5株眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲分離株的內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)進(jìn)行序列分析，發(fā)現(xiàn)源于不同地區(qū)蟲株的基因差異不大，所有分離株均為同一物種。然而，也有研究人員發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)分離株的環(huán)境耐受性存在差異，特別是對鹽度的耐受性差異極大[18]。Noga等[29]在大西洋西部發(fā)現(xiàn)一株眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲蟲株，其渦孢子形態(tài)特征與之前報(bào)道的北卡羅來納株存在明顯差異。因此，目前并不能排除不同地區(qū)的菌株實(shí)際上是亞種或更低類群的可能性。

2.3 危害

當(dāng)有少量眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲寄生時(shí)，宿主不表現(xiàn)出任何病理變化，只有當(dāng)蟲體數(shù)量異常增多或宿主抵抗力下降時(shí)，宿主才表現(xiàn)出明顯的患病癥狀，若處理不及時(shí)可引起宿主大量死亡，但不同魚類對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的易感性和耐受性存在差異[9,19,26]。

病魚的鰓組織病變最為嚴(yán)重，鰓絲可明顯看到滋養(yǎng)體寄生(圖3)，滋養(yǎng)體假根附著位點(diǎn)附近的上皮細(xì)胞出現(xiàn)渾濁腫脹，鰓上皮空泡變性[39]；嚴(yán)重感染時(shí),可見病魚鰓組織上皮脫離、繼發(fā)性片層融合、毛細(xì)血管擴(kuò)張和黏液細(xì)胞增殖，局部鰓小片變短甚至消失，少量鰓小片根部融合[7,15]。研究發(fā)現(xiàn)，眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲滋養(yǎng)體寄生可刺激宿主產(chǎn)生大量黏液，導(dǎo)致宿主鰓功能障礙，影響氧氣交換效率而缺氧，從而在短期內(nèi)造成養(yǎng)殖魚類大量死亡，病魚血清中的葡萄糖和甘油三酯濃度顯著高于健康魚(P<0.05)[40]，表明病魚處于慢性應(yīng)激狀態(tài)，需提高代謝以應(yīng)對機(jī)體更高的能量需求。金頭鯛Sparusaurata在感染眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲18 h后，皮質(zhì)醇和乳酸水平高于對照組，而鰓中的Na+/K+-ATP酶活性低于對照組[41]。重牙鯛Diplodussargus對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲感染所呈現(xiàn)的應(yīng)激、血清指標(biāo)和組織病理學(xué)反應(yīng)與年齡大小相關(guān)，相比于發(fā)育成熟的重牙鯛(101.3 g±10.4 g)，年幼的重牙鯛(50.0 g±5.1 g)應(yīng)對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲感染時(shí)防御系統(tǒng)不夠成熟，應(yīng)激反應(yīng)更加強(qiáng)烈[42]。

A—滋養(yǎng)體寄生導(dǎo)致鰓組織彌漫性病變(H.E染色)；B—鰓組織上皮損傷、增生并在鰓小片之間形成腔隙，細(xì)胞浸潤(H.E染色)；C—滋養(yǎng)體寄生于口腔導(dǎo)致上皮損傷并增生(PAS-法阿爾新藍(lán)染色)；D—滋養(yǎng)體中的淀粉顆粒被染成紅色，咽道上皮內(nèi)有豐富的黏液細(xì)胞(PAS-法阿爾新藍(lán)染色)。A—attached trophonts inducing severe and diffuse epithelial degeneration of lamellae(H.E staining); B—epithelial damage,hyperplasia with lacunae formation between lamellae,and cellular infiltrate(H.E staining); C—buccal cavity showing attached trophonts and epithelial damage with hyperplasia(Pas-Alcian blue staining); D—starch granules in A.ocellatum trophonts stained in red and very abundant mucous cells in the epithelium of pharyngeal tract(Pas-Alcian blue staining).圖3 病魚鰓組織病理學(xué)分析[7]Fig.3 Pathological analysis of gill from diseased fish[7]

3 診斷

對病原進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定，是有效控制疾病的前提。淀粉卵渦鞭蟲病具有較高的發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重感染時(shí)可導(dǎo)致宿主急性死亡[7-8]。因此，對病魚患病初期的及時(shí)診斷具有重要意義。目前，生產(chǎn)過程中常應(yīng)用臨床癥狀觀察、顯微鏡觀察和分子生物學(xué)等方法進(jìn)行病魚診斷。

3.1 臨床癥狀

臨床癥狀觀察是最直接、最基本的診斷方法。眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲具有廣泛的致病性，當(dāng)有少量蟲體寄生時(shí)，病魚不會(huì)表現(xiàn)出病理特征，往往難以察覺。當(dāng)嚴(yán)重感染時(shí)，病魚體色變暗，體表黏液分泌增多，食欲下降，喜歡聚集在水體上層或者含溶解氧較多的水域，依靠在附著物上不斷摩擦身體，痙攣性喘息或不協(xié)調(diào)地游動(dòng)(圖4)。在光線照射下，可以看到病魚皮膚附著有大量天鵝絨狀的白色顆粒物質(zhì)。感染嚴(yán)重的病魚鰓絲發(fā)白甚至腐爛，魚體因呼吸困難最終缺氧死亡[4,33,43]。通過對病魚臨床癥狀觀察可做出初步診斷，為確診提供必要的線索。需要注意的是，病魚臨床癥狀觀察并不能有效確診，存在誤診的風(fēng)險(xiǎn)。如臨床癥狀診斷時(shí)常將海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病與刺激隱核蟲病混淆[44]。

3.2 顯微鏡觀察

淀粉卵渦鞭蟲病的確診需基于臨床癥狀和鏡檢相結(jié)合，當(dāng)發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖魚類出現(xiàn)患病癥狀時(shí)，可采集病魚的鰓絲、鰭條或體表黏液制成濕片，利用光學(xué)顯微鏡(40倍或100倍)觀察，若觀察到蟲體呈梨形或球形黑色顆粒狀且數(shù)量較多，則可確診為淀粉卵渦鞭蟲病[9](圖5)。利用光學(xué)顯微鏡對患病魚進(jìn)行病原檢測，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中是一種簡單、快速和低成本的有效方法。

A—寄生在鰓組織中的滋養(yǎng)體(紅色箭頭指示處); B—寄生在鰭條中的滋養(yǎng)體(紅色箭頭指示處)。A—the red arrow shows the parasitic A.ocellatum trophonts on the gills; B—the red arrow shows the parasitic A.ocellatum trophonts on the fins.圖5 病魚組織中眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲滋養(yǎng)體寄生觀察Fig.5 Microscopic observation of trophonts on diseased fish

3.3 分子生物學(xué)方法

目前，分子生物學(xué)檢測技術(shù)已逐漸應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類病原的早期檢測，常用的分子檢測方法有常規(guī)PCR、巢氏PCR、實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)等[45]。如Levy等[38]針對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的核糖體DNA區(qū)域，開發(fā)了一種敏感且特異的PCR檢測方法，該方法可檢測出眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲生活史周期的任一階段且特異性強(qiáng)，不受水體中浮游生物或魚體鰓組織的影響。Picón-Camacho等[46]利用LAMP法建立了一種快速檢測眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的分子診斷方法，該方法靈敏度顯著高于常規(guī)PCR方法，可檢測出水體中的單個(gè)包囊或滋養(yǎng)體且不受水體或鰓組織中抑制物質(zhì)的影響。總而言之，分子生物學(xué)檢測具有簡便、快速和靈敏等特點(diǎn)，有助于水產(chǎn)養(yǎng)殖中眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲感染的早期檢測。

4 防治措施

預(yù)防和治療魚類寄生蟲病的常用策略為切斷蟲體生活史周期以阻止其增殖和傳播。目前，海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的防治策略主要包括物理防控、化學(xué)防控、免疫防控和生物防控4個(gè)方面，在實(shí)際生產(chǎn)中可根據(jù)養(yǎng)殖條件靈活采用不同的治療措施。

4.1 物理防控

沖洗養(yǎng)殖系統(tǒng)和過濾水體中的包囊是物理防控海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的主要方式。此類方法在包囊未孵化出渦孢子之前將其清除，可減少水體中蟲體的數(shù)量，達(dá)到減緩疾病的作用[47]。然而，該方法僅限于小型循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)，使用局限性較大。

4.2 化學(xué)防控

4.2.1 硫酸銅 硫酸銅是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最常用的化學(xué)藥物之一，在防控淀粉卵渦鞭蟲病方面也頗為有效[23,48]。生產(chǎn)過程中，將患病魚置于1 mg/L硫酸銅溶液中藥浴4 h，可100%驅(qū)除魚體上寄生的滋養(yǎng)體。蟲體體外試驗(yàn)結(jié)果表明，渦孢子對硫酸銅十分敏感，用質(zhì)量濃度為3.13、0.78、0.20 mg/L的硫酸銅溶液分別藥浴處理10、30、60 min，均可100%殺滅渦孢子，而包囊對硫酸銅具有較強(qiáng)的耐受性，即使在質(zhì)量濃度為100 mg/L的硫酸銅溶液中連續(xù)藥浴，仍能繼續(xù)發(fā)育，在利用硫酸銅治療海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病時(shí)，殺死水體中自由游動(dòng)的渦孢子以切斷其生活史是關(guān)鍵[49]。然而，養(yǎng)殖水體中過量的銅離子對水生生物具有毒害作用[50-51]，且不同魚類對硫酸銅的耐受性存在差異[52-53]，因此，生產(chǎn)上需科學(xué)合理地使用硫酸銅防控淀粉卵渦鞭蟲病，切不可盲目增加硫酸銅的使用劑量。

4.2.2 福爾馬林 福爾馬林(含體積分?jǐn)?shù)為37%～40%的甲醛)具有較強(qiáng)的防腐殺蟲能力，能使眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的蛋白質(zhì)變性，可達(dá)到殺滅蟲體、防治魚病的目的[15,54]。Fajer-vila等[54]將感染眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的黑點(diǎn)圓鲀Sphoeroidesannulatus在質(zhì)量濃度為 51 mg/L的福爾馬林中藥浴1 h，可顯著減少病魚皮膚和鰓上的寄生蟲數(shù)量。Kizhakudan等[4]研究表明，使用100 mg/L福爾馬林藥浴病魚1 h，間隔1 d后再次藥浴病魚1 h，可完全消除養(yǎng)殖環(huán)境中的蟲體。

4.2.3 過氧化氫 過氧化氫是潛在的“綠色”治療劑，相對于傳統(tǒng)化學(xué)治療劑，過氧化氫具有環(huán)保、毒性小等特點(diǎn)。當(dāng)使用過氧化氫防控魚病后，水體中殘留的過氧化氫會(huì)降解為水和氧氣，生成無毒性殘留物排放到環(huán)境中[55-57]。Montgomery-Brock等[58]評估了過氧化氫控制馬鲅Polydactylussexfilis淀粉卵渦鞭蟲病的效果，結(jié)果顯示，使用75 mg/L過氧化氫溶液浸泡病魚30 min能有效減少滋養(yǎng)體數(shù)量，6 d后再次浸泡魚體30 min，可完全消除魚體和水體中的眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲。過氧化氫具有較大的應(yīng)用潛力，可以有效抵抗海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病，并可替代常規(guī)化學(xué)治療劑。

4.2.4 其他化學(xué)藥物 除上述常用藥物外，還有大量研究表明，氯喹、磷酸氯喹和3,N-甲基葡萄糖胺等化學(xué)藥物對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲均具有一定的殺滅作用[31,59-60]。由于暫無有效的疫苗，在海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的防治過程中，化學(xué)藥物浸泡仍是主要的防治方式(表2)。但化學(xué)藥物在殺蟲過程中對養(yǎng)殖魚類的毒性較大，因此，尋找對魚類安全性大、無藥性殘留、用藥濃度小、效應(yīng)快和成本低的藥物,是當(dāng)前魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)中亟待解決的問題。同時(shí)，眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲包囊對化學(xué)藥物具有較強(qiáng)的抗性，單次用藥往往不能有效根除該疾病，需反復(fù)多次用藥浸泡或化學(xué)藥物浸泡后倒池處理，可有效控制海水養(yǎng)殖魚類暴發(fā)淀粉卵渦鞭蟲病。

表2 治療淀粉卵渦鞭蟲病的常用化學(xué)藥物及其效果Tab.2 Common chemical drugs and their effects in the treatment of amyloodiniosis

4.3 免疫防控

在海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的防控方面，免疫防控比藥物防控更加安全有效，大量學(xué)者開展了宿主應(yīng)對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的免疫應(yīng)答研究(表3)，雖取得一定成果，但目前仍處于試驗(yàn)階段，未成功開發(fā)出商品化疫苗。Smith等[63]首次發(fā)現(xiàn)，奧尼羅非魚Oreochromisaureus經(jīng)渦孢子人工免疫后，可在血清中產(chǎn)生特異性抗體。Cobb等[64]以亞致死劑量的渦孢子反復(fù)多次感染白條雙鋸魚Amphiprionfrenatus后，再次感染時(shí)，白條雙鋸魚對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲產(chǎn)生明顯的抵抗力。通過ELISA法檢測病魚血清時(shí)，發(fā)現(xiàn)病魚的血清抗體效價(jià)升高，產(chǎn)生了特異性抗體[65]。對自然感染眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的海鱸血液樣本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)海鱸對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲產(chǎn)生了適應(yīng)性免疫反應(yīng)，暗示其對眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的二次感染具有抗性[66]。研究發(fā)現(xiàn)，免疫魚血清抑制了渦孢子對細(xì)胞的感染能力，渦孢子在細(xì)胞培養(yǎng)液中運(yùn)動(dòng)減緩，細(xì)胞培養(yǎng)物中的渦孢子感染性與血清抗體效價(jià)成反比，且新鮮的血清比加熱滅活的血清對渦孢子具有更強(qiáng)的抑制效果[67]。

表3 眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲誘導(dǎo)魚體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)Tab.3 The immune response in fish induced by Amyloodinium ocellatum

4.4 生物防控

生物防控是指利用某些生物的生活習(xí)性抑制特定有害生物的種群密度，使其危害減少[68]。目前，生物防控策略在海水魚淀粉卵渦鞭蟲病中研究較少。Oestmann等[69]研究發(fā)現(xiàn)，鹵蟲Artemiasalina能減少美國紅魚Sciaenopsocellatus養(yǎng)殖系統(tǒng)中的渦孢子數(shù)量，但鹵蟲吞食渦孢子的能力有限，難以應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中。Zhong等[70]利用紅羅非魚Oreochromisniloticus×O.mossambicus雜食性的特點(diǎn)，將不易受刺激隱核蟲感染的紅羅非魚與易受刺激隱核蟲感染的卵形鯧鲹混合飼養(yǎng)，能有效減少水體中刺激隱核蟲包囊數(shù)量，防止卵形鯧鲹被刺激隱核蟲二次感染。Imsland等[71]將圓鰭魚Cyclopteruslumpus和大西洋鮭Salmosalar混合飼養(yǎng)，利用圓鰭魚捕食海虱Lepeophtheirussalmonis的特性，有效減少了海虱感染大西洋鮭的機(jī)率。目前，將對病原體易感性不同的養(yǎng)殖魚類混合飼養(yǎng)，利用不易感魚吞食病原體的特性，減少養(yǎng)殖水體中病原體數(shù)量，這種防控策略在海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病生物防控中尚未見報(bào)道，但防控思路值得借鑒。

4.5 其他防控策略

除了物理防控、化學(xué)防控、免疫防控和生物防控策略外，還可通過在飼料中添加益生菌或益生元提高魚體的先天免疫系統(tǒng)活力，以對抗眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的感染[72-73]。在日常養(yǎng)殖過程中還應(yīng)加強(qiáng)養(yǎng)殖水體的管理、養(yǎng)殖工具定期消毒(防止各養(yǎng)殖系統(tǒng)病原的交叉?zhèn)鞑?和魚體日常檢查等工作。

5 存在問題及展望

5.1 海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病研究及防控中存在的問題

眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲是熱帶、亞熱帶地區(qū)常見的海水魚類寄生蟲，環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，嚴(yán)重感染時(shí)可導(dǎo)致宿主迅速死亡。國內(nèi)外學(xué)者對淀粉卵渦鞭蟲病及其病原眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲展開了大量研究，該寄生蟲的生活史、形態(tài)結(jié)構(gòu)、傳播方式和流行情況已基本明確。然而，海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的研究和防控仍存在以下幾方面的問題。

1)在淀粉卵渦鞭蟲病的防控方面，目前仍以硫酸銅、福爾馬林等常見殺蟲藥物為主，具有一定的效果，但長期使用該類化學(xué)藥物會(huì)造成環(huán)境污染，不利于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

2)眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲感染誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫反應(yīng)的機(jī)制及魚類免疫系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制研究相對滯后，導(dǎo)致疫苗研發(fā)困難。

3)關(guān)于眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的人工感染方法、包囊收集、包囊計(jì)數(shù)和渦孢子計(jì)數(shù)等缺乏標(biāo)準(zhǔn)化方法，不同科研工作者使用方法不一，誤差較大。建立一套眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲標(biāo)準(zhǔn)化感染模型，以及探尋更加高效的包囊收集和計(jì)數(shù)策略具有重要意義。

4)在眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲生活史不同時(shí)期，渦孢子對化學(xué)藥物敏感，容易殺滅，但包囊和滋養(yǎng)體對化學(xué)藥物均具有較強(qiáng)的耐受性，導(dǎo)致單次用藥往往難以消除疫病，需多次反復(fù)用藥或長期用藥。因此，探尋包囊和滋養(yǎng)體對化學(xué)藥物的耐受機(jī)制，尋找能有效殺滅或清除水體包囊的方法是亟待解決的問題。

5)在海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病研究過程中，為獲得足夠數(shù)量的包囊和渦孢子用于試驗(yàn)，需要利用活魚作為宿主進(jìn)行人工傳代。該項(xiàng)工作成本較高，操作煩瑣，為保證蟲株不丟失，即使在不需要蟲株用于試驗(yàn)時(shí)傳代工作仍不能間斷，造成時(shí)間和經(jīng)濟(jì)上的巨大浪費(fèi)。

5.2 未來研究和防控展望

近幾十年，世界對魚類產(chǎn)品的需求激增，在當(dāng)前漁業(yè)捕撈近乎飽和的情況下，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)將成為增加魚類產(chǎn)量的主要方式。然而，水產(chǎn)養(yǎng)殖中的疾病問題是制約集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖健康發(fā)展的主要障礙。在養(yǎng)殖密度高且水體交換量小的養(yǎng)殖環(huán)境中，眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲可迅速增殖和傳播，危害宿主。為有效防控海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病，減少該病暴發(fā)造成的經(jīng)濟(jì)損失，需做到“管理預(yù)防為主、綜合治理為要”。未來關(guān)于海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的研究和防控仍需加強(qiáng)以下幾方面的工作:

1)科學(xué)養(yǎng)殖，優(yōu)化養(yǎng)殖密度。根據(jù)眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲的生活史特性，在高密度養(yǎng)殖環(huán)境下，蟲株會(huì)迅速增殖，加快疫病暴發(fā)。因此，養(yǎng)殖過程中需做到科學(xué)養(yǎng)殖管理，合理控制魚類養(yǎng)殖密度。

2)預(yù)防為主，加強(qiáng)病原檢測。利用分子生物學(xué)手段加強(qiáng)對養(yǎng)殖環(huán)境中的病原檢測，在疫病暴發(fā)之前提前預(yù)警，最大程度地減少疫病造成的經(jīng)濟(jì)損失。

3)探尋蟲株低溫保存策略。目前，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中精原干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞均可實(shí)現(xiàn)低溫冷凍保存，未來要積極探尋眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲在滋養(yǎng)體階段或包囊階段的低溫保存策略，為海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的研究提供便利。

4)積極探索宿主發(fā)病機(jī)制。淀粉卵渦鞭蟲病發(fā)病機(jī)制與多種因素密切相關(guān)，目前發(fā)病機(jī)制不詳，導(dǎo)致不能從根本上消除疫病。未來可通過轉(zhuǎn)錄組、代謝組等手段，闡明淀粉卵渦鞭蟲病的發(fā)病機(jī)制，以拓寬對該病的認(rèn)識。

5)篩選綠色且高效的殺蟲藥物。為有效防控海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病，需積極探尋更加高效且綠色的殺蟲藥物，消除硫酸銅、福爾馬林等常規(guī)化學(xué)藥物治療魚病時(shí)危害環(huán)境的缺陷，保障水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

6)加強(qiáng)疫苗研發(fā)的基礎(chǔ)研究。目前，海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病疫苗研究成果較少，且免疫機(jī)制尚不清楚。研發(fā)安全、高效的淀粉卵渦鞭蟲病疫苗是防控海水魚類淀粉卵渦鞭蟲病的關(guān)鍵。因此，積極探尋眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲寄生誘導(dǎo)魚體產(chǎn)生的免疫調(diào)控機(jī)制、加快疫苗研發(fā)進(jìn)程具有重要意義。