李付鸞 董文弟 劉云 賈妥 孟玉 張曉寧 趙曉芳

炎癥性腸病(IBD)指非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)。UC 是一種原因不明的慢性結(jié)腸炎,主要是侵及結(jié)腸黏膜的慢性非特異性炎性疾病,常始自左半結(jié)腸,可向結(jié)腸近端乃至全結(jié)腸以連續(xù)方式逐漸進(jìn)展［1］。UC 在西方國(guó)家非常常見,發(fā)病率為(10～200)/10 萬［2］。我國(guó)目前尚缺乏大規(guī)模的以人口為基礎(chǔ)的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù),粗略估計(jì)我國(guó)UC 患病率為11.6/10 萬［3］。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)2018 年9 月通過的“炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見”,美沙拉嗪為炎性腸炎治療藥物A 級(jí)推薦。國(guó)外上市的美沙拉秦緩控釋制劑較多［4］,除Salofalk 外,還有緩慢釋放型美沙拉秦(Asacol)、時(shí)間依賴型美沙拉秦(Pentasa)、pH 依賴性緩釋型美沙拉秦(Apriso)和高濃度美沙拉秦緩釋膠囊(Lialda)［5］。國(guó)內(nèi)目前無美沙拉嗪產(chǎn)品通過一致性評(píng)價(jià)。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局自制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)專家委員會(huì)審核確定的第十批參比制劑目錄確定原研藥Salofalk 為自制藥美沙拉嗪腸溶片的參比制劑。本研究按照《國(guó)務(wù)院辦公廳關(guān)于開展自制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)的意見》(國(guó)辦發(fā)［2016］8 號(hào))和國(guó)家藥品監(jiān)督管理局《關(guān)于發(fā)布普通口服固體制劑參比制劑選擇和確定等3 個(gè)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》(2016 年第61 號(hào))的有關(guān)要求,開展了自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥(參比制劑Salofalk)的體外釋放曲線一致性評(píng)價(jià)研究。由于美沙拉秦生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)分類為4 類,酸性介質(zhì)中的溶解度很小,自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥 (參比制劑Salofalk)在pH 1.0 鹽酸、pH 4.5 醋酸鹽、水介質(zhì)中2 h 內(nèi)藥物釋放均<20%,推斷在這3 種介質(zhì)中的釋放不具備區(qū)分能力。故本研究著重測(cè)定了自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥(參比制劑Salofalk)在pH 6.8 和pH 7.4 磷酸鹽介質(zhì)中的釋放曲線。本研究采用美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)和日本醫(yī)療器械審評(píng)審批機(jī)構(gòu)(PMDA)推薦采用相似因子比較法評(píng)價(jià)自制藥美沙拉嗪腸溶片與原研藥(參比制劑Salofalk)釋放曲線一致性［6］,指導(dǎo)自制藥美沙拉嗪腸溶片的質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)研究,以提高自制藥與原研藥生物等效性(BE)試驗(yàn)的成功率。

1 材料與方法

1.1儀器 Agilent 708-Ds 自動(dòng)溶出儀(美國(guó)Agilent公 司)；UV2600 紫外。可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；pH 計(jì)FE-28(梅特勒)；電子天平AUW120D(日本島津公司)；FAVD-25(上海富科思)。

1.2試藥 自制藥美沙拉嗪腸溶片(石家莊蒎格醫(yī)藥科技有限公司,規(guī)格：250 mg,批號(hào)：200171、200172、200173)；生產(chǎn)規(guī)模：24 萬片/ 批。原研藥Salofalk(德國(guó)Dr Falk Pharma GmbH,規(guī)格：250 mg,批號(hào)：16B04458L、17I21478L、18A11484L)；美沙拉嗪腸溶片對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)：100565-201802,含量：99.4%)；二水合磷酸二氫鈉(AR,科密歐)；氫氧化鈉(AR,天津永大化學(xué))、磷酸二氫鉀(AR,科密歐)、冰醋酸(AR,天津天大化學(xué))；結(jié)晶醋酸鈉(AR,天津天大化學(xué))；鹽酸(AR,科密歐)；實(shí)驗(yàn)用水為純化水(華北制藥有限公司)。

1.3釋放曲線測(cè)定方法 釋放曲線測(cè)定采用照紫外-可見分光光度法(中國(guó)藥典2015 年版四部通則0401),精密量取各取樣點(diǎn)的供試品或?qū)φ掌啡芤? ml,用相應(yīng)的緩沖溶液稀釋到50 ml,在330 nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。供試品溶液：取自制藥美沙拉嗪腸溶片或原研藥(參比制劑Salofalk)按照《中華人民共和國(guó)藥典》2015 年版四部通則溶出度與釋放度測(cè)定法第一法,轉(zhuǎn)速 50 r/min,分別以pH 1.0 鹽酸、pH 4.5 醋酸、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水或pH 7.4 磷酸鹽緩沖液為釋放介質(zhì),體積 900 ml,在不同取樣點(diǎn)取樣5 ml 即得。每次取樣后回補(bǔ)釋放介質(zhì)5 ml。對(duì)照品溶液：精密稱取美沙拉嗪腸溶片對(duì)照品3 mg,分別加入pH 1.0 鹽酸、pH 4.5醋酸、pH 6.8 磷酸鹽緩沖液、水或pH 7.4 磷酸鹽緩沖液溶解定容至100 ml。即得每1 ml 中約含美沙拉嗪30 μg 的溶液,作為對(duì)照品溶液。

2 結(jié)果

2.116B04458L、17I21478L、18A11484L 批參比制劑在不同介質(zhì)中的溶出結(jié)果 三批參比制劑在4 種介質(zhì)中的溶出均較慢,具有明顯的pH值依賴。在介質(zhì)pH 6.8和7.4 磷酸鹽緩沖液中具有平滑的曲線形態(tài),溶出時(shí)間在2 h 可達(dá)到80%以上,而其他介質(zhì)中溶出較慢,且在溶出過程中片間差異較大。結(jié)合所得數(shù)據(jù)并參考美沙拉嗪片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),選擇介質(zhì)pH 6.8 或7.4 磷酸鹽緩沖液作為自制樣品的溶出介質(zhì)。見表1～3 及圖1～3 溶出數(shù)據(jù)和溶出曲線圖。

圖1 16B04458L 參比制劑Salofalk 在不同介質(zhì)中的溶出曲線

表1 16B04458L 批參比制劑在不同介質(zhì)中的溶出結(jié)果(%)

2.2自制樣品在不同介質(zhì)中的溶出結(jié)果 200171、200172、200173 自制樣品溶出趨勢(shì)與參比制劑一致,相似因子均達(dá)到50%以上,并且2 h 溶出達(dá)到85%以上,溶出曲線平滑,溶出行為相似。見表4,表5 及圖4,圖5。

圖2 17I21478L 參比制劑在不同介質(zhì)中的溶出曲線

圖3 18A11484L 參比制劑在不同介質(zhì)中的溶出曲線

圖4 自制樣品在pH 6.8 磷酸鹽緩沖液介質(zhì)中的溶出曲線

圖5 自制樣品在pH 7.4 磷酸鹽緩沖液介質(zhì)中的溶出曲線

表2 17I21478L 批參比制劑在不同介質(zhì)溶出數(shù)據(jù)結(jié)果(%)

表3 18A11484L 批參比制劑在不同介質(zhì)中的溶出結(jié)果(%)

表4 自制樣品在pH 6.8 磷酸鹽緩沖液介質(zhì)中的溶出度結(jié)果(%)

表5 自制樣品在pH 7.4 磷酸鹽緩沖液介質(zhì)中的溶出度結(jié)果(%)

3 討論

美沙拉嗪屬于BCS4 類,為低溶低滲藥物,相較于BCS1 類等藥物仿制難度較大,對(duì)于緩控釋制劑,仿制難度又有所增加。美沙拉嗪腸溶片屬于多層包衣腸溶片,參比制劑Salofalk 批間差異較大,所以美沙拉嗪腸溶片仿制難度極大［7,8］。這應(yīng)該是目前為止國(guó)內(nèi)尚沒有美沙拉嗪腸溶片通過一致性評(píng)價(jià)的主要原因。固體口服制劑的體外溶出度檢測(cè)是體外評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量的重要指標(biāo),對(duì)藥物的臨床實(shí)驗(yàn)起著重要的指導(dǎo)作用［9］。尤其是自制藥,其體外溶出行為與參比制劑是否具有相似性,是決定后續(xù)是否開展生物等效性實(shí)驗(yàn)的重要參考,也是自制藥品是否與參比制劑質(zhì)量一致性的重要參考指標(biāo)。

通過對(duì)參比制劑Salofalk 與自制藥美沙拉嗪腸溶片在pH 6.8、pH 7.4 磷酸鹽緩沖液中的溶出行為與溶出數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比,相似因子>50%,溶出曲線平滑、趨勢(shì)一致。在對(duì)比研究參比制劑Salofalk 與自制藥在pH 1.0 鹽酸溶液、pH 4.5 醋酸溶液、水介質(zhì)溶出行為時(shí)發(fā)現(xiàn)2 h 內(nèi)溶出行為相似,但溶出均<20%。綜合考慮藥物在不同介質(zhì)中的溶出行為,選定pH 6.8、pH 7.4 磷酸鹽緩沖液為溶出的主要研究介質(zhì)。

綜上所述,經(jīng)過多批次自制藥美沙拉嗪腸溶片與參比制劑Salofalk 在不同溶出介質(zhì)中的溶出行為研究,兩者溶出行為一致,為其體內(nèi)的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。