張璐，張土金

1.南昌市檢驗(yàn)檢測中心，江西 南昌 330000；2.江西省上高婦幼保健院，江西 上高 336400

陳香露白露片為治療內(nèi)科胃腸潰瘍的常用中西藥復(fù)方制劑，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-1553-93》，其制法是將甘草、陳皮、川木香、石菖蒲、大黃等5 味中藥碎成細(xì)粉，與次硝酸鉍、氧化鎂、碳酸鎂、碳酸氫鈉等4 種化學(xué)藥混勻，制粒，壓片而成［1］。

2020 年版《中國藥典》明確指出中藥在種植、生產(chǎn)、加工等過程中可能會(huì)引入鋁、鉻、鐵、鋇等重金屬元素，并且甘草、川木香、石菖蒲、大黃等藥材為根及根莖部位入藥，陳皮取果皮入藥，均為有害重金屬易富集的部位［2］，進(jìn)一步增加了陳香露白露片中有害重金屬元素的含量。有害重金屬元素含量過高容易導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液和器官組織（如胃、腎、皮膚等）中毒損傷，從而對人體健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害［3-8］，因此加強(qiáng)陳香露白露片中重金屬元素的監(jiān)控對其安全性具有重要意義。

針對藥物制劑中有害重金屬元素檢測的方法主要包括原子吸收光譜法（AAS）、原子熒光光譜法（AFS）和電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法（ICP-MS）,其中ICP-MS 法以靈敏度高、多目標(biāo)物同時(shí)檢測以及簡單快速的優(yōu)勢，成為了目前最具競爭力的重金屬檢測手段。因此，本實(shí)驗(yàn)參照2020年版《中國藥典》四部中藥元素檢測［2,9］，建立了ICP-MS 測定陳香露白露片中9 種元素鉛（Pb）、砷（As）、鎘（Cd）、汞（Hg）、銅（Cu）、鋁（Al）、鉻（Cr）、鐵（Fe）、鋇（Ba）含量的方法，為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高和臨床用藥安全性有效性的深入研究奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

MARS6 高通量密閉高壓微波消解儀（美國CEM 公司）；iCAP Q 電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國賽默飛世爾科技公司）；MettlerToledo XS105DU電子天平（瑞士梅特勒托利多公司）。

1.2 試藥

鉛（Cat#：PLPB2-2Y），砷（Cat#：PLAS2-2Y），鎘（Cat#：PLCD2-2Y），汞（Cat#：PLHG2-2Y），銅（Cat#：PLCU2-2Y），鋁（Cat#：PLAL2-2Y），鉻（Cat#：PLCR2-2Y），鐵（Cat#：PLFE2-2Y），鋇（Cat#：PLBA2-2Y），鈧（Sc），鍺（Ge），銦（In）和錸（Re）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（Cat#：ICMIX5-100），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為1 000 mg/L，均購自美國SPEXCertiPrep 公司；金標(biāo)準(zhǔn)溶液（GSB 04-1715-2004，國家有色金屬及電子材料分析測試中心，1 000 mg/L）；水為娃哈哈純凈水，硝酸（UP 級，蘇州晶瑞化學(xué)有限公司）。15批陳香露白露片樣品來自2 個(gè)生產(chǎn)廠家：湖南漢森制藥股份有限公司（企業(yè)1）批號2007118（Y1）、2007116（Y2）、2101101（Y3）、2008110（Y4）、2101116（Y5）、2102111（Y6）、2101109（Y7）；云南白藥集團(tuán)大理藥業(yè)有限責(zé)任公司（企業(yè)2）批號DDA2033（Y8）、DFA2041（Y9）、DFA2040（Y10）、DJA2001（Y11）、DDA2035（Y12）、DGA1904（Y13）、DLA2031（Y14）、FDA2036（Y15）；以上規(guī)格均為0.5 g/片。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器方法

掃描方式：標(biāo)準(zhǔn)模式（STD）；采樣深度：5.00 mm；射頻功率：1 550.00 w；輔助氣和載氣流速分別為0.85、1.06 L/min（均為氬氣），冷氣流流速：14.50 L/min；霧化室溫度：2.70 ℃；停駐時(shí)間：0.02 s；掃描次數(shù)：100；重復(fù)次數(shù)：3 次；測定時(shí)間：50 s。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液精密量取鉛、砷、鎘、汞、銅、鋁、鉻、鐵、鋇標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%硝酸溶液分別制成含鉛、砷濃度為0、1、5、10、20 μg/L，含鎘濃度為0、0.5、2.5、5、10 μg/L，含汞濃度為0、0.2、l、2、5 μg/L，含銅、鐵濃度為0、50、100、200、500 μg/L，含鋁、鉻、鋇濃度為0、25、50、100、200 μg/L 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液精密量取鈧、鍺、銦、錸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加2%硝酸溶液制成濃度為l mg/L 的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.3 供試品溶液在微波消解管中，稱取供試品約0.3 g，硝酸5 mL，密閉微波消解。消解共分4 個(gè)階段：第1 階段功率500 w，升溫時(shí)間為3 min，溫度為100 ℃，保持5 min；第2 階段功率800 W，升溫時(shí)間為5 min，溫度為120 ℃，保持10 min；第3階段功率1 000 W，升溫時(shí)間為5 min，溫度為150 ℃，保持5 min；第4 階段功率500 w，升溫時(shí)間為3 min，溫度為100 ℃，保持5 min。消解結(jié)束后，消解液冷卻至60 ℃以下，轉(zhuǎn)入50 mL 量瓶中，加入金（Au）標(biāo)準(zhǔn)溶液（取Au 標(biāo)準(zhǔn)液適量，加水稀釋成1 mg/mL）200 μL，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 空白溶液在不加入供試品的條件下，按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作，制得空白溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項(xiàng)下系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入“2.2.2”項(xiàng)下內(nèi)標(biāo)溶液，然后按“2.1”項(xiàng)下ICP-MS 條件進(jìn)樣檢測，記錄信號響應(yīng)值。分別以待測元素質(zhì)量濃度（μg/L）為橫坐標(biāo)，待測元素與對應(yīng)內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值的比值（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。取樣品空白溶液，連續(xù)進(jìn)樣20 次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差，檢測限（LOD）為各元素信號響應(yīng)值的3 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示，各待測元素在相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系（r均大于0.999 0），結(jié)果見表1，結(jié)果表明該方法可用于多濃度水平的重金屬元素分析。

表1 9種重金屬元素的回歸方程、線性范圍和檢測限（μg/L)

2.4 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下條件連續(xù)進(jìn)樣測定6 次，鉛、砷、鎘、汞、銅、鋁、鉻、鐵、鋇元素RSD 依次為1.27%、2.18%、1.49%、1.52%、1.78%、2.55%、1.97%、2.38%、1.22%，表明該儀器具有良好的精密度。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號2102111），分別于室溫下放置0、3、6、9、12、16、20、24 h，按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測定。結(jié)果供試品溶液中鉛、砷、鎘、汞、銅、鋁、鉻、鐵、鋇元素的RSD 依次為2.45%、1.86%、2.27%、2.52%、1.58%、2.06%、2.23%、2.15%、2.26%，表明該供試品溶液在24 h 內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批陳香露白露片（批號2102111）樣品，按“2.2.3”項(xiàng)方法平行制備6 份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下條件測定。結(jié)果供試品溶液中鉛、砷、鎘、汞、銅、鋁、鉻、鐵、鋇元素的RSD 分別為1.26%、2.56%、1.68 %、2.15%、2.27%、1.78%、2.21%、2.42%、1.81%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的陳香露白露片（批號2102111）9份，每份約0.3 g，精密稱定，置微波消解罐中。按低、中、高3 個(gè)濃度，分別精密加入鉛、砷、鎘、汞、銅、鋁、鉻、鐵、鋇元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)體積各3 份，分別按“2.2.3”項(xiàng)方法下制備加樣回收供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下 ICP-MS 條件進(jìn)樣含量測定，每批樣品平行測定2 次，取平均值，計(jì)算各元素的加樣回收率，結(jié)果見表2。結(jié)果表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度，可用于陳香露白露片中9 種重金屬元素的準(zhǔn)確測定。

表2 9種重金屬元素的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2（續(xù)）

2.8 樣品含量測定

取15 批陳香露白露片樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按“2.1”項(xiàng)下ICP-MS 條件進(jìn)行樣品測定，并計(jì)算9 種元素的含量，結(jié)果見表3，結(jié)果顯示15 批次樣品中檢出不同濃度水平的多種重金屬元素。

表3 9種重金屬元素的含量測定結(jié)果（mg/kg）

3 討論

3.1 內(nèi)標(biāo)元素選擇

2020 年版《中國藥典》四部鉛、鎘、砷、汞、銅測定法中規(guī)定以209Bi 作為202Hg、208Pb 測定的內(nèi)標(biāo)［9］，但是次硝酸鉍為陳香露白露片中的主要成分，根據(jù)內(nèi)標(biāo)物選擇原則，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)為試樣中不存在的純物質(zhì)，且內(nèi)標(biāo)物與被分析物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)（如質(zhì)量數(shù)、電離能等）應(yīng)具有相似性，因此選擇45Sc作為27Al、52Cr、56Fe 的內(nèi)標(biāo)，72Ge 作為63Cu、75As、66Zn 的內(nèi)標(biāo)，115In 作為137Ba、114Cd 內(nèi)標(biāo)，185Re 作為202Hg、208Pb 的內(nèi)標(biāo)元素。

3.2 結(jié)果分析

2020 版《中國藥典》一部對中藥材重金屬及有害元素檢查項(xiàng)中規(guī)定的限度為：鉛不得過5 mg/kg；鎘不得過1 mg/kg；砷不得過2 mg/kg；汞不得過0.2 mg/kg；銅不得過20 mg/kg［9］；而中國藥典中并未對鋁、鉻、鐵、鋇元素有限度規(guī)定，本實(shí)驗(yàn)參考國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）中Q3D 元素雜質(zhì)指南規(guī)定鋇、鉻元素為第三類元素，允許日暴露量（PDE）值＞500 μg/d［10］，按5 片/ 次，3 次/d的用法用量，鋇、鉻元素的限度應(yīng)為67 mg/kg。本實(shí)驗(yàn)中2 個(gè)廠家15 批樣品含量檢測結(jié)果顯示鉛、砷、鎘、汞、銅、鋇、鉻等7 種元素均未超出限度。

鐵、鋁較其他7 種元素具有較高的含量水平。鐵為人體必需的元素之一，參與造血，維持體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)正常進(jìn)行，促進(jìn)生長［11-12］。鋁離子在藥品生產(chǎn)過程中可通過原輔料、生產(chǎn)設(shè)備及容器帶入到藥品中。鋁離子可以在人體內(nèi)長期蓄積，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生損害，導(dǎo)致老性癡呆，即阿爾茨海默?。?3］。但目前ICH 將鋁歸為固有毒性低或區(qū)域監(jiān)管的差異性類別，未對將其歸為強(qiáng)制控制的元素［10］。建議生產(chǎn)企業(yè)結(jié)合原輔料、生產(chǎn)工藝，對鋁元素進(jìn)行充分風(fēng)險(xiǎn)評估，建立內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，控制產(chǎn)品中鋁的含量。

本實(shí)驗(yàn)采用ICP-MS 法對陳香露白露片中多元素進(jìn)行分析，方法具有簡單快速、高效、準(zhǔn)確、無干擾的優(yōu)勢，不僅為其質(zhì)量控制提供了有效的方法，同時(shí)也為其安全性考察提供了科學(xué)的依據(jù)。