呂新玲，魯 謹(jǐn)，陳慧蕓，周志梅，鄭 敏

1.新疆伊犁哈薩克自治州奎屯醫(yī)院病理科，新疆 奎屯 833200；2.新疆石河子大學(xué)一附院婦科，新疆 石河子 832003；3.新疆伊犁哈薩克自治州奎屯醫(yī)院婦科，新疆 奎屯 833200

目前研究已經(jīng)證實(shí)人乳頭狀瘤病毒（HPV）是宮頸病變的主要病因，HPV 感染在不同國(guó)家、不同地區(qū)、不同民族存在差異，而且不同類型在宮頸病變中的致病性也有差異，目前已有大量有關(guān)漢族和維吾爾族婦女宮頸HPV感染的報(bào)道，而哈薩克族在此方面的報(bào)道很少，哈薩克族與漢族在此方面的對(duì)比研究較少，為了解本地區(qū)哈薩克族與漢族婦女宮頸HPV感染狀況及優(yōu)勢(shì)，為宮頸病變的防治、高危人群的篩查、流行病學(xué)調(diào)查提供數(shù)據(jù)資料和參考，本研究對(duì)在樣本醫(yī)院婦科進(jìn)行健康體檢、有性生活、自愿接受宮頸HPV 篩査的哈薩克族和漢族婦女進(jìn)行了宮頸HPV 檢測(cè)，用PCR-反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行基因分型，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2012 年3 月—2018 年6 月在樣本醫(yī)院婦科門診進(jìn)行健康體檢的人群中自愿參加HPV感染篩查、有性生活的337 例哈薩克族婦女，年齡18～69 歲，漢族婦女1 000 例，年齡18～76 歲，采集宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，進(jìn)行HPV 分型檢測(cè)，由經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員進(jìn)行操作。

1.2 標(biāo)本采集

所有研究對(duì)象在檢查前3 d 禁止進(jìn)行陰道沖洗及陰道內(nèi)用藥，避開月經(jīng)期，且婦檢前24 h未發(fā)生性行為，用窺陰器暴露宮頸，用棉拭子擦除表面分泌物，將樣本采樣刷插入宮頸口鱗柱交界處，單方向旋轉(zhuǎn)3～5圈，將采樣刷頭部放入洗脫管中，旋緊瓶蓋，做好標(biāo)識(shí)，放入-20 ℃冰箱保存，一周內(nèi)完成檢測(cè)。

1.3 儀器與試劑

亞能人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒（深圳亞能生物技術(shù)有限公司）可檢測(cè)23 種HPV 基因型，包括17 種高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82 型，6 種低危型：6、11、42、43、81、83型；凱普基因擴(kuò)增儀購(gòu)自廣東凱普生物科技股份有限公司，雜交儀為廣州安必平DA8000 型。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）樣本預(yù)處理、DNA 提取。（2）聚合酶鏈反應(yīng)：用PCR擴(kuò)增儀對(duì)提取的DNA進(jìn)行擴(kuò)增；引物采用的目的基因片段為HPVL1 基因，大小為452 bp。（3）雜交：擴(kuò)增DNA 產(chǎn)物與膜條上的探針雜交，孵育，避光顯色，具體操作步驟按試劑盒及儀器使用說(shuō)明進(jìn)行。（4）結(jié)果判讀：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后每張膜條上PC 位點(diǎn)均出現(xiàn)藍(lán)色信號(hào)，除PC 位點(diǎn)陽(yáng)性信號(hào)外，23 種HPV 基因型別位點(diǎn)上出現(xiàn)藍(lán)色信號(hào)為陽(yáng)性，可以是出現(xiàn)一個(gè)陽(yáng)性信號(hào)的單一感染，也可以是出現(xiàn)兩個(gè)及以上陽(yáng)性信號(hào)的混合感染。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩族婦女宮頸HPV、高危型HPV感染情況

有94 例哈薩克族婦女宮頸HPV 感染為陽(yáng)性，總感染率為27.89%，高危型感染率為24.33%，除82、83型別外，其余21種均有檢出；有251例漢族婦女宮頸HPV感染為陽(yáng)性，總感染率為25.10%，高危型感染率為21.80%，23 種型別均有檢出；兩個(gè)民族婦女宮頸HPV總感染率、高危型感染率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.03、0.93，P＞0.05），見(jiàn)表1、表2。

表1 兩族婦女宮頸HPV感染情況

表2 兩族婦女高危型HPV感染情況

2.2 兩族婦女宮頸HPV各亞型單一基因型感染分布情況

94 例HPV 陽(yáng)性的哈薩克族婦女中，HPV 單一基因型感染62 例，占感染人數(shù)的65.96%，其中12 例為低危型單一感染，單一基因型感染最常見(jiàn)的亞型依次為52、16、56、81、18、53 型；251 例HPV 陽(yáng)性的漢族婦女中，HPV單一基因型感染172例，占感染人數(shù)的68.53%，其中31例為低危型單一感染，單一基因型感染最常見(jiàn)的亞型依次為52、16、42、51、53、56型。

2.3 兩族婦女宮頸HPV 多重（多種基因型）感染的分布情況

94 例HPV 陽(yáng)性的哈薩克族婦女中HPV 的多重感染率為34.04%，大多數(shù)是HPV52、16 型與其他亞型混合感染，多為二重感染，其余為三重、四重感染，1例為六重感染，無(wú)單純低危型混合感染；251 例HPV 陽(yáng)性的漢族婦女中HPV 的多重感染率為31.47%，同樣是HPV52、16 型與其他亞型混合感染，大多為二重感染，其余為三重、四重和五重感染，2例為單純低危型混合感染。

2.4 兩族婦女宮頸高危亞型HPV出現(xiàn)的頻率

如表3所示，94例宮頸HPV 陽(yáng)性的哈薩克族婦女中各高危亞型出現(xiàn)的頻率總計(jì)為120 次，HPV52 在陽(yáng)性觀察對(duì)象中出現(xiàn)的頻率最高，達(dá)到15.83%，其次為HPV16（15.00%）、HPV53（10.00%）、HPV51（9.17%）、HPV39（7.50%）/HPV56（7.50%）和HPV18（6.67%），251 例宮頸HPV 陽(yáng)性的漢族婦女中各高危亞型出現(xiàn)的頻率總計(jì)為302 次，HPV52 在陽(yáng)性觀察對(duì)象中出現(xiàn)的頻率最高，達(dá)到25.5%， 其 次 為HPV16 （12.91%）、 HPV51 （8.94%）、HPV53 （6.62%）、HPV58 （6.29%）和HPV56（5.63%）/HPV68（5.63%）型。

表3 兩族不同型別HR-HPV的檢出情況 例（%）

2.5 兩族婦女不同年齡組HR-HPV感染的分布情況

兩族婦女按年齡分成5 組，分別比較HR-HPV 感染率在各年齡組分布情況，哈薩克族婦女不同年齡組HR-HPV感染率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），哈薩克族婦女HR-HPV感染與年齡相關(guān)，在＜35歲年齡組明顯高于其他年齡組；漢族婦女不同年齡組HR-HPV 感染率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），漢族婦女HR-HPV 感染與年齡無(wú)關(guān)；HR-HPV感染在＜35歲組、35～40歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余各年齡組HR-HPV 感染率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；哈薩克族婦女在＜35歲年齡組存在感染高峰，而漢族婦女在45～50 歲、＞50歲年齡組感染率較高，見(jiàn)表4。兩族婦女低危型HPV 感染例數(shù)較少，共35例，且年齡分布較廣。

表4 兩族婦女不同年齡組HR-HPV感染分布情況

3 討論

近年來(lái)大量研究顯示，HPV 感染與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，目前已有120 多種HPV 基因型被確定，與宮頸癌前病變及宮頸癌密切相關(guān)的高危型包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82，與女性生殖道良性濕疣性病變有關(guān)的低危型包括HPV6、11、42、43、81、83，本研究首次對(duì)新疆奎屯地區(qū)337 例哈薩克族、1 000 例漢族婦女宮頸23 種HPV感染狀況進(jìn)行了檢測(cè)，對(duì)比分析如下。

337 例哈薩克族婦女HPV 總感染率為27.89%，其中高危型感染率為24.33%，高于新疆塔城地區(qū)哈薩克族（5.80%）［1］、新疆奎屯地區(qū)哈薩克族（16.25%）［2］、新疆哈薩克族（14.00%）［3］、新疆伽師縣維吾爾族（10.30%）［4］、低于新疆維吾爾族（27.97%）［3］。1 000 例漢族婦女HPV總感染率為25.10%，其中高危型感染率為21.80%，高于新疆第四師漢族（19.21%）［5］、新疆塔城地區(qū)漢族（11.70%）［1］、新疆漢族（13.42%）［3］，也高于世界自然婦女人群水平（10.40%）［6］，高于在陽(yáng)城、深圳和沈陽(yáng)開展的以人群為基礎(chǔ)的多中心研究（14.80%～16.80%）［7］，但是低于在烏魯木齊開展的機(jī)會(huì)性宮頸癌篩查（30.30%）［8］，低于內(nèi)蒙古地區(qū)（39.80%）［9］。本研究結(jié)果顯示，兩族宮頸HPV總感染率、高危型感染率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與陳志芳等［3］的報(bào)道一致，而劉迎春等［1］研究發(fā)現(xiàn)，漢族（11.70%）明顯高于哈薩克族（5.80%），且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與本研究結(jié)論不一致，本組兩族婦女宮頸HPV感染率、兩族間的差異均與文獻(xiàn)報(bào)道有差別，可能與HPV感染的地域、種族差異以及樣本量的大小，納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)不一致有關(guān)，本研究樣本量較小，還待擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。

本研究?jī)勺鍕D女宮頸HPV 感染以單基因型感染為主，單基因型感染率分別為65.96%、68.53%；多重感染占34.04%、31.47%，兩族病例多重感染率均低于陶萍萍等[10]的研究報(bào)道（44.60%），高于新疆奎屯地區(qū)哈薩克族（23.08%）［2］、新疆烏魯木齊維吾爾族和漢族（21.30%）［8］，不同基因型HPV編碼外殼蛋白的基因變異很大，幾乎無(wú)交叉保護(hù)抗體，易造成高危型HPV 多重感染。有研究表明HPV 多重感染增加HPV 持續(xù)感染的時(shí)間，使其不易清除［11］，多型別混合感染對(duì)宮頸病變發(fā)展程度有潛在影響，促進(jìn)宮頸病變進(jìn)展［12］，然而有研究并不支持多重感染可促進(jìn)宮頸病變的發(fā)展［8］，本研究有待后續(xù)繼續(xù)研究多重感染與宮頸病變的關(guān)系。

國(guó)際癌癥研究協(xié)會(huì)公布的15 種最常見(jiàn)的HPV 亞型依次為（遞減）16、 18、45、 31、 33、 52、 58、 35、59、 56、 39、 51、 73、 68、 66，16亞型與宮頸癌相關(guān)度最高，在宮頸癌中感染率為57.4%， 18亞型感染居第二位，占12.6%～25.7%［13］，多數(shù)亞洲國(guó)家的研究認(rèn)為HPV 58、 52 亞型居第三、四位［14］，李霓等[15]也認(rèn)為HPV58、52 是繼HPV16 型和18 型之后的重要型別，而也有學(xué)者認(rèn)為我國(guó)宮頸癌感染以HPV16、58型為主，HPV18型感染率明顯低于國(guó)外報(bào)道[16]，本研究顯示，本研究?jī)山M觀察對(duì)象無(wú)論單一感染、還是混合感染最主要的基因型別是52、16型，混合感染中，高危型哈薩克族出現(xiàn)頻率依次為HPV52、16、53、51和39、56、18，漢族出現(xiàn)頻率依次為HPV52、16、51、53、58 和56、68，雖然前兩位均是52、16 型，但是漢族52 型占比明顯高于哈薩克族，16 型則相差不大，兩族前4位的基因型別基本一致，第5、6位則不同，18型感染率較低，以上結(jié)果不同于國(guó)際癌癥研究協(xié)會(huì)的結(jié)果及文獻(xiàn)報(bào)道，提示HPV 各亞型在兩族感染譜不同，排序不同，可能52、16是本地區(qū)易感染的型別，對(duì)本地區(qū)的型別研究除16、18 型外，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注對(duì)52 型別感染的研究，再次證實(shí)HPV感染型別存在地域、種族差異，將來(lái)廣泛應(yīng)用的二價(jià)和四價(jià)疫苗，只能預(yù)防覆蓋范圍內(nèi)的感染，在本地區(qū)開展，能否起到廣泛性預(yù)防作用還有待繼續(xù)擴(kuò)大樣本量繼續(xù)研究論證。

有文獻(xiàn)報(bào)道性生活活躍的年齡組HPV 感染率高［17］，也有些文獻(xiàn)報(bào)道HPV 感染與年齡無(wú)關(guān)［18］，談佩華等［2］的研究結(jié)果顯示新疆哈薩克族婦女在45～50 歲年齡段HPV感染率較高，但在不同年齡分組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；狄麗努爾·熱孜木等［4］研究認(rèn)為新疆喀什伽師縣維吾爾族婦女，年齡在30～34 歲的HPV 陽(yáng)性較其他年齡段高，但各年齡段HPV 陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，王英紅等［19］研究發(fā)現(xiàn)維吾爾族婦女HR-HPV 感染與年齡無(wú)關(guān)，而漢族婦女HR-HPV 感染在＜35 歲組顯著高于維吾爾族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，漢族存在＜35 歲和45～50 歲組兩個(gè)感染高峰；黃霞等［4］對(duì)新疆第四師20 107 名漢族婦女行HPV 檢測(cè)，研究結(jié)果為HPV 陽(yáng)性率高峰值在年齡在40～49 歲年齡組，雖各年齡組間HPV 陽(yáng)性率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究哈薩克族婦女HR-HPV 感染在＜35 歲、35～40歲年齡組明顯高于其他年齡組，存在感染高峰，隨著年齡的增高逐漸下降；而漢族婦女HR-HPV 感染雖然在各年齡組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在45～50 歲、＞50 歲年齡組感染率較高；哈薩克族婦女HR-HPV 感染在＜35歲組、35～40歲組顯著高于漢族婦女。本研究與文獻(xiàn)報(bào)道部分相符，哈薩克族在年輕婦女出現(xiàn)兩個(gè)高峰，可能是由于年輕婦女性生活頻繁，病毒持續(xù)感染，病毒負(fù)荷量高，免疫系統(tǒng)未被致敏，宿主免疫清除能力弱等多因素相互作用導(dǎo)致；漢族在45～50 歲、＞50 歲年齡組感染率較高，可能是因?yàn)閲^經(jīng)期激素水平下降，對(duì)宿主的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)產(chǎn)生較大影響，對(duì)HPV病毒的清除、抑制能力較弱，導(dǎo)致病毒持續(xù)感染。本研究結(jié)果再次顯示HR-HPV 感染狀況的地域、民族、年齡特點(diǎn)，在本地區(qū)針對(duì)HPV篩查和干預(yù)時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)＜35 歲及35～40 歲年齡組哈薩克族人群和45～50歲及＞50歲年齡組漢族人群健康宣教。

本研究提示HPV52、16 亞型在兩族中均居前2 位，其余均存在差異，且兩個(gè)民族感染率、感染型別前幾位與國(guó)內(nèi)外其他研究也有不一致之處，HPV52在本地區(qū)兩個(gè)民族中均居高位，可能系環(huán)境、遺傳、內(nèi)分泌、免疫等因素相互作用的結(jié)果，應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，擴(kuò)大樣本量繼續(xù)研究論證，未來(lái)盡可能找到對(duì)本地區(qū)起到廣泛性預(yù)防的疫苗。