伍遠(yuǎn)浩， 黃 平， 李來春

(海南省人民醫(yī)院， 海南 ?？?570311)

結(jié)直腸癌是我國(guó)常見的消化道惡性腫瘤,近年來發(fā)病率和死亡率迅速上升，5年生存率為 60% 左右，并且其治療效果30年來無顯著改善[1]。目前手術(shù)切除仍是結(jié)直腸癌的主要治療方法，但術(shù)后有較高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率，因此關(guān)于結(jié)直腸癌患者術(shù)后預(yù)后的判斷一直是臨床關(guān)注的熱點(diǎn)問題[2]。趨化因子受體 4(CCR4)是一種含7次跨膜G蛋白偶聯(lián)的趨化因子受體，與其相應(yīng)的趨化因子配體結(jié)合能促進(jìn)白細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞增生以及惡性腫瘤新生血管形成[3]。相關(guān)研究證實(shí)，CCR4在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，并且其高表達(dá)與結(jié)直腸癌的惡性生物學(xué)行為具有一定的相關(guān)性，可用于判斷患者是否出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[4]。本研究通過免疫組化檢測(cè)結(jié)直腸癌患者中CCR4的表達(dá)情況，擬探討其與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系以及對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的評(píng)估價(jià)值，并建立相關(guān)Cox生存風(fēng)險(xiǎn)得分模型，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料:納入2015年1月至2017年1月在我院接受根治性切除術(shù)的結(jié)直腸癌患者101例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)確診為結(jié)直腸癌；均為首次診斷結(jié)直腸癌，并在我院接受根治性切除術(shù)；預(yù)計(jì)生存期大于6個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：接受姑息性手術(shù)；合并嚴(yán)重心、肺、肝、腎疾??；妊娠和哺乳期婦女；有嚴(yán)重精神障礙者；合并其它系統(tǒng)惡性腫瘤；不配合手術(shù)治療和隨訪者。

1.2方法:CCR4免疫組化檢測(cè)：采用免疫組化二步法進(jìn)行免疫組化染色。石蠟包埋組織切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，高壓修復(fù)，室溫孵育2h。依次滴加增強(qiáng)劑及二抗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水、透明、封片。選取400倍鏡下4個(gè)互不重疊的視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，并數(shù)出染色的細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算染色細(xì)胞所占比例。CCR4主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，為黃色或棕黃色顆粒。根據(jù)細(xì)胞染色比例，將結(jié)果分為:陰性(-):<50%；陽(yáng)性(+):≥50%。資料收集與隨訪：收集患者年齡、性別、病灶部位、分化程度、TNM/T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶直徑、CCR4、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原19-9(CA19-9)以及輔助性治療等臨床病理資料，所有患者術(shù)后均隨訪5年，隨訪終點(diǎn)事件為腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，記錄患者從手術(shù)之日起至隨訪5年內(nèi)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的時(shí)間為無病生存期。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者的一般情況:101例患者均接受結(jié)直腸癌根治手術(shù)，根據(jù)術(shù)后免疫組化檢測(cè)CCR4表達(dá)狀態(tài)分為CCR4陽(yáng)性組34例(33.66%)和CCR4陰性組67例(66.34%)，男性61例(60.40%)，女性40例(39.60%)，年齡為31～69歲，平均年齡為(54.68±12.63)歲。

2.2兩組患者一般臨床病理資料比較:CCR4陽(yáng)性組患者低、未分化、TNM/T3～4分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移所占比例明顯高于CCR4陰性組(P<0.05)，其他臨床資料如年齡、性別、病灶部位等兩組間比較無明顯差異(P>0.05)，提示CCR4表達(dá)狀態(tài)與患者腫瘤分化程度、TNM/T分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，見表1。

表1 兩組患者一般臨床病理資料比較

2.3影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的單因素Cox回歸分析:以患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移為因變量，以表2中所有臨床病理指標(biāo)為自變量(具體自變量說明與賦值見表2)，單因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，分化程度、TNM/T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶直徑、CCR4以及CEA6個(gè)指標(biāo)與結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移存在一定相關(guān)性(P<0.05)，而其他指標(biāo)與直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

表2 自變量說明與賦值

表3 影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的單因素Cox回歸分析

2.4影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素Cox回歸分析:以患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移為因變量，將單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)自變量進(jìn)行多因素Cox回歸分析，結(jié)果顯示，分化程度、TNM/T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及CCR4為影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)(P<0.05)，見表4。

表4 影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素Cox回歸分析

2.5CCR4陽(yáng)性和CCR4陰性兩組患者術(shù)后5年無病生存率比較:CCR4陽(yáng)性和CCR4陰性兩組患者術(shù)后5年無病生存率比較具有明顯差異，CCR4陰性組患者術(shù)后1年、3年、5年無病生存率明顯高于CCR4陽(yáng)性組患者(72.3%、54.2%、38.6%vs54.5%、31.9%、24.5%,P<0.05)，見圖1。

圖1 CCR4陽(yáng)性和CCR4陰性兩組患者術(shù)后5年無病生存率比較

2.6預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的Cox生存風(fēng)險(xiǎn)得分模型的建立:基于分化程度、TNM/T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和CCR4這4個(gè)獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)構(gòu)建預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的Cox生存風(fēng)險(xiǎn)得分模型，風(fēng)險(xiǎn)得分的最佳診斷截點(diǎn)(cutoff)值為-0.08，以cutoff值為界值點(diǎn)將患者分為高危組和低危組，結(jié)合圖A、圖B、圖C可以看出Cox生存風(fēng)險(xiǎn)得分越高，患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)越高，見圖2。

圖2 預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的Cox生存風(fēng)險(xiǎn)得分圖

3 討 論

趨化因子受體及其配體網(wǎng)絡(luò)調(diào)控受諸多因素的影響，腫瘤的形成和發(fā)展中趨化因子網(wǎng)絡(luò)的參與是復(fù)雜而精細(xì)的，而趨化因子受體在惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制目前也尚存爭(zhēng)議[5,6]。趨化因子受體與其特異性的配體結(jié)合后具有趨化各種炎癥細(xì)胞向炎癥定向遷移的能力，兩者的相互作用控制著各種免疫細(xì)胞在循環(huán)系統(tǒng)及組織之間的定向遷移[7]。相關(guān)研究[8]也證實(shí)CCR4在多種惡性腫瘤如乳腺癌、肺癌、肝癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，與其相應(yīng)的配體CCL17發(fā)生特異性結(jié)合后，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞循配體濃度梯度定向轉(zhuǎn)移，由此形成了腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制。Zhang Y等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，CCR4與CCL22發(fā)生特異性的結(jié)合后激活一系列細(xì)胞傳導(dǎo)通路可刺激腫瘤細(xì)胞增殖生長(zhǎng)，趨化大量炎癥細(xì)胞向腫瘤組織侵潤(rùn)從而促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，促進(jìn)惡性腫瘤血管增殖從而達(dá)到促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移的效應(yīng)。而Marshall LA等[10]研究發(fā)現(xiàn)CCR4與其配體結(jié)合后能通過趨化、活化免疫細(xì)胞后抑制血管增殖而起到抗腫瘤的作用，由此可見，CCR4及配體系統(tǒng)與腫瘤的關(guān)系具有雙向性。而本研究多因素分析結(jié)果顯示，CCR4為影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)，提示結(jié)直腸癌患者癌組織中CCR4表達(dá)情況可用于預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，CCR4陽(yáng)性患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較高，預(yù)后較差,其可能原因與CCR4陽(yáng)性的結(jié)直腸癌患者腫瘤惡性程度高、侵襲轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)、臨床分期較晚有關(guān)。

此外，為了提高預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性，本研究結(jié)合多因素分析得到的4個(gè)獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)：分化程度、TNM/T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和CCR4，建立了用于預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的Cox生存風(fēng)險(xiǎn)得分模型，可以看出，風(fēng)險(xiǎn)得分較高的高危組其CCR4的陽(yáng)性表達(dá)率較高，而風(fēng)險(xiǎn)得分較低的低危組正好相反，其CCR4的陰性表達(dá)率較高，也再次證實(shí)了之前研究結(jié)論。