梁艷輝，陳翠翠

(國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專(zhuān)利局專(zhuān)利審查協(xié)作江蘇中心，蘇州 215163)

擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥是一類(lèi)模擬天然除蟲(chóng)菊酯化學(xué)結(jié)構(gòu)合成的農(nóng)藥，低毒，具有無(wú)特殊臭味、安全系數(shù)高、使用濃度低、觸殺作用強(qiáng)、滅蟲(chóng)速度快、殘效時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。擬除蟲(chóng)菊酯主要應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，例如防治棉花、蔬菜和果樹(shù)食葉和食果害蟲(chóng)。在高毒有機(jī)磷農(nóng)藥被禁止使用后，擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥便有了更為廣泛的應(yīng)用。除此之外，擬除蟲(chóng)菊酯還作為家庭用殺蟲(chóng)劑被廣泛應(yīng)用，用于防治蚊蠅、蟑螂及牲畜寄生蟲(chóng)等。目前，人工合成的擬除蟲(chóng)菊酯種類(lèi)數(shù)以萬(wàn)計(jì)，迄今商品化的擬除蟲(chóng)菊酯有近40個(gè)品種，在全世界的殺蟲(chóng)劑銷(xiāo)售額中占20%左右[1]。根據(jù)擬除蟲(chóng)菊酯獨(dú)特的殺蟲(chóng)癥狀及其對(duì)昆蟲(chóng)神經(jīng)鈉離子通道門(mén)控的影響，此類(lèi)物質(zhì)被分為Ⅰ型和Ⅱ型(圖1)。在結(jié)構(gòu)上，Ⅰ型和Ⅱ型擬除蟲(chóng)菊酯的區(qū)別主要在于醇基α-碳的位置是否存在氰基，Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯不存在α-氰基(例如氯菊酯、丙烯菊酯、聯(lián)苯菊酯)，Ⅱ型擬除蟲(chóng)菊酯存在α-氰基(例如氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯)[2]。

圖1 I型和II型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥結(jié)構(gòu)通式

由于擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)化合物具有疏水性和光穩(wěn)定性，能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定地殘留在農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境基質(zhì)中，進(jìn)而通過(guò)生物鏈進(jìn)入生物體內(nèi)，嚴(yán)重危害到環(huán)境安全和人類(lèi)健康，因此，檢測(cè)環(huán)境、食品、人體中擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑的殘留十分必要[3]。

針對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑常用的檢測(cè)方法包括高效液相色譜法、氣相色譜電子捕獲法以及氣相色譜-質(zhì)譜等。雖然這些方法的靈敏度高，但樣品需要復(fù)雜的前處理過(guò)程，分析時(shí)間長(zhǎng)并且儀器昂貴，技術(shù)要求高，不適合大量樣品的快速檢測(cè)。隨著免疫分析技術(shù)的發(fā)展，農(nóng)藥免疫分析法不但具備了與儀器分析法相當(dāng)或更高的靈敏度，且無(wú)需使用昂貴儀器，方法簡(jiǎn)便，在農(nóng)藥殘留的快速篩選中已顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

由于擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥為小分子化合物(分子量小于1 000 kD)，不具有免疫原性，因此，擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥免疫檢測(cè)技術(shù)的建立，關(guān)鍵在于半抗原的涉及和改造，通過(guò)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法加以適當(dāng)?shù)男揎?，使其分子結(jié)構(gòu)的某個(gè)位置上帶上端基為活性基團(tuán)的連接臂，使其轉(zhuǎn)變?yōu)閹в杏坞x氨基或游離羧基的衍生物，從而與大分子載體相連接，生成半抗原-載體的偶聯(lián)物，此偶聯(lián)物即為人工抗原。

筆者檢索了國(guó)內(nèi)外涉及擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原設(shè)計(jì)與合成的發(fā)明專(zhuān)利并對(duì)申請(qǐng)人、發(fā)明內(nèi)容等進(jìn)行梳理，以期為擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原或人工抗原的研究或相關(guān)發(fā)明專(zhuān)利的挖掘提供參考。

1 申請(qǐng)人、申請(qǐng)量特點(diǎn)

從申請(qǐng)年度和申請(qǐng)量來(lái)看，全球有關(guān)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原或人工抗原的發(fā)明專(zhuān)利總量在100件以?xún)?nèi)，發(fā)明點(diǎn)涉及半抗原設(shè)計(jì)或合成的約50件，且申請(qǐng)時(shí)間多集中于2005-2019年，近兩年申請(qǐng)量較少，可見(jiàn)，研發(fā)熱度不是很高。國(guó)內(nèi)申請(qǐng)人占90%以上，絕大多數(shù)為高校和科研院所，其中申請(qǐng)較多的申請(qǐng)人包括江南大學(xué)、揚(yáng)州大學(xué)、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、浙江大學(xué)、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所等，僅在2019年后出現(xiàn)企業(yè)申請(qǐng)人，例如蘇州快捷康生物技術(shù)有限公司、北京勤邦生物技術(shù)有限公司、廣州勤邦生物技術(shù)有限公司、北京望爾生物技術(shù)有限公司等。由此可見(jiàn)，目前擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原的研究仍處于基礎(chǔ)研究階段，成熟的、商業(yè)化免疫檢測(cè)試劑盒較少。

2 相關(guān)專(zhuān)利法律狀態(tài)

對(duì)上述發(fā)明點(diǎn)為半抗原設(shè)計(jì)或合成的專(zhuān)利的法律狀態(tài)統(tǒng)計(jì)如表1所示，可見(jiàn)，目前維持有效或?qū)彶橹械膶?zhuān)利占比較小，說(shuō)明相關(guān)研究主體對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原的設(shè)計(jì)和合成熱度不是很高，或者擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原的設(shè)計(jì)或合成存在較難跨越的瓶頸，短期內(nèi)無(wú)法獲得具有創(chuàng)新性的有效的半抗原化合物。由于目標(biāo)物半抗原分子設(shè)計(jì)的合理性是免疫分析方法中抗體制備的關(guān)鍵，涉及半抗原結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)與合成的專(zhuān)利申請(qǐng)量低，因此，涉及后續(xù)人工抗原制備、載體蛋白選擇、抗原鑒定等內(nèi)容的專(zhuān)利申請(qǐng)量也相應(yīng)較少。

表1 涉及半抗原設(shè)計(jì)或合成專(zhuān)利的法律狀態(tài)

3 半抗原的設(shè)計(jì)與合成

擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥主要由酸結(jié)構(gòu)和醇結(jié)構(gòu)2部分構(gòu)成，這類(lèi)農(nóng)藥的半抗原設(shè)計(jì)與合成根據(jù)活性基團(tuán)引入位置的不同歸納為以下4類(lèi)：在擬除蟲(chóng)菊酯的酸或醇部分引入活性基團(tuán)、對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯的氰基部分轉(zhuǎn)化引入活性基團(tuán)、在末端芳香環(huán)上引入活性基團(tuán)、對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯環(huán)丙烷進(jìn)行修飾引入活性基團(tuán)。

對(duì)檢索到的發(fā)明專(zhuān)利文獻(xiàn)的發(fā)明點(diǎn)進(jìn)行梳理可知，擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原包括特異型和通用型2種，特異型半抗原主要涉及氰戊菊酯、甲氰菊酯、溴氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、高效/氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯菊酯等，通用型半抗原主要是根據(jù)擬除蟲(chóng)菊酯的結(jié)構(gòu)差異分為針對(duì)I型和Ⅱ型擬除蟲(chóng)菊酯的通用型半抗原以及醚型菊酯類(lèi)農(nóng)藥通用半抗原。

3.1 氰戊菊酯半抗原合成

劉曙照等(CN1624480A)以氰戊菊酯的菊酸部分作為半抗原，引入長(zhǎng)度不等的碳鏈作為間隔臂，具體為將2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰氯與氨基酸縮合獲得半抗原(圖2)。程敬麗等(CN1789238A)將氰戊菊酯的氰基水解為羧酸，引入β-丙氨酸間隔臂，然后與載體蛋白偶聯(lián)得到氰戊菊酯人工抗原。

圖2 氰戊菊酯半抗原

3.2 溴氰菊酯半抗原合成

王碩等(CN101747428A)、天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司(CN103529198A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)以二溴菊酸部分作為半抗原的基本結(jié)構(gòu)，與氨基酸縮合獲得6-{[3-(2,2-二溴-乙烯基)-2,2-二甲基-環(huán)丙基羰基]-氨基}-己酸作為半抗原。王鳴華等(CN101412673A)將溴氰菊酯中的氰基轉(zhuǎn)化為羧基和含羧基的酰胺獲得溴氰菊酯人工半抗原，李相前等(CN102807614A)先將溴氰菊酯中的氰基轉(zhuǎn)化為羧基，再與3-巰基丙酸甲酯合成獲得半抗原。趙建莊等(CN1948964A)、北京農(nóng)學(xué)院(CN101339189A)通過(guò)在溴氰菊酯的末端苯環(huán)上引入硝基制備半抗原，并建立了食品中溴氰菊酯農(nóng)藥的間接ELISA法，靈敏度為0.100~0.237 μg/mL，線性范圍為0.015~100 μg/mL，IC50為4.786~7.709 μg/mL，回收率為86.2%~105.8%，與其他菊酯類(lèi)農(nóng)藥幾乎無(wú)交叉反應(yīng)。

3.3 甲氰菊酯半抗原的合成

吳偉等(CN101017165A)以甲氰菊酸為半抗原，應(yīng)用碳二亞胺將甲氰菊酸和牛血清蛋白偶聯(lián)，構(gòu)建出甲氰菊酯人工抗原，克服了其他方法繁瑣、生產(chǎn)率低、特異性差等缺點(diǎn)。貴州勤邦食品安全科學(xué)技術(shù)有限公司(CN106918705A)公開(kāi)了檢測(cè)甲氰菊酯的試紙，其中使用的甲氰菊酯半抗原合成路線如圖3所示，該半抗原通過(guò)在甲氰菊酯的末端苯環(huán)上引入具有碳鏈間隔臂的羧基，并與載體蛋白(牛血清蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白或甲狀腺蛋白)偶聯(lián)獲得人工抗原，進(jìn)而制備獲得試紙。該試紙檢測(cè)對(duì)茶葉樣品中的甲氰菊酯的檢測(cè)限為2 mg/kg，對(duì)茶青樣品中的甲氰菊酯的檢測(cè)限為1 mg/kg，并且與多菌靈、三唑醇、甲菌靈無(wú)交叉反應(yīng)。北京勤邦生物技術(shù)有限公司(CN111735951A)則通過(guò)在甲氰菊酯的環(huán)丙烷上引入羧基制備半抗原(圖3)，并與載體蛋白(牛血清蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白或甲狀腺蛋白或人血清蛋白)偶聯(lián)獲得人工抗原，進(jìn)而制備獲得試紙，用于快速檢測(cè)黃瓜、蘋(píng)果等蔬菜及水果中的甲氰菊酯殘留，最低檢測(cè)限為50 μg/kg，該試紙條對(duì)500 μg/kg溴氰菊酯、氯氟氰菊酯等藥物無(wú)交叉反應(yīng)。蘇州快捷康生物技術(shù)有限公司(CN110776567A)則通過(guò)在甲氰菊酯末端苯環(huán)上引入活性基團(tuán)氨基，制備獲得抗甲氰菊酯單克隆抗體，甲氰菊酯試紙條靈敏度為5 ng/mL，與三氟氯氰菊酯、功夫菊酸、氯氰菊酯、溴氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、氰戊菊酯、醚菊酯和胺菊酯這8種農(nóng)藥沒(méi)有交叉反應(yīng)，可見(jiàn)其靈敏度高、特異性良好。

圖3 甲氰菊酯半抗原

3.4 高效/氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯半抗原的合成

陳秀金等(CN103911348A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)將半抗原1即H1：3-氰[順-3-[2-氯-3,3,3-三氟乙基-2-二甲基]環(huán)丙烷-苯氧基]苯丙酸，通過(guò)活性酯法和血藍(lán)蛋白KLH偶聯(lián)；然后將半抗原2即H2：氰基-3-(4-氨基苯氧基)苯基-順-3-[2-氯-3,3,3-三氟乙烯基-2,2-二甲基]環(huán)丙烷酸酯，通過(guò)重氮化法和牛血清白蛋白偶聯(lián)，用作包被原；最后通過(guò)動(dòng)物免疫、血清測(cè)定、細(xì)胞融合、篩選和亞克隆技術(shù)得到細(xì)胞株16號(hào)。采用小鼠體內(nèi)誘生法生產(chǎn)腹水，然后通過(guò)辛酸-硫酸銨沉淀法純化得到相應(yīng)的單克隆抗體；該抗體靈敏度高，半數(shù)抑制濃度(IC50)為(13.26±1.23) ng/mL；特異性強(qiáng)，為國(guó)內(nèi)農(nóng)產(chǎn)品中高效氯氟氰菊酯的殘留檢測(cè)提供了技術(shù)。

羅世能等(CN101519364A)以氯氟氰菊酯為原料，對(duì)其直接硝化，在苯環(huán)上引入硝基，進(jìn)而用SnCl2·2H2O還原，制備出末端苯環(huán)上含有活性基團(tuán)－NH2的半抗原CY，半抗原CY(圖4)通過(guò)重氮法成功與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)，獲得氯氟氰菊酯人工抗原CY-BSA。王利兵(CN102417468A)以對(duì)羥基苯丙酸為原料，經(jīng)過(guò)7步反應(yīng)，在高效氯氟氰菊酯的末端苯環(huán)上引入了以碳鏈作為連接臂的羧基。曹立民等(CN111269139A)以高效氯氟氰菊酯為原料，通過(guò)一步法將氰基轉(zhuǎn)變?yōu)榘被@得高效氯氟氰菊酯的半抗原，并通過(guò)碳二亞胺法與活化載體蛋白偶聯(lián)獲得半抗原-OVA偶聯(lián)物，即高效氯氟氰菊酯完全抗原，用于生成多克隆抗體。該抗體對(duì)高效氯氟氰菊酯的最低檢出限為10 μg/L，對(duì)其他擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥(溴氰菊酯、氯氰菊酯、氟氯氰菊酯和氰戊酸酯)無(wú)明顯交叉反應(yīng)。貴州勤邦食品安全科學(xué)技術(shù)有限公司(CN105732788A)以高效氯氟氰菊酯為原料與琥珀酸酐經(jīng)一步反應(yīng)在末端苯環(huán)引入活性基團(tuán)羧基獲得半抗原，用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法測(cè)定相應(yīng)抗體的效價(jià)為1∶100 000~150 000，并且與氯氰菊酯、氰戊菊酯沒(méi)有交叉反應(yīng)，該公司還以該半抗原為基礎(chǔ)，申請(qǐng)了檢測(cè)高效氯氟氰菊酯殘留的試紙卡(CN105807056A)、檢測(cè)高效氯氟氰菊酯殘留的試劑盒(CN105807041A) 2項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利。

北京勤邦生物技術(shù)有限公司(CN113024415A)通過(guò)在環(huán)丙烷位置引入活性基團(tuán)羧基制備得到氟氯氰菊酯半抗原(圖4)，由所述半抗原獲得的氟氯氰菊酯抗體靈敏度可達(dá)到0.1 μg/L，采用間接ELISA方法測(cè)定抗體效價(jià)，效價(jià)≥100 000，與其他菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑(甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氰戊菊酯、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、醚菊酯)的交叉反應(yīng)率低。

3.5 聯(lián)苯菊酯、氯菊酯半抗原合成

深圳市易瑞生物技術(shù)有限公司(CN105669482A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)以功夫酸為起始原料設(shè)計(jì)合成了聯(lián)苯菊酯半抗原(圖5)，基于此半抗原制備得到的檢測(cè)試紙具有特異性強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度高，檢測(cè)限達(dá)到150 μg/L。

王鳴華等(CN101135683A)以聯(lián)苯醇為起始物，分別制備了聯(lián)苯菊酯半抗原2-甲基-3-苯基芐基丁二酸酯LBc、2-甲基-3-苯基苯甲酸Lby，再采用碳二亞胺法將半抗原與牛血清蛋白偶聯(lián)獲得人工抗原，經(jīng)免疫動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體，效價(jià)為5.12×105，對(duì)聯(lián)苯菊酯最低檢測(cè)限為0.016 mg/L，與氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯無(wú)交叉反應(yīng)。張亮等(CN110850090A)以擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑中間體(圖5)為原料，在環(huán)丙烷上引入帶羧基的活性基團(tuán)獲得聯(lián)苯菊酯半抗原(圖5)，并制備了檢測(cè)聯(lián)苯菊酯的試紙條。該試紙條對(duì)聯(lián)苯菊酯的檢測(cè)限為15 mg/kg，對(duì)500 mg/kg氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯等藥物無(wú)交叉反應(yīng)。蘇州快捷康生物技術(shù)有限公司(CN109942710A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)設(shè)計(jì)了新穎的聯(lián)苯菊酯半抗原(圖5)，并制備了相應(yīng)的單克隆抗體，所述單克隆抗體特異性識(shí)別聯(lián)苯菊酯，與其他擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑無(wú)交叉反應(yīng)；利用本發(fā)明提供的抗聯(lián)苯菊酯抗體實(shí)現(xiàn)的競(jìng)爭(zhēng)ELISA的抑制中濃度(IC50)為20 ng/mL，檢測(cè)限(IC10，LOD)為0.5 ng/mL，優(yōu)于目前已報(bào)道的聯(lián)苯菊酯抗體。

日本KANKYO MENEKI GIJUTSU KENKYUSH公司(JP2001278844A)在氯菊酯的一部分導(dǎo)入間隔臂和能夠用于結(jié)合的官能團(tuán)獲得氯菊酯的兩種半抗原化合物，式1、式2 (圖5)。

圖5 聯(lián)苯菊酯、氯菊酯半抗原

3.6 通用型半抗原合成

3.6.1 I型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)通用型半抗原

李培武等(CN101407458A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)以間苯氧基苯甲醇和丁二酸酐為原料合成了I型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)通用半抗原化合物4-羰基-4-(3-苯氧基甲氧基)丁酸，合成路線如圖6，并基于同一種半抗原發(fā)明了I型擬除蟲(chóng)菊酯流動(dòng)之后免疫時(shí)間分辨熒光速測(cè)試劑盒(CN106932586A)、雜交瘤細(xì)胞株QW8#及其產(chǎn)生的抗Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯通用單克隆抗體(CN106701689A)，其靈敏度高、特異性好，對(duì)醚菊酯的50%抑制濃度IC50為20.86 μg/L，對(duì)氯菊酯的50%抑制濃度IC50為24.2 μg/L，對(duì)苯醚菊酯的50%抑制濃度IC50為29.4 μg/L，對(duì)其他Ⅰ型和Ⅱ型擬除蟲(chóng)菊酯的交叉反應(yīng)率均小于1%，可應(yīng)用于Ⅰ型擬除蟲(chóng)菊酯的多殘留檢測(cè)。

圖6 CN101407458A中半抗原合成路線

3.6.2 II型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)通用型半抗原

李培武等(CN101407475A)以α-氰基間苯氧基苯甲醇和丁二烯酰氯為原料合成II型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)通用半抗原化合物α-氰基(3-苯氧基苯基)甲基-4-氯-4-羰基丁酸酯，合成路線如圖7。胥傳來(lái)等(CN101157638A)以間苯氧苯甲醛為原料，通過(guò)2步反應(yīng)合成間苯氧基苯甲氰醇丁二酸酯，作為含氰基擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的半抗原，合成路線如圖7。王立兵、胥傳來(lái)等(CN102372776A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)以苯醚菊酯為原料，利用高錳酸鉀和高碘酸鈉進(jìn)行氧化，得到II型擬除蟲(chóng)菊酯人工半抗原(圖7)，由此半抗原制備得到的抗體血清效價(jià)為32 000?？锶A等(CN102901811A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)基于計(jì)算機(jī)分子模擬技術(shù)對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯半抗原的電荷性質(zhì)和空間構(gòu)象進(jìn)行構(gòu)建，合成了6種II型擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥半抗原(圖7)，預(yù)測(cè)能產(chǎn)生好的免疫效果的半抗原，通過(guò)免疫原的合成和免疫過(guò)程，實(shí)現(xiàn)識(shí)別II型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥群選擇性抗體的制備，具有很好的預(yù)測(cè)能力。奇華頓股份有限公司(CN103298337A)發(fā)明了用于確定樣品中II型擬除蟲(chóng)菊酯化合物的存在的體外方法，包括使樣品中的II型擬除蟲(chóng)菊酯化合物轉(zhuǎn)變成3-苯氧基苯甲酸或4-氟-3-苯氧基苯甲酸，進(jìn)而用于免疫分析。

圖7 II型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)通用型半抗原

3.6.3 醚型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)通用型半抗原

睢可等(CN102807488A)合成了圖8所示的醚型菊酯的通用半抗原，通過(guò)間接Elisa方法檢測(cè)所述發(fā)明制備的抗原所免疫得到的抗血清對(duì)醚型菊酯的檢測(cè)靈敏度為：氯醚菊酯IC50為1.540 2 μg/mL，氟硅菊酯IC50為0.753 9 μg/mL，三氟醚菊酯IC50為0.927 4 μg/mL，并且對(duì)I型和II型擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥均無(wú)交叉反應(yīng)，特異性良好。

3.6.4 其他通用型半抗原

江南大學(xué)胥傳來(lái)、匡華等發(fā)明人申請(qǐng)了關(guān)于多件寬譜特異性半抗原的發(fā)明專(zhuān)利，其中CN101219965A (法律狀態(tài)：有效)以菊酸和4-氨基丁酸為原料通過(guò)2步反應(yīng)合成4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原(圖8)，用于含菊酸擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的酶聯(lián)免疫檢測(cè)。CN101726589A以3-間苯氧甲酸縮-γ-氨基丁酸(3-PBA-γ-AJDS)為半抗原與載體蛋白偶聯(lián)獲得免疫原，進(jìn)而得到相應(yīng)抗體，抗體檢測(cè)限為0.5~1 μg/kg，與氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、λ-氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯的交叉反應(yīng)率為100%、18%、76%、39%、8%、7%。CN103149351A以3-苯氧苯甲酸和對(duì)硝基苯丙氨酸合成擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的通用半抗原N-(3-苯氧基苯酰)-4-氨基-L-苯丙氨酸，制備得到的膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的靈敏度分別為：氯氰菊酯50 ng/mL、甲氰菊酯200 ng/mL、順氰戊菊酯400 ng/mL，對(duì)多種菊酯農(nóng)藥具有識(shí)別力， 可用于菊酯農(nóng)藥多殘留的粗測(cè)。

圖8 CN102807488A中醚型菊酯通用半抗原

北京勤邦生物技術(shù)有限公司(CN107188830A，專(zhuān)利法律狀態(tài)：有效)設(shè)計(jì)合成了菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原化合物(圖8)，以及該半抗原與人血清白蛋白偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物作為免疫原免疫動(dòng)物制備的單克隆抗體。經(jīng)驗(yàn)證，制備的單克隆抗體對(duì)溴氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟胺氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯戊菊酯、苯氯菊酯6種菊酯類(lèi)農(nóng)藥具有較好的檢測(cè)靈敏度。

浙江大學(xué)的程敬麗等(CN101215247A)以二甲基菊酰氯、γ-氨基丁酸乙酯和間苯氧基甲醛為主要原料合成半抗原(圖8)。該半抗原包含了大多數(shù)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的3個(gè)共性結(jié)構(gòu)部分：雙苯氧環(huán)、帶-CN的酯和三元環(huán)結(jié)構(gòu)；CN101412684A以氯氰菊酯為原料制備了高特異性擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原化合物I (圖8)。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所李培武等(CN101434652A)合成了擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原(圖8)，保留了擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥共同具有的酯鍵結(jié)構(gòu)，有利于制備出高質(zhì)量抗體，抗體能夠特異識(shí)別溴氰菊酯、氯氰菊酯、功夫菊酯，與氨基甲酸酯類(lèi)、有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥無(wú)交叉反應(yīng)。加利福尼亞大學(xué)(US5108900A)制備了對(duì)具有苯氧基芐基或苯氧基苯基官能團(tuán)的擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥具有特異性親和力的單克隆抗體，其中半抗原為苯醚菊酯的環(huán)丙烷二羧酸。

圖9 其他通用型半抗原

以上專(zhuān)利中，CN101219965A、CN101407458A、CN1948964A還涉及授權(quán)后專(zhuān)利權(quán)的轉(zhuǎn)讓?zhuān)渲蠧N101219965A還涉及到專(zhuān)利權(quán)的質(zhì)押，反映了這些授權(quán)專(zhuān)利可能存在一定的商業(yè)價(jià)值和市場(chǎng)活躍程度，為相關(guān)市場(chǎng)以后的布局和側(cè)重點(diǎn)提供參考依據(jù)。

4 結(jié) 語(yǔ)

本文總結(jié)了國(guó)內(nèi)外涉及擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原設(shè)計(jì)與合成的發(fā)明專(zhuān)利。根據(jù)上述分析可知，在專(zhuān)利申請(qǐng)方面，擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥半抗原的設(shè)計(jì)與合成還有很多可以挖掘空間和很多尚待解決的問(wèn)題，例如高特異性農(nóng)藥半抗原種類(lèi)較少，通用型半抗原制備得到的通用型抗體如何進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)應(yīng)用還有待進(jìn)一步研究等。在針對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)中，研究者們?nèi)找孀⒅孛庖叻治黾夹g(shù)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，免疫分析技術(shù)將在擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。