張 輝，符才東

（1. 海南省藥品和醫(yī)療器械審評(píng)服務(wù)中心，海南 ?？?570216； 2. 海南省食品藥品檢驗(yàn)所?？诜炙?，海南 ?？?570311）

鹽酸托莫西汀為（R）-N-甲基-3-2-（甲苯氧基）- 3 - 苯丙基胺鹽酸鹽，屬去甲腎上腺素遞質(zhì)再攝取抑制劑，2003 年由Lilly 公司研發(fā)成功并在美國(guó)上市，是首個(gè)用于治療注意缺陷多障礙的非興奮性藥物［1-5］。鹽酸托莫西汀口服溶液具有易吸收、給藥方便、口感好的優(yōu)勢(shì)，易為患者特別是兒童和嬰幼兒所接受。有文獻(xiàn)報(bào)道采用高效液相色譜（HPLC）法、紫外分光光度法和化學(xué)發(fā)光法測(cè)定鹽酸托莫西汀原料藥和膠囊中主藥含量［6-14］，而其口服溶液中主藥含量測(cè)定方法尚未見報(bào)道。本研究中建立了測(cè)定鹽酸托莫西汀口服溶液中鹽酸托莫西汀含量的HPLC 法，為評(píng)價(jià)和控制該制劑的質(zhì)量提供了依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Ultimate 3000 型高效液相色譜儀（美國(guó)Dionex 公司）；Ex125ZH 型電子天平（美國(guó)Ohaus 公司）；FE28 型pH計(jì)（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 試藥

鹽酸托莫西汀對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為510143 - 201701，含量99.7%）；鹽酸托莫西汀口服溶液3 批（A 廠，批號(hào)分別為210201，210601 - 2；B 廠，批號(hào)為9071B）；正丙醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend C18柱（75 mm × 4.6 mm，3.5μm）；流動(dòng)相：A為pH 2.5磷酸-氫氧化鉀緩沖液-正丙醇（90∶10，V/V），B為pH 2.5磷酸 - 氫氧化鉀緩沖液 -正丙醇（65∶35，V/V），梯度洗脫（0～9 min 時(shí)100%A→30%A，9～15 min 時(shí) 30%A，15～15.5 min 時(shí) 30%A→100%A，15.5～25 min 時(shí)100%A）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

取磷酸2.9 g，精密稱定，加水1 L，攪拌溶解后加5 mol/L 氫氧化鉀溶液調(diào)溶液pH 至2.5，加入1-辛烷磺酸鈉7.56 g，再加正丙醇，制成pH 2.5 磷酸 - 氫氧化鉀緩沖液 - 正丙醇（80∶20，V/V），作為稀釋劑。取鹽酸托莫西汀對(duì)照品91.4 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加稀釋劑溶解并定容，搖勻，即得對(duì)照品貯備液；精密吸取5 mL，置10 mL 容量瓶中，加稀釋劑定容，制成質(zhì)量濃度為0.46 mg/mL 的對(duì)照品溶液。精密量取樣品溶液5 mL，置50 mL 容量瓶中，加稀釋劑制成質(zhì)量濃度為0.46 mg/mL 的供試品溶液。按鹽酸托莫西汀口服溶液處方及工藝制備缺鹽酸托莫西汀的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性與專屬性試驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，詳見圖1。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液相應(yīng)位置有吸收峰，理論板數(shù)按鹽酸托莫西汀峰計(jì)應(yīng)不小于3 000，分離度均大于1.5，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，表明適用性與專屬性良好。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：精密量取2.2 項(xiàng)下對(duì)照品貯備液2.5，4.0，5.0，6.0，7.5 mL，分別置10 mL 容量瓶中，加稀釋劑定容，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（X，mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=29.565 8X+64.556 7（r=0.999 9，n=5）。結(jié)果表明，鹽酸托莫西汀質(zhì)量濃度在0.227 8～0.683 4 mg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

定量限考察：精密量取2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比為10∶1的待測(cè)成分質(zhì)量濃度作為定量限。結(jié)果鹽酸托莫西汀的定量限為0.068 3μg/mL。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，按2.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6 次，記錄峰面積。結(jié)果鹽酸托莫西汀峰面積的RSD為0.03%（n= 6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液，分別于室溫下放置0，4，8，12，16，20，24 h 時(shí)，按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果鹽酸托莫西汀峰面積的RSD為0.28%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為210201）樣品，按2.2項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果鹽酸托莫西汀的平均含量為96.54%，RSD為0.29%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取陰性對(duì)照品溶液9 份，每份5 mL，分別精密加入對(duì)照品貯備液適量，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3 批樣品適量，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并采用外標(biāo)法計(jì)算鹽酸托莫西汀含量。結(jié)果批號(hào)為210201，210601-2，9071B樣品的含量分別為96.44%，96.70%，98.02%，平均97.05%（n=3）。

3 討論

查閱相關(guān)文獻(xiàn)，雖有建立HPLC 法測(cè)定鹽酸托莫西汀原料藥含量的報(bào)道，但均為等度洗脫，樣品主峰分離效果欠佳。預(yù)試驗(yàn)中考察了0.8 mL/ min、1.0 mL/ min和1.2 mL/min 流速對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果表明更改流速對(duì)樣品檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響；分別采用Agilent Extend C18柱（75 mm ×4.6 mm，3.5μm）、依利特 Hypersil BDS柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）和Shimadzu VP - ODS 柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）考察結(jié)果，發(fā)現(xiàn)Agilent Extend C18柱（75 mm × 4.6 mm，3.5 μm）分離效果好且分析時(shí)間短；分別采用35，40，45 ℃柱溫測(cè)定，發(fā)現(xiàn)對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。破壞性試驗(yàn)結(jié)果表明，色譜主峰與各雜質(zhì)峰完全分離。

綜上所述，本研究中所建方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、耐用性好、重復(fù)性好，可用于鹽酸托莫西汀口服溶液的含量測(cè)定。