李秀明 劉 璐 萬 瓊 張 珉

胰腺癌患者預(yù)后差，主要原因在于大多數(shù)患者確診胰腺癌時已處于晚期，僅有15%～20%患者可行手術(shù)切除腫瘤達(dá)到治愈目的[1-2]。有研究報道術(shù)前行新輔助治療可幫助提高局部進(jìn)展期和臨界可切除患者的手術(shù)可切降低除率[3]。新輔助治療是指通過術(shù)前全身化療或局部放療降低腫瘤負(fù)荷，以期達(dá)到降期治療以及降低術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率，最終達(dá)到延長生存期的目的[4]。目前新輔助治療已成為臨界可切除胰腺癌和局部進(jìn)展期胰腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療措施[5]。微小RNA(miRNA)是一類長約為20個核苷酸的非編碼RNA，主要存在于真核生物中[6]。有研究證實miRNA通過與mRNA結(jié)合調(diào)控基因的表達(dá)參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[7]。目前有研究證實miRNA已廣泛應(yīng)用于肺癌、胃癌、胰腺癌等多種腫瘤中[8]。因此本研究探討胰腺癌患者新輔助治療前后血清miR-448和miR-143水平的變化及其對術(shù)后結(jié)局和預(yù)后的影響，以期尋求新的生物標(biāo)志物。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年7月至2018年7月本院收治的胰腺癌患者60例，年齡18～69歲，平均(57.32 ±7.64)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)胰腺癌臨床實踐指南[9]中關(guān)于胰腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者經(jīng)病理檢查確診為胰腺癌； ②術(shù)前接受新輔助性治療，行根治性切除手術(shù)治療患者；③ 臨床及隨訪資料完整者； ④患者簽署自愿受試同意書，患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 未獲得胰腺癌病理學(xué)確診者；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并其他器官嚴(yán)重性病變患者。

1.2 血清miR-448和miR-143水平檢測

新輔助治療后無菌采集靜脈血3 ml，分離上清保存于RNAse-free的EP管中，-80 ℃低溫保存。采用SuperScript IV Reverse Transcriptase逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國Thermo Fisher公司)合成cDNA模板，保存于-80 ℃。使用Primer Premier 6.0軟件設(shè)計引物序列，采用SYBR Green qPCR MasterTM試劑盒(美國Thermo Fisher公司)進(jìn)行PCR檢測。包括上、下游引物各0.5 μl、10 μl Mixima SYBR Green qPCR Master Mix(2×)、模板cDNA 1 μl，加入ddH2O至總反應(yīng)體系為20 μl。反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃ 30 s、54 ℃ 60 s、72 ℃退火延伸60 s，共40個循環(huán)。以U6為內(nèi)參，采用2-△△Ct法測定計算miR-448、miR-143的相對表達(dá)量。

1.3 隨訪

通過門診、住院和電話相結(jié)合的方式進(jìn)行隨訪，末次隨訪時間為2021年5月1日，中位隨訪時間為7.24個月。生存時間起點為患者病理確診日，終點為死亡、失訪日或隨訪截止日。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 生存及死亡情況分析

胰腺癌患者1年生存率為30.00%(18/60)，2年生存率為15.00%(9/60)，3年生存率為8.33%(5/60)，中位生存期為7.24個月。胰腺癌患者的年齡、肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平以及miR-448和miR-143水平與患者中位生存期顯著相關(guān)(P<0.05)，見表 1。

表1 胰腺癌的基本臨床資料及其生存相關(guān)性

2.2 胰腺癌患者預(yù)后影響因素多元線性回歸分析

本研究通過多元線性回歸分析，以患者預(yù)后作為因變量，miR-448水平、miR-143水平、肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平為自變量。結(jié)果顯示miR-448水平、miR-143水平、肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平是胰腺癌患者預(yù)后的影響因素(P<0.05)，見表2、表3。

表2 自變量賦值

表3 胰腺癌患者預(yù)后影響多元回歸分析

2.3 胰腺癌患者預(yù)后影響因素對生存結(jié)局的預(yù)測價值分析

肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平、miR-448水平、miR-143水平評估胰腺癌患者生存結(jié)局的預(yù)測價值A(chǔ)UC分別為0.743，0.712，0.802，0.754，0.763，見表4。

表4 miR-448水平、miR-143水平、肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9對生存結(jié)局的預(yù)測價值ROC分析

3 討論

胰腺癌根據(jù)腫瘤與血管之間的解剖學(xué)關(guān)系，可分為可切除、邊界可切除和不可切除3種類型[10]。根治性切除目前胰腺癌患者最有效的治療手段，但是由于早期胰腺癌發(fā)生血液、淋巴和神經(jīng)等組織轉(zhuǎn)移，因此，術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率極高，預(yù)后差，據(jù)2019年美國癌癥學(xué)會統(tǒng)計顯示，目前胰腺癌的5年累積生存率不足9%[11-12]。其原因主要是由于胰腺癌僅能通過外科手術(shù)完全切除腫瘤來達(dá)到治愈目的，但一半以上的胰腺癌患者在確診時已為晚期，可手術(shù)切除腫瘤僅占15%～20%，局部進(jìn)展期患者占30%～40%，50%～60%的患者合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[13-14]。

美國綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)發(fā)布對臨界可切除胰腺癌的治療意見是先行新輔助治療再手術(shù)[15]。新輔助治療可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入休眠狀態(tài)，抑制微轉(zhuǎn)移灶以及原發(fā)灶發(fā)展[16]。研究報道，術(shù)前行新輔助治療能夠提高局部進(jìn)展期和臨界可切除胰腺患者的腫瘤手術(shù)可切除率[17]。新輔助治療，即通過術(shù)前全身化療或局部放療減少腫瘤負(fù)荷，從而達(dá)到降期治療，提高術(shù)中腫瘤完整切除率、降低術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率及延長患者生存期的目的[18-19]。

基于目前miRNA在惡性腫瘤組織中存在異常表達(dá)，且在病情演進(jìn)過程中發(fā)揮重要作用推測其在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[20]。miR-448水平、miR-143均是在胰腺癌中異常表達(dá)，是發(fā)揮作用的重要miRNA[21]。CA19-9是胰腺癌預(yù)后的重要生物標(biāo)志物，有研究顯示在急性膽管炎、胰腺炎、肝癌等患者中均可出現(xiàn)異常表達(dá)，因此不能將CA19-9作為單獨診斷胰腺癌的指標(biāo)[22-23]。本研究中胰腺癌患者的年齡、肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平以及miR-448和miR-143水平與患者中位生存期顯著相關(guān)。miR-448水平、miR-143水平、肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平是胰腺癌患者預(yù)后的影響因素。肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平、miR-448水平、miR-143水平評估胰腺癌患者生存結(jié)局的預(yù)測價值A(chǔ)UC分別為0.743，0.712，0.802，0.754，0.763。

綜上所述，肝轉(zhuǎn)移、KPS評分、CA19-9水平、miR-448水平、miR-143水平是胰腺癌患者預(yù)后的獨立影響因素，具有對胰腺癌患者術(shù)后生存結(jié)局的預(yù)測價值。但是本研究存在一定的局限性，例如納入的樣本量較少，中心單一，未涉及miRNA表達(dá)對胰腺癌病情影響的分子機制研究，因此還需要進(jìn)一步擴大樣本量以及多中心的臨床研究、基礎(chǔ)研究。