宋麗娜 王 沖 洪英霞 王 瑞

淋巴瘤指起源于淋巴結(jié)和淋巴組織的惡性腫瘤，包括非霍奇金和霍奇金淋巴瘤，以非霍奇金淋巴瘤較為常見，約占90%左右，無痛性、進(jìn)行性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為主要特征，部分高侵襲性淋巴瘤可侵犯骨髓，甚至發(fā)展為淋巴瘤細(xì)胞白血病(LCL)[1-2]。據(jù)相關(guān)資料顯示，在所有非霍奇金淋巴瘤患者中，LCL約占15%～63%[3]。LCL是指淋巴樣細(xì)胞侵入骨髓，致使外周和骨髓血發(fā)生繼發(fā)性的改變，并伴有正常血細(xì)胞的減少，預(yù)后極差。臨床應(yīng)對加強對LCL的認(rèn)識，從而為臨床治療及預(yù)后評估提供指導(dǎo)。組織病理學(xué)一直被認(rèn)為是診斷該病的金標(biāo)準(zhǔn)，但對于侵犯骨髓而細(xì)胞形態(tài)學(xué)不典型或骨髓已經(jīng)受累的患者，病理組織學(xué)檢查則存在一定的局限性[4]。隨著近年來診療水平的發(fā)展，流式細(xì)胞術(shù)(FC)已逐漸被應(yīng)用于淋巴瘤檢測中，與組織病理學(xué)檢查相結(jié)合可在一定程度上提高診斷價值。鑒于此，本研究分析LCL患者病例免疫組化及骨髓流式免疫結(jié)果及臨床指導(dǎo)意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入我院2014年6月至2016年10月收治的LCL患者64例，其中男性38例，女性26例；年齡20～68歲，平均年齡(42.34±5.06)歲；體重指數(shù)(BMI )18～30 kg/m2，平均BMI(23.87±1.08)kg/m2；25例T淋巴細(xì)胞型，39例B淋巴細(xì)胞型；文化程度：16例初中及以下，34例高中，14例大專及以上。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合LCL的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②臨床資料完整；③語言、認(rèn)知功能正常；④能配合完成各項檢查；⑤患者對研究知悉，資源簽訂知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②伴有肝腎功能損壞者；③存有精神疾病者。

1.2 方法

1.2.1 病理免疫組化 取淋巴結(jié)或淋巴組織活檢標(biāo)本，依次采用75%、80%、95%×2、100%×3酒精及二甲苯處理組織，并將其放入60℃恒溫烤箱中過夜，其中內(nèi)源性過氧化物酶經(jīng)甲醇-雙氧水處理，之后使用PBS液和蒸餾水清晰，再對抗原進(jìn)行修復(fù)，將一抗和二抗滴入其中，室溫下孵育30min后加入顯色劑，復(fù)染(蘇木素)，依次采用75%、80%、95%×2、100%×4酒精及二甲苯處理，分析CD3、TDT、CD5、CD7、CD10、CD20、CD21、CD34、CD43、CD79a、LCA、BCL-2、BCL-6、PAX-5抗原的表達(dá)。檢測中所使用的病理免疫組化儀器(benchMark-ULTRA)及試劑盒均購自美國Ventana公司。

1.2.2 骨髓流式免疫 抽取骨髓標(biāo)本1～2 ml，肝素抗凝，經(jīng)淋巴細(xì)胞液分離獲取單個核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為(0.5～1.0)×106/ml，然后將其溶于磷酸鹽緩沖液中，以CD45/SSC設(shè)門分出成熟細(xì)胞群和幼稚細(xì)胞群進(jìn)行檢測，分析CD2、CD3、CD5、CD7、CD11c、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、CD38、FMC-7、HLA-DR、sKappa抗原的表達(dá)。檢測中所使用的流式細(xì)胞儀(FC500)與試劑盒均購自美國貝克曼公司。

1.3 觀察指標(biāo)

分析免疫組化及骨髓流式免疫分型各抗原表達(dá)情況，同時進(jìn)行隨訪，分析LCL患者生存周期特點。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 免疫組化及骨髓流式免疫分型結(jié)果

免疫組化及骨髓流式免疫分型均顯示，25例T淋巴細(xì)胞型，39例B淋巴細(xì)胞型。

2.2 免疫組化各抗原表達(dá)情況

T淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD3，占比84.00%，其次為TDT，占比64.00%；B淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD20，占比100%，其次為CD79a，占比87.18%，見表1。

2.3 骨髓流式免疫各抗原表達(dá)情況

T淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD7，占比100.00%，其次為CD3，占比60.00%；B淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD19，占比94.87%，其次為CD20，占比56.41%。見表2。

2.4 LCL患者生存周期特點

25例T淋巴細(xì)胞型患者生存周期為1～40個月不等，中位生存周期為19.78個月，伴CD3表達(dá)缺失中位生存期為12.98個月，不伴CD3表達(dá)缺失中位生存期為9.55個月。39例B淋巴細(xì)胞型患者生存周期為3～60個月不等，中位生存周期為27.75個月，伴CD20表達(dá)缺失中位生存期為7.16個月，不伴CD20表達(dá)缺失中位生存期為32.11個月。

3 討論

LCL是血液系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢。LCL是一種高度異質(zhì)性疾病，故易漏診、誤診，延誤治療時間，影響患者預(yù)后。隨著白細(xì)胞分化抗原的相繼問世，淋巴細(xì)胞的起源、發(fā)育過程及復(fù)雜的生物學(xué)特征逐漸被認(rèn)識[5]。病理診斷是確診LCL的主要手段，病理免疫組化是病理診斷中不可或缺的手段，其通過抗原-抗體反應(yīng)，可與組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)相聯(lián)系，但對于臨床高度懷疑淋巴瘤，該檢查手段并未檢測出異常反應(yīng)性淋巴結(jié)細(xì)胞使，則檢測難度較大[6-7]。FC目前已被廣泛于血液疾病的診斷中，可多參數(shù)、快速地對大量細(xì)胞進(jìn)行測定和分析，能夠有效彌補病理免疫組化檢查的不足，對于淋巴瘤免疫分型及各種細(xì)胞比例具有較高敏感性，但檢測中經(jīng)常出現(xiàn)假陽性結(jié)果[8]。

病理免疫組化及FC兩種檢測方法是目前LCL的主要檢測手段，存在各自的優(yōu)點和缺點，尋找準(zhǔn)確、快速的檢測手段十分重要。本研究結(jié)果顯示，免疫組化及骨髓流式免疫分型均顯示，25例T淋巴細(xì)胞型，39例B淋巴細(xì)胞型；免疫組化各抗原表達(dá)結(jié)果顯示，T淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD7，其次為CD3；B淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD19，其次為CD20，骨髓流式免疫各抗原表達(dá)結(jié)果顯示，T淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD7，其次為CD3；B淋巴細(xì)胞型表達(dá)率最高的抗原為CD19，其次為CD20。表明LCL患者病理免疫組化及骨髓流式免疫分型結(jié)果一致，但仍有部分抗體結(jié)果存在差異，且在腫瘤發(fā)展過程中存在部分抗原丟失。非霍奇金淋巴瘤按照腫瘤細(xì)胞分化不同，可分為NK/T細(xì)胞型NHL和B細(xì)胞型NHL，其中15%起源于NK/T細(xì)胞系，85%起源于B淋巴細(xì)胞系[9]。相關(guān)研究顯示，與B細(xì)胞淋巴瘤相比，T淋巴細(xì)胞瘤發(fā)生骨髓侵犯可能性越大[10]。病理免疫組化以免疫學(xué)為基本原理，通過化學(xué)反應(yīng)使顯色劑顯色，從而確定體內(nèi)抗原位置、含量及性質(zhì)[11-12]。是鑒別和診斷腫瘤的主要手段，準(zhǔn)確率較高，并有助于確定原發(fā)性惡性腫瘤部位。各種亞型的淋巴瘤均是獨立的疾病實體，且不同病理亞型的淋巴瘤治療方法亦不同，故病理免疫組化結(jié)果對指導(dǎo)臨床疾病治療具有重要的意義。FC對于無法獲取淋巴結(jié)病理但骨髓已經(jīng)受累的的淋巴瘤患者具有的一定的輔助診斷價值，且對血液疾病的診斷、預(yù)后應(yīng)用價值較高，已成為淋巴瘤分型的常規(guī)手段之一[13-14]。本研究通過對LCL患者生存周期進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，25例T淋巴細(xì)胞型患者中位生存周期為19.78個月，伴CD3表達(dá)缺失中位生存期為12.98個月，不伴CD3表達(dá)缺失中位生存期為9.55個月；39例B淋巴細(xì)胞型患者中位生存周期為27.75個月，伴CD20表達(dá)缺失中位生存期為7.16個月，不伴CD20表達(dá)缺失中位生存期為32.11個月，說明T淋巴細(xì)胞患者生存周期低于B淋巴細(xì)胞患者，分析原因主要是T淋巴細(xì)胞惡性程度更高。且在B淋巴細(xì)胞瘤患者中，CD20缺失生存周期顯著的降低。有研究顯示，對于CD20缺失的淋巴瘤細(xì)胞惡性程度更高[15]。故CD20表達(dá)對于評估淋巴瘤患者預(yù)后具有重要的意義。病理免疫組化及骨髓流式免疫在LCL中有著各自的優(yōu)勢和局限性，兩者相互彌補對于提高淋巴瘤診斷率具有重要的意義。但本研究樣本納入量偏少，今后應(yīng)擴大樣本量，進(jìn)一步研究，以為臨床診斷、治療提供可靠的指導(dǎo)的意義。

綜上所述，LCL患者病理免疫組化及骨髓流式免疫分型結(jié)果一致，兩者相互補充，不可替代，對于臨床治療有一定的指導(dǎo)意義，且T淋巴細(xì)胞患者腫瘤惡性程度高，生存周期較B淋巴細(xì)胞患者低，腫瘤發(fā)展過程中伴隨部分抗原丟失，對于評估預(yù)后具有重要價值。