佟彬良，楊澤康，劉瀟琳，張卜文，顏文，周春華△

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050031；2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，河北 石家莊 050017）

川芎定痛膠囊是由河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院制劑室研制的中藥復(fù)方制劑（批準(zhǔn)文號(hào)為冀藥制字Z05000005），由川芎、絞股藍(lán)、延胡索、白芷、細(xì)辛、全蝎6 味藥材組方，具有調(diào)和氣血、平肝熄風(fēng)、活絡(luò)安神止痛等功效，用于偏頭痛、緊張性頭痛、叢集性頭痛不伴外感癥狀者［1］。中醫(yī)認(rèn)為，疼痛主要分為“不榮則痛”“不通則痛”，不榮為氣血兩虛，不通為氣滯血瘀。本品主治氣滯血瘀型疼痛，氣滯血瘀可因外感風(fēng)、濕、寒或情志內(nèi)傷，肝郁氣滯等引起。方中，川芎為君藥，活血行氣，與延胡索有協(xié)同作用；細(xì)辛驅(qū)風(fēng)散寒；白芷驅(qū)風(fēng)燥濕散寒；全蝎息風(fēng)解痙、活血化瘀，但活血易導(dǎo)致氣虛；絞股藍(lán)起益氣健脾作用，其性寒，其余5 味藥性溫，藥性調(diào)和，防止服藥者陽(yáng)重成火?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，川芎具有抗氧化、保護(hù)神經(jīng)、抗炎、抗菌等作用，含阿魏酸、綠原酸、苯肽類(lèi)成分如藁本內(nèi)酯及其衍生物等［2-3］；延胡索的主要藥效物質(zhì)為生物堿類(lèi)成分［4］；白芷含有揮發(fā)油和香豆素類(lèi)等化學(xué)成分，其中香豆素類(lèi)生物活性最強(qiáng)［5］；絞股藍(lán)主要成分為人參皂苷Rb及絞股藍(lán)皂苷［6］；細(xì)辛中主要活性成分為揮發(fā)油［7］。川芎定痛膠囊內(nèi)容物為上述6味中藥的提取物，成分復(fù)雜，主要含有機(jī)酸類(lèi)、生物堿類(lèi)、香豆素類(lèi)、三萜皂苷、揮發(fā)油等活性成分。目前，川芎定痛膠囊揮發(fā)油成分研究中多局限于單一成分藥材或各個(gè)指標(biāo)性成分進(jìn)行定性定量檢測(cè)，但單一成分難以代表制劑的有效成分。為此，本研究中采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC -MS）法分離并分析了膠囊中揮發(fā)油的化學(xué)成分，為其物質(zhì)基礎(chǔ)、質(zhì)量控制、藥理活性的研究提供試驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890B -7000C 型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent 公司），配有Mass Hunter 質(zhì)譜工作站，美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院（NIST）標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)；10 mL揮發(fā)油提取器（天長(zhǎng)市唐氏實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；BP121S 型電子天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，精度為萬(wàn)分之一）。

1.2 試藥

川芎定痛膠囊（河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院醫(yī)院制劑，批號(hào)為191013）；乙酸乙酯（色譜純），石油醚（分析純），購(gòu)于天津科美爾化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與質(zhì)譜條件

2.1.1 GC 條件

色譜柱：DB -17MS 毛細(xì)管柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；程序升溫：色譜柱初始溫度為60 ℃、保持2 min，以3 ℃/ min 的速率升至120 ℃、保持2 min，以5 ℃/ min 的速率升至180 ℃、保持6 min，以20 ℃/ min的速率升至260 ℃、保持2 min；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；載氣：氦（He）氣；載氣流速：1 mL/ min；分流比：20∶1；進(jìn)樣量：1μL。

2.1.2 MS 條件

電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度：150 ℃；電子能量：70 eV；接口溫度：250 ℃；溶劑延遲時(shí)間：6.5 min；全掃描監(jiān)測(cè)方式，質(zhì)荷比（m/z）掃描范圍：60～600［8-10］。

2.2 揮發(fā)油樣品制備

取川芎定痛膠囊內(nèi)容物30 g，精密稱(chēng)定，置揮發(fā)油提取器中，加入純化水400 mL，浸泡4 h。按2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》2204 揮發(fā)油測(cè)定法（附錄XD 甲法）進(jìn)行測(cè)定，水蒸氣蒸餾5 h，收集揮發(fā)油。以石油醚作溶劑，萃取、收集揮發(fā)油；減壓蒸餾揮去石油醚，所得樣品用無(wú)水硫酸鈉干燥，得淺黃色油狀液體；移取至樣品瓶，密封，保存于4 ℃冰箱，備用。提取的揮發(fā)油樣品，加乙酸乙酯稀釋?zhuān)?.22μm微孔濾膜濾過(guò)。

2.3 方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下?lián)]發(fā)油樣品，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，GC-MS色譜峰保留時(shí)間的RSD≤0.31%（n=6），峰面積的RSD≤0.53%（n=6），表明儀器精密度好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下樣品，分別于0，3，6，9，12 h時(shí)進(jìn)樣分析，各色譜峰保留時(shí)間的RSD≤0.83%（n=5），峰面積的RSD≤1.02%（n=5），表明穩(wěn)定性良好。

2.4 揮發(fā)油化學(xué)成分GC-MS 分析

成分鑒定與相對(duì)含量測(cè)定：采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)川芎定痛膠囊揮發(fā)油總離子流色譜進(jìn)行分析和處理，根據(jù)相應(yīng)的MS 譜圖，通過(guò)工作站NIST 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)檢索，參考文獻(xiàn)［7，11-16］，確定各色譜峰代表的化學(xué)成分，并按面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)油化學(xué)成分的相對(duì)含量。

結(jié)果分析：樣品經(jīng)GC-MS 分析，得到總離子流圖（圖1），采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)川芎定痛膠囊揮發(fā)油總離子流色譜進(jìn)行分析，并采用峰面積歸一化法確定揮發(fā)油各組分的相對(duì)百分含量。揮發(fā)油中共分離出49 個(gè)峰，其中鑒定出31 個(gè)成分，主要包括烯烴類(lèi)、醇類(lèi)、酮類(lèi)、醚類(lèi)、酚類(lèi)、酯類(lèi)、芳香化合物等，占總流出峰峰面積的86.78%，其中，烯類(lèi)13個(gè)，峰面積之和占總流出峰面積的20.04%；醇類(lèi)3個(gè)，占2.48%；酮類(lèi)2個(gè)，占0.64%；芳香化合物4個(gè)，占12.95%；醚類(lèi)3個(gè)，占15.79%；酚類(lèi)2個(gè)，占10.63%；酯類(lèi)（苯酞類(lèi)）4個(gè)，占24.25%。E-藁本內(nèi)酯峰面積最高（17.56%），其次是黃樟醚（10.62%）、甲基丁香酚（10.32%）、3，5 -二甲氧基甲苯（7.58%）、角鯊烯（5.77%）、肉豆蔻醚（4.33%）、3，4，5-三甲氧基甲苯（4.08%）。詳見(jiàn)表1。

3 討論

由表1 可知，已鑒定出的31 種化學(xué)成分中大多數(shù)化學(xué)成分來(lái)源于川芎、細(xì)辛。其中來(lái)源于川芎的成分19種，其他藥材揮發(fā)油成分較少，與川芎為君藥的事實(shí)相符。經(jīng)鑒定，川芎定痛膠囊揮發(fā)油中E-藁本內(nèi)酯占比最高（17.56%）。

表1 GC-MS法分析川芎定痛膠囊揮發(fā)油化學(xué)成分Tab.1 Chemical components in the volatile oil from Chuanxiong Dingtong Capsules by the GC -MS

藁本內(nèi)酯及其衍生物為川芎揮發(fā)油的主要活性成分，同其生物堿均具有腦保護(hù)作用，如抑制腦I/ R 損傷、抗偏頭痛、保護(hù)神經(jīng)，其在抑制血栓形成和血小板聚集、抗心肌缺血及抑制子宮平滑肌收縮等方面的作用也使川芎常被用于活血化瘀調(diào)經(jīng)藥［17］。另有研究表明，藁本內(nèi)酯可劑量依賴(lài)性地減輕動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠動(dòng)脈血栓的質(zhì)量，抑制腺苷二磷酸所致血小板聚集［18］，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。其衍生物洋川芎內(nèi)酯Ⅰ對(duì)于偏頭痛模型大鼠具有顯著的治療效果，同時(shí)，李海剛等［3］提出藁本內(nèi)酯可能具有抗凝血和抗血小板凝集作用，MA等［19］提出Z-蒿本內(nèi)酯具有抗抑郁作用。

黃樟醚、甲基丁香酚、3，5-二甲氧基甲苯和2，4，6-三甲氧基甲苯等為細(xì)辛的主要活性成分。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析顯示，黃樟醚和甲基丁香酚被認(rèn)為具有抗炎作用，是能發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用的主要藥效物質(zhì)。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，甲基丁香酚能抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，對(duì)不同物種的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靜脈注射后可起到不同程度的麻醉效果，能有效限制神經(jīng)病理性疼痛，可作為有效的局部麻醉劑和鎮(zhèn)痛劑。在相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，細(xì)辛中的揮發(fā)油成分被證明對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等均有影響，可實(shí)現(xiàn)鎮(zhèn)靜抗驚厥、解熱鎮(zhèn)痛、預(yù)防和治療炎癥、抗變態(tài)反應(yīng)等作用［20-21］，同時(shí)也具有一定毒性，需謹(jǐn)慎使用［20］。

川芎、細(xì)辛的揮發(fā)油成分可能在川芎定痛膠囊的藥效中起到了重要作用。另外，其他幾味藥材揮發(fā)油含量較少，但所含有的其他化學(xué)成分也對(duì)川芎定痛膠囊的藥效起到了輔助作用。

延胡索的主要藥效物質(zhì)為生物堿類(lèi)成分，對(duì)人體各大系統(tǒng)均有顯著效果?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，叔胺類(lèi)成分具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、催眠、抗焦慮作用［22］，針對(duì)消化系統(tǒng)的抗胃腸道潰瘍作用［23］和心腦血管系統(tǒng)的抗心肌缺血、腦缺血作用等［24］，臨床常用于治療心血管疾病、炎癥、失眠癥等，但由于生物堿具有一定毒性，應(yīng)關(guān)注其禁忌證［4，25］；香豆素類(lèi)是白芷中生物活性最強(qiáng)的成分，對(duì)神經(jīng)中樞的影響強(qiáng)，具有解熱、鎮(zhèn)痛、平喘作用，在擴(kuò)血管、抗血小板聚集、降血壓等方面有一定效果，但需注意可能帶有肝毒性等毒副作用［26］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，絞股藍(lán)的主要成分為人參皂苷Rb、絞股藍(lán)皂苷，在調(diào)血脂、保肝、抗疲勞、抗氧化、保護(hù)心腦血管等有一定作用，廣泛用于高血脂等治療［6，27］。

上述揮發(fā)油中許多化學(xué)成分具有不同程度的毒性。黃樟醚可抑制呼吸中樞，中毒初期會(huì)有頭痛、嘔吐、氣短、體溫升高、心悸等，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致明顯的中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制，呼吸逐漸困難甚至死亡；甲基丁香酚也被證明有肝毒性、基因和細(xì)胞毒性、致癌致突變等毒性［28］；欖香素在一定條件下具有致癌毒性［29］；藁本內(nèi)酯可使細(xì)胞凋亡，肉豆蔻醚能使人致幻等。多成分揮發(fā)油的毒性往往不是某個(gè)成分單獨(dú)起作用，多個(gè)揮發(fā)油成分單獨(dú)或協(xié)同作用極有可能使毒副作用變得復(fù)雜且更嚴(yán)重。因此，對(duì)于揮發(fā)油含有多種化學(xué)成分的川芎痛定膠囊，應(yīng)更明確和規(guī)范其成分種類(lèi)和含量。作為中藥復(fù)方制劑，川芎定痛膠囊在選材和制藥過(guò)程中，已通過(guò)配伍、煎煮等傳統(tǒng)手段減毒。而利用更精確的現(xiàn)代分析技術(shù)，可對(duì)其含量進(jìn)行精確測(cè)量和控制，最大程度地發(fā)揮其效應(yīng)，在保障安全性的同時(shí)提高有效成分含量。

綜上所述，采用GC-MS法分析川芎定痛膠囊的揮發(fā)油成分，擴(kuò)大了揮發(fā)油化學(xué)成分的測(cè)定范圍，明確了其成分種類(lèi)、含量占比，可用于川芎定痛膠囊的成分和質(zhì)量控制研究。