黃晶，李爽，吳春芝，谷福根（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學藥學院，呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院，呼和浩特 010050）

帕瑞昔布鈉（PCX）屬于新型非甾體解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥，是環(huán)氧合酶-2（COX-2）抑制劑伐地昔布的水溶性前體藥物，具有選擇性高、不良反應少、療效顯著等優(yōu)點[1-3]，臨床上主要用于術(shù)后止痛，也可用于癌痛[4-5]。PCX 為白色或類白色粉末，在水中可溶，在甲醇、丙酮等中易溶，乙腈中略溶，解離常數(shù)pKa為4.81。目前，PCX 上市劑型為注射劑，通過靜脈或肌內(nèi)注射給藥。注射給藥盡管起效快，生物利用高，但屬于侵入性用藥，可產(chǎn)生疼痛，也需協(xié)助用藥，患者依從性差且制備工藝條件嚴格復雜、成本高。

鼻腔給藥是藥物經(jīng)鼻黏膜吸收進入血循環(huán)而發(fā)揮藥效的一種全身給藥途徑，既保留了注射給藥起效快、生物利用度高特點，同時又具有制備工藝簡單、使用方便、患者可自行用藥等優(yōu)勢[6-7]，故鼻腔給藥可能是PCX 注射劑理想的替代給藥途徑[8]。藥物的溶解度、溶液化學穩(wěn)定性是選擇合適劑型與制備工藝的重要依據(jù)，而油水分配系數(shù)（P）又與藥物透過生物膜轉(zhuǎn)運難易程度密切相關(guān)。PCX 屬于強堿弱酸鹽，在水中可發(fā)生解離；其結(jié)構(gòu)中含有磺酰胺鍵，易發(fā)生水解，故從理論上推測，pH 值將會對該藥物的有關(guān)理化性質(zhì)將產(chǎn)生明顯影響（結(jié)構(gòu)式見圖1）?；谝陨戏治?，本文將考察pH 值對該藥物溶解度、油水分配系數(shù)以及溶液化學穩(wěn)定性的影響，旨在為今后研究PCX鼻腔給藥新制劑提供理論依據(jù)。

圖1 PCX 化學結(jié)構(gòu)Fig 1 Chemical structure of PCX

1 材料

1.1 儀器

LC-20AT 高效液相色譜儀（日本島津公司）；PHS-3C 型pH 計（上海儀電科學儀器有限公司）；AB265-S 型電子分析天平（瑞士梅特勒·托利多公司）；KQ5200E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Arioso UP 900 型超純水器（韓國Human 公司）；101 型電熱鼓風干燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；SHZ-88A 型往復水浴恒溫振蕩器（江蘇太倉實驗設備廠）；H1750R 離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）。

1.2 試藥

PCX（武漢華翔科潔生物技術(shù)有限公司，純度：100.09%，批號：190715）；正辛醇（天津市化學試劑有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 PCX 含量測定方法的建立

2.1.1 色譜條件[9-10]色譜柱：Inert Sustain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.01 mol·L－1磷酸氫二鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 3.0）（65∶35，V/V）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：215 nm；柱溫：室溫；進樣量：20 μL。

2.1.2 專屬性試驗 以蒸餾水為溶劑，配制質(zhì)量濃度為80 μg·mL－1的PCX 儲備液。取2 mL 分別置于4 支10 mL 具塞刻度試管中，再分別以0.1 mol·L－1HCl 溶液、0.1 mol·L－1NaOH 溶液、30%H2O2溶液、蒸餾水稀釋至刻度，密封，其中以酸、堿制備的PCX 溶液置于80 ℃恒溫條件下進行破壞，30%H2O2制備的PCX 溶液置于30 ℃恒溫條件下進行破壞，在不同時間取點分別取樣，按“2.1.1”項下色譜條件，進樣分析，記錄色譜圖。其中，以0.1 mol·L－1HCl 溶液、0.1 mol·L－1NaOH 溶液所配樣品進樣前需用對應相同濃度的堿或酸溶液進行中和，結(jié)果見圖2。PCX 與其降解產(chǎn)物能夠很好地分離，PCX 溶液在強酸性和氧化條件下不穩(wěn)定，而在堿性條件下具有良好的穩(wěn)定性。

圖2 PCX 專屬性色譜圖Fig 2 Specificity chromatogram of PCX

2.1.3 標準曲線的制備 精密稱取PCX 對照品5.0 mg，置于10 mL 量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為500 μg·mL－1的PCX 儲備液。取PCX 儲備液，加蒸餾水稀釋適當倍數(shù)，制得質(zhì)量濃度為 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0 μg·mL－1的PCX 系列對照品溶液，進樣分析，記錄色譜圖。以PCX 對照品溶液的質(zhì)量濃度（C，μg·mL－1）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，作線性回歸，得回歸方程為：A＝6.2×104C＋4.9×104（r＝0.9997），表明PCX 在2.5 ～80.0 μg·mL－1與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.1.4 精密度試驗 分別配制低（5.0 μg·mL－1）、中（20.0 μg·mL－1）、高（60.0 μg·mL－1）質(zhì)量濃度的PCX 對照品溶液，進樣分析，日內(nèi)重復測定5 次，連續(xù)測定5 d。計算方法的日內(nèi)及日間RSD值。結(jié)果測得日內(nèi)RSD在0.12%～0.36%，日間RSD在0.16%～0.63%（n＝5），表明該方法的精密度良好。

2.1.5 回收試驗 分別配制低（5.0 μg·mL－1）、中（20.0 μg·mL－1）、 高（60.0 μg·mL－1） 質(zhì)量濃度的PCX 對照品溶液，各平行3 份，進樣分析，記錄PCX 峰面積并計算回收率。結(jié)果測得低、中、高質(zhì)量濃度PCX 的回收率分別為100.58%、99.82%、100.20%，RSD分別為0.14%、0.13%、0.39%，表明該方法準確度較高。

2.1.6 重復性試驗 配制6 份質(zhì)量濃度為20.0 μg·mL－1的PCX 對照品溶液，進樣分析，記錄峰面積。結(jié)果PCX 峰面積的RSD為0.78%（n＝6），表明該方法重復性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗 取質(zhì)量濃度為20.0 μg·mL－1的PCX 對照品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h 進樣分析，記錄峰面積。結(jié)果PCX 峰面積的RSD為0.08%（n＝6），表明PCX 溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2 藥物溶液化學穩(wěn)定性的研究

以蒸餾水為溶劑，配制質(zhì)量濃度為80.0 μg·mL－1的PCX 溶液。取上述PCX 溶液1 mL，分別置于8 支10 mL 具塞刻度試管中，分別加入pH 值分別為2.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、10.0、12.0 的磷酸鹽緩沖液（自配[11]）至刻度，搖勻，密封，置于80℃恒溫條件下放置，分別于第0、24、48、72 h 取樣，放冷至室溫，進樣分析，計算反應液中PCX 的濃度及其降解百分率，結(jié)果見圖3。當介質(zhì)pH ≥6 時，PCX 溶液在長達72 h 的加熱下，幾乎沒有降解，表明在中性和堿性條件下，該藥物的化學穩(wěn)定性良好；而當介質(zhì)pH ＜6，尤其是在強酸性條件下，藥物的降解速率顯著增加，穩(wěn)定性明顯降低。此外，在酸性條件下，PCX 的降解百分率隨著時間的增加而增加。

圖3 PCX 溶液在不同pH 條件下的降解曲線（n ＝3）Fig 3 Degradation curves of PCX solution under different pH conditions（n ＝3）

2.3 藥物溶解度的測定

分別配制pH 值為2.0、4.0、6.0、7.0、7.5、8.0的磷酸鹽緩沖液，然后取適當體積置于1.5 mL EP 管中，均加入過量PCX，于20℃下振搖72 h，使溶解達平衡，以1500 r·min－1離心5 min，取上清液，加水稀釋適當倍數(shù)后，按“2.1.1”項下色譜條件進樣分析，計算PCX 在不同pH 下的濃度及其溶解度。以pH 值為橫坐標，藥物溶解度（mg·mL－1）為縱坐標，繪制溶解度隨pH 變化的曲線，結(jié)果見圖4?？梢?，PCX 在酸性pH 條件下溶解度很小，而在中性尤其是在堿性pH 條件下，其溶解度顯著增大。

圖4 PCX 溶解度隨pH 變化曲線（n ＝3）Fig 4 Solubility of PCX with various pH values（n ＝3）

2.4 藥物油水分配系數(shù)的測定[12-13]

2.4.1 油相與水相的制備 將蒸餾水或pH 分別為2.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、10.0 的系列磷酸鹽緩沖液（水相），與適量正辛醇（油相）混合，充分振搖，使油、水兩相分配達平衡，采用分液漏斗分離油、水兩相，備用。

2.4.2 平衡時間的確定 以蒸餾水配制質(zhì)量濃度為1 mg·mL－1的PCX 溶液，精密吸取上述溶液0.8 mL，置于10 mL 量瓶中，分別加入“2.4.1”項下所制備的不同水相溶液至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為80 μg·mL－1的PCX 系列水相溶液。取上述PCX 系列水相溶液5 mL，置于具塞錐形瓶中，加入對應相同體積油相，密塞后置于25℃恒溫水浴振蕩器中振搖，分別于第0、15、30、45、60、120 min 在水相中取樣，樣品用0.45 μm針式濾器過濾，取續(xù)濾液，按“2.1.1”項下色譜條件進樣分析，測定水相中PCX 的濃度，結(jié)果見表1?？梢姡銣卣駬u60 min 時，不同pH 值水相中PCX 的濃度已基本恒定，因此，將藥物在油相/水相中分配達平衡時間選定為60 min。

表1 PCX 在正辛醇-水及不同pH 磷酸鹽緩沖液中分配平衡時間Tab 1 Equilibrium time of PCX distribution in n-octanol-water/phosphate buffer with different pH values

2.4.3P的測定 按“2.4.2”項下方法，將PCX 水相溶液與對應等體積油相混合，在25℃恒溫水浴振蕩器中振搖60 min。在水相中取樣，同法處理后進樣分析，測定水相中藥物的濃度。根據(jù)公式：P＝（Cw0－Cw1）/Cw1，計算不同pH 時藥物的P值。式中，Cw0是水相中藥物的初始濃度，Cw1是分配達平衡后水相中測得的藥物濃度。結(jié)果測得PCX 在正辛醇-水中的P值為3.53。藥物在正辛醇-水及不同pH 磷酸鹽緩沖液中的P值變化見圖5?？梢?，PCX 的P值隨著pH 變化曲線呈倒S 形，當水相的pH ≥8.0 時，P值較??；當pH ＜8.0 時，隨著水相pH 值的減小，藥物P值逐漸增大，在酸性pH 條件下，PCX 的P值遠大于堿性pH。

圖5 PCX 的P 值隨pH 變化的曲線（n ＝3）Fig 5 P values of PCX with various pH values（n ＝3）

3 討論

文中采用HPLC 法測定PCX 含量，發(fā)現(xiàn)該藥物在強酸和氧化條件下穩(wěn)定性差，而在堿性pH值條件下穩(wěn)定性好，與文獻報道結(jié)果一致[14]。此外，PCX 與其降解產(chǎn)物達到基線分離，表明方法的專屬性好，且所建立PCX 的HPLC 分析方法，操作簡單，線性范圍、精密度、準確度以及重現(xiàn)性等均符合分析要求，可用于該藥物的含量測定。

PCX 溶液化學穩(wěn)定性研究顯示，PCX 溶液在pH ≥6.0 時，具有良好穩(wěn)定性，而在pH ＜6.0時，尤其在強酸條件下，藥物化學穩(wěn)定性顯著降低，這可能是由于藥物結(jié)構(gòu)中的磺酰胺鍵，在酸性pH 值條件下易發(fā)生水解，生成其降解產(chǎn)物伐地昔布的緣故[15-16]。此外，從PCX 溶解度測定結(jié)果可見，在酸性pH 介質(zhì)中，PCX 溶解度較差，而在中性尤其是堿性pH 條件下，藥物的溶解度顯著改善，與文獻報道結(jié)果相似[10]，這可能是由于在堿性pH 下，PCX 更易發(fā)生解離，導致其在水中溶解度明顯增加。最后，P測定結(jié)果顯示，在酸性pH 條件下，藥物的P值較大；隨著pH 值的增加，藥物P值逐漸減小；尤其在堿性pH 下，藥物P很小，這是因為在堿性pH 條件下，該藥物主要以解離型鈉鹽形式存在，極性大，在水相中分布多，故表現(xiàn)為P值小，而在酸性條件下，藥物主要以游離酸分子形式存在，極性小，在油相中分布較多，表現(xiàn)為P值大。綜上結(jié)果，表明PCX 溶液化學穩(wěn)定性、溶解度及P值與介質(zhì)pH密切相關(guān)，即具有明顯pH 值依賴性。

考慮藥物臨床使用劑量、人鼻腔生理pH 范圍和鼻黏膜對酸堿的耐受程度，再結(jié)合本文中藥物溶解度、P值及藥物穩(wěn)定性研究結(jié)果，可預測今后研制PCX 鼻腔給藥制劑，其pH 值以控制在6.0 ～7.0 為宜，以便于制備符合臨床給藥劑量、體內(nèi)易于吸收、生物利用度高、化學穩(wěn)定性好和鼻黏膜刺激性小的PCX 鼻用制劑。