梁佩賢，招淑文，卓創(chuàng)近，溫麗玲，余卓麗

（廣東，佛山市中心血站，佛山，528000）

根據(jù)《全血及成分血質(zhì)量要求》（GB 18469?2012）新鮮冰凍血漿的制備需將采集后儲存于冷藏環(huán)境中的全血，最好在6?8 h 內(nèi)，但不超過18 h 將血漿分離出并速凍成固態(tài)［1］；然而，血液從采集到制備過程要控制在6?8 h 內(nèi)的話，需要在非正常上班時間內(nèi)完成制備，本血站以街頭采血為主，血液采集時間集中在下午和晚上，導(dǎo)致能在正常上班時間內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿（Fresh Frozen Plasma，F(xiàn)FP） 約占制備總量的20%，約80%的FFP 是在非正常上班時間內(nèi)制備的，因此，能有效延長制備時間將會大大提高FFP 的制備效率。 本文通過實驗分析對不同條件儲存制備FFP的凝血因子Ⅷ（Factor Ⅷ，F(xiàn)Ⅷ）活性變化進行分析。

1 材料與方法

1.1 血液的采集和分組使用帶旁路留樣系統(tǒng)的去白細胞采血袋采集40 名獻血者的全血，血液在采集后室溫放置，1 h 內(nèi)完成白細胞的過濾操作，并對血液進行以下分組：A 組：儲存在20?24℃條件下，在儲存的8 h、12 h、24 h 在22℃條件下離心制備FFP；B 組：儲存在2?6℃條件下，在儲存的8 h、12 h、24 h 采用血液加溫儀復(fù)溫（37℃，2 min）后在22℃條件下離心制備FFP；C 組：儲存在2?6℃條件下（血袋垂直），在儲存的8 h、12 h 和24 h 在4℃條件下離心制備FFP；D 組，儲存在2?6℃條件下，在儲存的8 h、12 h 和24 h 血液經(jīng)充分混勻后在4℃條件下離心制備FFP。

1.2 方法

1.2.1 制備方法 新鮮冰凍血漿制備采用大容量低溫離心機，相對離心力4276 g，離心時間12 min，離心溫度根據(jù)實驗要求進行調(diào)整（選擇4℃或者22℃）。

1.2.2 儀器與試劑CR7 大容量低溫離心機（日本HITCHI 公司）；SYSMEX CA?530 全自動血凝儀（日本SYSMEX CORPORATION 公 司）； 血液加溫儀Plasmatherm（德國Barkey）；因子Ⅷ活性測定試劑盒：SIEMENS Healthcare Diagnostics Products GmbH（批號：547679）。 所有檢測均為隨機工作人員操作，相關(guān)制備及檢測儀器均未按組別指定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理運用SPSS 19.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析，不同組之間和不同儲存時間之間的比較采用重復(fù)測量方差分析和獨立樣本t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 FFP 的FⅧ活性組內(nèi)不同制備時間的分析情況（表1，圖1）。

表1 FⅧ組內(nèi)因素的方差分析檢驗結(jié)果

圖1 凝血因子FⅧ活性與時間的關(guān)系

2.2 各組間FⅧ活性比較（表2，3，4）。

表2 各組不同儲存時間點制備FFP 的FⅧ（IU／mL）

2.3 比較各組制備的FFPFⅧ含量的合格情況。

表4 各組FⅧ檢測合格率（%）

3 討 論

新鮮冰凍血漿是臨床常用的一種血液制劑，幾乎含有所有正常水平的凝血因子，對預(yù)防和治療出血性疾病及凝血功能疾病起著非常重要的作用，主要用于失血過多、肝病或者血友病等具有凝血功能障礙患者的治療中，并取得較好的成效，國內(nèi)外對新鮮冰凍血漿的使用越來越廣泛［2］。 盡管絕大多數(shù)輸注新鮮冰凍血漿的患者不存在Ⅷ因子缺乏的現(xiàn)象，但是當(dāng)前新鮮冰凍血漿的質(zhì)量控制，基本上是基于凝血因子Ⅷ（FⅧ）活性的檢測，如歐盟委員會指南要求新鮮冰凍血漿的平均FⅧ水平高于0.7 IU／mL；英國指南要求75%的血漿中FⅧ高于0.7 IU／mL，而我國同樣要求75%受檢血漿中FⅧ高于0.7 IU／mL［3］。

本文對不同條件儲存、不同儲存時間制備FFP 的FⅧ活性進行研究分析，同一組別不同儲存時間制備FFP 的FⅧ活性變量之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，F(xiàn)Ⅷ活性隨著制備時間的延長而降低，但不同組別不同儲存時間制備FFP 的FⅧ活性變量之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，并與文獻報道一致［4］，結(jié)果見表1。 本課題的研究有一定的局限性，如FFP 制備后沒有速凍和融解過程，直接進行FⅧ活性的檢測，與常規(guī)抽檢的方式不同，因此也出現(xiàn)了與其他文獻報道結(jié)果不相符的情況［5］，需要我們做更深入的研究。

FⅧ在4℃保存1?3 d 后活性并不是下降50%，而是由于4℃時凝血因子Ⅷ被沉淀在紅細胞當(dāng)中，所以離心后檢測上清血漿，不能將部分凝血因子Ⅴ、Ⅷ檢出，所以誤認為活性降低50%［6］。 本文對2?6℃條件下儲存的全血制備FFP 前是否進行充分混勻?qū)FP制備質(zhì)量的影響進行了分析，C 組是制備前沒有充分混勻血液，D 組是制備前充分混勻血液（即C 組和D組比較），兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2?1。 與文獻［7］報道結(jié)果不一致，這可能與我們儲存全血的容量有關(guān)。 枸櫞酸抗凝的全血在4℃下長期儲存會導(dǎo)致FⅧ和vWF 活性的顯著降低，通過在加工前對試管進行再加熱，可以完全逆轉(zhuǎn)損失。 本文對2?6℃條件下儲存的全血制備FFP 前將全血放置在血液加溫儀中復(fù)溫（37℃，2 min）后再制備，并與未復(fù)溫制備的FFP 進行比較（即B 組和C 組比較），兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2?1。

FFP 的FⅧ活性合格率≥75%時可認為制備過程受控［8］，因此通過計算各組FⅧ活性的合格率來評估制備過程的有效性，結(jié)果見表3。 儲存8 h 和12 h 的各組制備FFP 的FⅧ活性合格率均為100%，儲存24 h 后各組制備FFP 的FⅧ活性合格率分別為A 組100%，B 組75%，C 組80%，D 組65%，從統(tǒng)計結(jié)果來看，儲存24 h 后D 組制備FFP 的FⅧ活性合格率不符合控制要求，與文獻報道結(jié)果一致［8］，儲存24 h 后A組、B 組和C 組制備FFP 的FⅧ活性合格率均≥75%，且A 組＞C 組＞B 組。 國外學(xué)者的研究認為全血室溫過夜后進行血液成分制備在工作流程上具有一定的合理性，可以解決采血點距離遠及采血時間長以及采血不集中等問題；有利于降低細菌污染風(fēng)險，因為在此期間白細胞可以很好地吞噬細菌［9］，本課題組正在進行全血室溫過夜對細菌污染風(fēng)險性的相關(guān)研究。筆者認為將采集的全血室溫放置24 h 內(nèi)制備FFP，既可以延長FFP 的制備時間，也大大提高了FFP 的制備效率，但由于本課題研究的樣本量有限，因此還應(yīng)加大研究的樣本量，并結(jié)合全血室溫過夜對細菌污染風(fēng)險性的相關(guān)研究結(jié)果，對全血室溫放置24 h 內(nèi)制備FFP 的制備流程加以驗證［10］。

表3 相同儲存時間的不同分組之間比較

綜上，本文研究結(jié)果表明不同條件儲存制備FFP的FⅧ活性隨著制備時間的延長而下降，全血儲存24 h 內(nèi)制備FFP 的合格率室溫條件（20?24℃）優(yōu)于低溫條件（2?6℃），因此，在滿足新鮮冰凍血漿制備質(zhì)量的前提下，進行血液的采集流程和血液制備流程的優(yōu)化將更有利于提升FFP 的制備效率。