樊璐，李玉，莊養(yǎng)林，王芳

（江西省血液中心，南昌 330052）

近年來我國梅毒感染呈現(xiàn)流行地區(qū)擴(kuò)大和感染率上升的嚴(yán)峻形勢。 據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心報(bào)道[1]，梅毒是我國乙類傳染病中報(bào)告發(fā)病數(shù)居第3 位的病種。梅毒螺旋體感染標(biāo)志物—梅毒螺旋體特異性抗體(抗-TP) 是輸血相關(guān)傳染病標(biāo)志物之一，《血站技術(shù)操作規(guī)程》[2]規(guī)定采供血機(jī)構(gòu)采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的血清學(xué)檢測試劑進(jìn)行血液標(biāo)本抗-TP 檢測。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-labeled Immunosorbeng Assay，ELISA)血源篩查試劑靈敏度較高，被血液篩查實(shí)驗(yàn)室廣泛采用。 本研究對(duì)獻(xiàn)血者抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本實(shí)施梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn) (Treponema Pallidum Particle Agglutination，TPPA) 確證及 (Hepatitis B Surface Antigin，HBsAg/TP)抗體膠體金法聯(lián)合檢測，探究南昌地區(qū)獻(xiàn)血人群梅毒篩查陽性符合率，評(píng)估ELISA試劑、 金標(biāo)試劑性能， 調(diào)查梅毒感染獻(xiàn)血人群特征，為降低抗-TP 不合格引起的血液報(bào)廢，招募低危獻(xiàn)血者，加強(qiáng)血液安全提供參考依據(jù)。 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 檢測對(duì)象 2020 年8 月12 日至2021 年9 月29 日南昌地區(qū)符合國家 《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB 18467-2011)的無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本97554 人份， 收集其中抗-TP ELISA 篩查陽性血漿標(biāo)本184例。

1.2 方法

1.2.1 設(shè)備 STAR 全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng) (瑞士Hamilton)；XANTUS 全自動(dòng)加樣儀與血型分析儀(深圳愛康)；FAME 24/20 全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)(瑞士Hamilton)。 儀器設(shè)備每年定期校驗(yàn)。

1.2.2 試劑 ELISA 試劑： 梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)(廈門英科新創(chuàng)，簡稱試劑A；北京萬泰，簡稱試劑B)；TPPA 試劑：梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒(凝集法)(日本富士瑞必歐)；金標(biāo)試劑：乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試劑(膠體金法)(廈門英科新創(chuàng))。 試劑均在有效期內(nèi)使用。ELISA 試劑取得國家藥品監(jiān)督管理局生物制品批簽發(fā)證明。

1.2.3 檢測方法 采用2 種不同廠家抗-TP ELISA試劑平行檢測無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本，以S/CO 值≥1.0 判為反應(yīng)性，0.8≤S/CO＜1 為灰區(qū)，單種試劑或2 種試劑檢測為反應(yīng)性時(shí)，使用同種試劑或2 種試劑對(duì)原標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試， 若復(fù)試結(jié)果中任何1孔呈反應(yīng)性，檢測結(jié)論判定為抗-TP 陽性。選取抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本開展TPPA 確證， 并進(jìn)行HBsAg/抗-TP 金標(biāo)聯(lián)檢。 嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行檢測操作、檢驗(yàn)結(jié)果判定。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 從SHINOW 9.5 啟奧血站管理信息系統(tǒng)調(diào)取獻(xiàn)血者抗-TP ELISA 篩查數(shù)據(jù)和梅毒感染獻(xiàn)血者特征資料。 應(yīng)用SPSS 20.0 軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 無償獻(xiàn)血者梅毒抗體檢測結(jié)果 南昌地區(qū)無償獻(xiàn)血人群抗-TP ELISA 篩查陽性率0.19%(184/97554)；TPPA 確證陽性率0.13%(130/97554)；TPPA確證陽性符合率70.65%(130/184)； 金標(biāo)陽性率0.13%(124/97554)；見表1。

表1 南昌地區(qū)無償獻(xiàn)血者梅毒螺旋體抗體檢測結(jié)果[n（%）]

2.2 抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本的TPPA 確證結(jié)果 抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本中， 雙試劑陽性72.83%(134/184)，試劑A 單陽9.24%(17/184)，試劑B 單陽17.93%(33/184)；ELISA 雙陽標(biāo)本中TPPA陽性93.28%(125/134)；ELISA 單陽標(biāo)本中TPPA 陽性10%(5/50)、TPPA 陰性82%(41/50)；見表2。

表2 抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本的TPPA 確證結(jié)果[n（%）]

2.3 抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本的HBsAg/抗-TP金標(biāo)聯(lián)檢結(jié)果 抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本中檢出1 例HBsAg 金標(biāo)陽性0.54%(1/184)；ELISA 雙陽標(biāo)本中抗-TP 金標(biāo)陽性90.30%(121/134)；ELISA 單陽標(biāo)本中抗-TP 金標(biāo)陽性6%(3/50)、抗-TP 金標(biāo)陰性94%(47/50)；見表3。

表3 抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本的HBsAg/抗-TP 金標(biāo)聯(lián)檢結(jié)果[n（%）]

2.4 抗-TP 金標(biāo)陽性標(biāo)本的TPPA 確證結(jié)果抗-TP 金標(biāo)陽性標(biāo)本中TPPA 陽性97.58%(121/124)， 抗-TP 金標(biāo)陰性標(biāo)本中TPPA 陰性76.67%(46/60)；見表4。

表4 抗-TP 金標(biāo)陽性標(biāo)本的TPPA 確證結(jié)果[n（%）]

2.5 抗-TP ELISA 篩查陽性標(biāo)本S/CO 值分布與TPPA 確證結(jié)果 試劑A、 試劑B 真陽性率分別為83.44% (126/151)、77.25% (129/167) (χ2=1.91，P ＞0.05)；將2 種ELISA 試劑篩查陽性標(biāo)本按S/CO 值各分為5 組， 當(dāng)S/CO 值處于0.8～0.99 灰區(qū)范圍，TPPA 確證無陽性結(jié)果； 隨著S/CO 值增大，與TPPA 確證陽性符合率升高；當(dāng)S/CO 值≥15，陽性符合率100%；見表5。

表5 抗-TP ELISA 試劑篩查陽性標(biāo)本S/CO 值分布與TPPA 確證結(jié)果[n（%）]

2.6 梅毒確證陽性獻(xiàn)血者人口學(xué)特征及合并感染情況 130 例南昌地區(qū)梅毒確證陽性獻(xiàn)血者中，女性陽性率高于男性；46～55 歲年齡段獻(xiàn)血者陽性率最高，36～45 歲次之；低學(xué)歷人群陽性率較高，文化程度與陽性率呈反比關(guān)系；農(nóng)民、工人、自由職業(yè)陽性率較高；初次獻(xiàn)血陽性率高于重復(fù)獻(xiàn)血；自愿獻(xiàn)血陽性率高于團(tuán)體獻(xiàn)血； 捐獻(xiàn)全血與捐獻(xiàn)單采血小板陽性率無明顯差異； 存在TP 合并HBV/HCV/HIV 感染情況；見表6。

表6 南昌地區(qū)130 例梅毒確證陽性獻(xiàn)血者特征

3 討論

岳曉麗[3]等報(bào)道，2014 年至2019 年中國梅毒總報(bào)告發(fā)病率逐年增長， 高發(fā)地區(qū)為西北部分地區(qū)、東南沿海部分省份。盧飛豹等[4]報(bào)道，2008 年至2019 年江西省梅毒疫情呈增長趨勢， 波及地區(qū)和人群廣泛，萍鄉(xiāng)市、贛州市、上饒市為重點(diǎn)地區(qū)。 本研究顯示， 南昌地區(qū)無償獻(xiàn)血人群梅毒抗體篩查陽性率0.19%，低于廣東深圳寶安區(qū)0.52%[5]、廣東肇慶0.2636%[6]。 近年來本地區(qū)梅毒抗體篩查陽性率呈下降態(tài)勢，與血站持續(xù)加強(qiáng)獻(xiàn)血前宣教干預(yù)、招募低危獻(xiàn)血者相關(guān)。 本地區(qū)獻(xiàn)血人群梅毒抗體確證陽性率0.13%，低于廣東深圳寶安區(qū)3.14‰[5]、湖北武漢0.27%[7]、 浙江湖州0.22%[8]、 河南南陽0.15%[9]。 南昌地區(qū)獻(xiàn)血者梅毒感染率處于較低水平，不屬于我國梅毒高發(fā)地區(qū)。

血清學(xué)檢測是梅毒篩查、 診斷和預(yù)后的最常用檢測方法[10]。 ELISA 檢測敏感性較高，檢驗(yàn)儀器自動(dòng)化程度高，結(jié)果客觀易判讀，適合于人群、血液制品大規(guī)模梅毒篩查； 不足之處是ELISA 方法存在非特異性反應(yīng)，可出現(xiàn)假陽性。 TPPA 對(duì)各期梅毒的敏感性、特異性較強(qiáng)，是目前廣泛被認(rèn)可和應(yīng)用的確證試驗(yàn)方法。 本研究顯示ELISA 雙試劑陽性標(biāo)本中TPPA 確證陽性符合率達(dá)93.28%，與王艷彬等[11]的報(bào)道(93.82%)接近，高于胡曉玉等[12](90.71%)、錢立瓊等[13](88.1%)、吳漢鐘等[14]的報(bào)道(87.36%)。試劑A 真陽性率83.44%，高于吳漢鐘等[14]的報(bào)道(79.17%)；試劑B 真陽性率77.25%，與錢立瓊等[13]的報(bào)道(77.5%)接近，高于吳漢鐘等[14](68.14%)、何芮等[15]的報(bào)道(66.30%)。 ELISA 單試劑陽性標(biāo)本中TPPA 陰性率82%、TPPA 陽性率10%， 此結(jié)果表明抗-TP ELISA 單試劑陽性大多數(shù)為假陽性結(jié)果，同時(shí)提示單種試劑檢測存在漏檢風(fēng)險(xiǎn)。 聯(lián)合應(yīng)用2 種不同廠家ELISA 試劑可形成互補(bǔ)， 保障血液安全。 雙試劑篩查陽性標(biāo)本的確證符合率高于單試劑篩查陽性， 說明雙試劑篩查策略提升檢測準(zhǔn)確性。

為優(yōu)化南昌地區(qū)獻(xiàn)血者健康檢查方案， 降低血液報(bào)廢率，減少血液采集、檢測、制備流程人力和物料成本消耗，本研究引入HBsAg/TP 抗體聯(lián)合檢測試劑(膠體金法)，了解其應(yīng)用效果。 研究結(jié)果顯示，抗-TP 金標(biāo)陽性占TPPA 確證陽性97.58%，與陳邦銳等[7](91.04%)、黃伯泉等[16](90.4%)的報(bào)道均達(dá)90%以上， 表明金標(biāo)試紙條能夠有效檢出絕大多數(shù)梅毒抗體陽性血液標(biāo)本。黃伯泉等[16]研究發(fā)現(xiàn)，HBsAg/TP 抗體聯(lián)檢金標(biāo)試劑與HBsAg 金標(biāo)試紙條對(duì)HBsAg 檢測效能一致，能夠有效篩查出TP陽性標(biāo)本，實(shí)際使用價(jià)值、經(jīng)濟(jì)效益明顯。周丹等[17]報(bào)道，加強(qiáng)獻(xiàn)血前體檢初篩檢查，尤其是加強(qiáng)獻(xiàn)血前TP 檢測，能有效減少高危獻(xiàn)血人群比例。 建議本地區(qū)獻(xiàn)血前檢測項(xiàng)目增加梅毒初篩， 將現(xiàn)行HBsAg 金標(biāo)試紙條替換為HBsAg/TP 抗體聯(lián)檢金標(biāo)試紙條，從源頭阻斷梅毒感染者獻(xiàn)血，降低抗-TP 不合格引起的血液報(bào)廢。

本研究經(jīng)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，ELISA 篩查陽性標(biāo)本較高的S/CO 值預(yù)示TPPA 陽性的可能性大，TPPA確證陽性符合率隨初篩試驗(yàn)S/CO 值增大呈升高趨勢。 張偉芳等[18]報(bào)道，梅毒抗體ELISA 檢測結(jié)果S/CO 值的高低與確證實(shí)驗(yàn)分級(jí)結(jié)果存在正相關(guān)性。 盡管ELISA 的S/CO 值和TPPA 確證結(jié)果的相關(guān)性較高， 但不宜完全參照S/CO 值大小推斷抗-TP ELISA 反應(yīng)性結(jié)果真陽性與否。 采供血機(jī)構(gòu)血液檢測實(shí)驗(yàn)室為防止漏檢， 大多設(shè)置ELISA 判讀灰區(qū)。 本研究中灰區(qū)標(biāo)本未檢出TPPA 陽性，與黃伯泉等[16]研究結(jié)果近似，表明灰區(qū)設(shè)置在一定程度上增加假陽性幾率。 亦有文獻(xiàn)報(bào)道[18-19]灰區(qū)范圍內(nèi)部分標(biāo)本檢出TPPA 確證陽性結(jié)果，可見合理設(shè)置ELISA 灰區(qū)限值可發(fā)揮防漏檢作用， 具備重要意義。

南昌地區(qū)130 例梅毒確證陽性獻(xiàn)血者中，不同性別、年齡、文化程度、職業(yè)的梅毒檢出率均存在差異。女性陽性率高于男性，與武漢[7]、廣州[20]、南陽[9]等地研究結(jié)果一致，可能與女性生理結(jié)構(gòu)特點(diǎn)往往導(dǎo)致梅毒隱性感染， 女性梅毒感染者中部分為性工作者相關(guān)。36～55 歲年齡段獻(xiàn)血者陽性率較高，推測與梅毒抗體終生陽性、中老年人群成為江西省梅毒高發(fā)人群[4]兩個(gè)因素相關(guān)。 低學(xué)歷人群陽性率較高，文化程度與陽性率呈反比關(guān)系。 農(nóng)民、工人、自由職業(yè)者陽性率較高，上述群體以低學(xué)歷人員居多，缺乏性傳播疾病防治知識(shí)，衛(wèi)生條件較差。 高校學(xué)生屬無償獻(xiàn)血主力軍，近年來大學(xué)生群體TP、HIV 感染率增高，須引起高度重視，應(yīng)加強(qiáng)青年學(xué)生性安全教育。 岳曉麗等[3]報(bào)道，年輕人群報(bào)告發(fā)病率快速增長； 各職業(yè)人群均有梅毒病例報(bào)告，以農(nóng)民和民工最多，學(xué)生人群增幅最大。 盧飛豹等[4]報(bào)道，15～19 歲少年、農(nóng)民梅毒報(bào)告發(fā)病率增幅較大，均為需要重點(diǎn)關(guān)注人群。 南昌地區(qū)梅毒感染獻(xiàn)血者年齡、文化程度、職業(yè)特征與國內(nèi)部分地區(qū)獻(xiàn)血人群梅毒感染特征基本吻合， 符合我國及江西省梅毒疫情人群分布規(guī)律。 初次獻(xiàn)血梅毒陽性率高于重復(fù)獻(xiàn)血， 提示固定獻(xiàn)血者隊(duì)伍建設(shè)對(duì)于血液安全保障至關(guān)重要。

本項(xiàng)目初步掌握南昌地區(qū)獻(xiàn)血人群梅毒抗體篩查、確證檢測情況和梅毒感染獻(xiàn)血者流行特征，因樣本數(shù)量有限，尚存在一定局限性，有待擴(kuò)大范圍進(jìn)一步調(diào)查。建議本地區(qū)血站對(duì)抗-TP ELISA 單試劑篩查不合格獻(xiàn)血者開展TPPA 確證檢測，允許確證陰性者進(jìn)入獻(xiàn)血者歸隊(duì)流程， 避免ELISA 假陽性所致血液資源流失； 合理選擇檢測方法和試劑，強(qiáng)化血液篩查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系監(jiān)控，不斷提升檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，最大程度避免漏檢或假陽性；獻(xiàn)血前檢測項(xiàng)目增加梅毒抗體膠體金法快速篩查，做好獻(xiàn)血者健康征詢和健康檢查， 從采血源頭加大高危行為者甄別力度，保障臨床用血安全。