劉曾飛 馬曉玉 廖春生

【摘要】本文主要綜述在高效液相色譜法（HPLC）中，如何有效、科學(xué)地進行藥物溶液穩(wěn)定性試驗，采用的基本方法是從主峰、雜質(zhì)峰和峰總和等的峰面積的變化或峰面積百分比變化等數(shù)據(jù)指標(biāo)進行分析，并觀察是否有新的雜質(zhì)峰出現(xiàn)，以此來判斷藥物溶液穩(wěn)定性情況。藥物溶液的穩(wěn)定性試驗非常重要，其影響運用此分析方法得到的數(shù)據(jù)、結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和有效性，進而影響評判藥物的質(zhì)量優(yōu)劣。各藥品研發(fā)、生產(chǎn)、檢驗機構(gòu)或企業(yè)須要將其重視起來，并要注意應(yīng)用過程中的注意事項。

【關(guān)鍵詞】溶液穩(wěn)定性試驗;高效液相色譜法;價值研究;

對于藥物溶液穩(wěn)定性試驗來說，它雖然不屬于分析方法學(xué)驗證中八大驗證指標(biāo)（專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、檢測限、定量限、線性、范圍及耐用性）之一，但在實際操作中，分析方法學(xué)驗證過程中，需要考察溶液穩(wěn)定性，因為其特殊的作用和影響。溶液穩(wěn)定性試驗與方法學(xué)驗證中各項指標(biāo)都有密切的關(guān)系，例如：若溶液在精密度驗證時間內(nèi)不穩(wěn)定，其精密度驗證將無法完成，變異系數(shù)（RSD）將超過限值或驗證結(jié)果失去可靠性、有效性。為了保證分析方法的可靠性和有效性，不僅要進行八大驗證指標(biāo)的驗證，也要進行溶液穩(wěn)定性的驗證。本文就針對藥物溶液穩(wěn)定性試驗的展開、過程和結(jié)果判定存在問題和注意事項進行分析和研究。

1.需要進行溶液穩(wěn)定性考察的項目

在高效液相色譜法（HPLC）中，有關(guān)物質(zhì)、溶出度、含量均勻度和含量測定等項目，凡涉及溶液配制完成后，需要等待一段時間進樣或長時間持續(xù)重復(fù)進樣的，均需要進行溶液穩(wěn)定性試驗。溶液的穩(wěn)定性研究用于證明根據(jù)相應(yīng)方法制備的樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液在規(guī)定的儲存條件下在一定時間內(nèi)保持穩(wěn)定。如果方法中沒有規(guī)定有效期，樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液需進行穩(wěn)定性研究。

在此過程中，如果測定的有關(guān)物質(zhì)和含量是同一個溶液（相同成分、相同濃度且相同溶劑配制）的時候，那么只需要對有關(guān)物質(zhì)的溶液進行考察就可以。但需要特別注意含量與有關(guān)物質(zhì)的區(qū)別和指標(biāo)的差異，例如：有關(guān)物質(zhì)重點關(guān)注的是降解雜質(zhì)、有毒雜質(zhì)等雜質(zhì)的變化;含量重點關(guān)注的是主峰面積或目標(biāo)峰面積的穩(wěn)定性。需要全面考慮，不可一概而論。

雖項目相同，但是其配制方法、配制濃度、配制溶劑不同，存放條件不同的，均需要分別進行溶液穩(wěn)定性考察。以驗證樣品溶液或標(biāo)準(zhǔn)品溶液在此配制方法、此溶劑配制此濃度，在此條件下存放一定時間的穩(wěn)定性。

2.需要進行溶液穩(wěn)定性考察的溶液

凡在定量計算中涉及到、應(yīng)用到的數(shù)據(jù)，均應(yīng)驗證其數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、可靠性，即產(chǎn)生此數(shù)據(jù)的溶液的穩(wěn)定性。

例如：在運用外標(biāo)法進行計算時，含量（CX）=CR*（AX/AR），其中CX為供試品溶液濃度;CR為對照品溶液濃度;AX為供試品溶液目標(biāo)峰峰面積;AR為對照品溶液目標(biāo)峰峰面積。由計算公式中應(yīng)用到的AX和AR可知，對供試品和對照品溶液，均需要進行溶液穩(wěn)定性試驗考察。以保證在進樣時間內(nèi)，供試品和對照品產(chǎn)生的目標(biāo)峰峰面積數(shù)據(jù)是準(zhǔn)確、可靠的;不因進樣時間不同，溶液穩(wěn)定性差，導(dǎo)致不同時間測定的峰面積不同，計算得到的結(jié)果不同。同理可知，在運用內(nèi)標(biāo)法時，應(yīng)進行供試品和對照品溶液的穩(wěn)定性考察;在運用加校正因子的主成分自身對照法和不加校正因子的主成分自身對照法時，需進樣主成分對照溶液和樣品溶液的穩(wěn)定性考察;在運用面積歸一化法時，只需對樣品溶液進行穩(wěn)定性考察，計算各峰面積占總峰面積的百分率變化。

很多的原料藥品，它是不含有任何輔料的，所以在這種情況下，對照品溶液和供試品溶液的狀態(tài)是基本相同的。但是如果在制劑的情況下，因為在供試品溶液中含有了一些輔料，導(dǎo)致對照品與供試品溶液的狀態(tài)存在差異性，此為“基質(zhì)效應(yīng)”。所添加的輔料當(dāng)中，可能會有物質(zhì)具有干擾性，可能促進主成分降解、雜質(zhì)增加等。這也是為何要對照品和供試品溶液進行同時驗證的原因。

此外，因部分法定標(biāo)準(zhǔn)品、對照品等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)價格昂貴，有些甚至只有進口才能購買。同時《中國藥典》0291國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通則中強調(diào)，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單元包裝一般供一次使用，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)臨用前配制，否則，使用者應(yīng)證明其適用性。當(dāng)需要配制此類對照品或標(biāo)準(zhǔn)品溶液，保存至2～8℃或其他適宜條件下長期使用時，如30天，應(yīng)證明其適用性，應(yīng)重點考察其溶液穩(wěn)定性。

3.溶液穩(wěn)定性試驗的考察時間選擇

溶液穩(wěn)定性考察的時間范圍，應(yīng)完全包涵、覆蓋日常檢驗分析所需要用到的時間。需要考慮實際情況、特殊情況、多批次大量檢驗情況等，適當(dāng)制定溶液穩(wěn)定性考察的時間范圍;但也不是越長越好，耗費人力物力，需綜合考慮。

考察配制的供試品溶液與對照（品）溶液的穩(wěn)定性至少8小時。8小時穩(wěn)定的，各論中不必規(guī)定溶液配制后的進樣時間;6小時穩(wěn)定但8小時不穩(wěn)定的，各論中應(yīng)規(guī)定溶液配制后的進樣時間;4小時不穩(wěn)定的，各論中應(yīng)規(guī)定臨用新制或配制后立即進樣;2 小時不穩(wěn)定的，應(yīng)考慮更換溶劑[3]。

例如：一般在對有關(guān)物質(zhì)和含量測定的時候，采用HPLC檢測方法，可對其進行將近12個小時的穩(wěn)定性考察。采樣的時間在前期的時候，間隔時間需要短一點，在后期的時候可以適當(dāng)?shù)募哟箝g隔，一般可選點為0小時、2小時、4小時、6小時、8小時和12小時等。

因部分法定標(biāo)準(zhǔn)品、對照品等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)價格昂貴，對法定標(biāo)準(zhǔn)品、對照品溶液考察穩(wěn)定性的，可選0天、3天、7天、15天、30天等。根據(jù)實際情況適當(dāng)調(diào)整實際范圍。

4.溶液穩(wěn)定性試驗的驗證方法和評價指標(biāo)

對于考察時間相對短的（如12小時內(nèi)），可采用同一系統(tǒng)環(huán)境進行，即保持流動相、色譜柱等試驗條件不變，高效液相色譜系統(tǒng)連續(xù)不間斷運行情況下，在各采樣時間點重復(fù)進樣同一溶液。通過采集各采樣時間點目標(biāo)峰面積，進行計算和評價，一般用偏差、相對偏差、置信區(qū)間或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。對于待測成分含量100%的含量測定，一般計算的結(jié)果RSD不超過2.0%，就可說明此藥物溶液的穩(wěn)定性是很好的;反之，則說明穩(wěn)定性是差的。在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低或多成分分析中，可接受范圍可適當(dāng)放寬;同時應(yīng)考慮儀器進樣誤差。

對于考察時間相對較長的（如30天，法定標(biāo)準(zhǔn)品、對照品溶液考察穩(wěn)定性），使用不同系統(tǒng)環(huán)境進行，即在不同時間點，使用重新配制的流動相進行試驗。樣品溶液或標(biāo)準(zhǔn)品溶液依據(jù)方法進行配制，在室溫或其他條件下（如冰箱2 ～8℃ ） 儲存適當(dāng)?shù)臅r間。每個間隔點，用新鮮配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液做對照，測定儲存的樣品溶液或標(biāo)準(zhǔn)品溶液。測定結(jié)果與初始結(jié)果進行比較，符合接受標(biāo)準(zhǔn)便可確認(rèn)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液在規(guī)定的儲存條件下在規(guī)定儲存時間是穩(wěn)定的。通過采集各采樣時間點目標(biāo)峰面積，進行計算和評價，一般用偏差、相對偏差、置信區(qū)間或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。

對于有關(guān)物質(zhì)供試品溶液的穩(wěn)定性考察，應(yīng)重點關(guān)注降解雜質(zhì)、毒性雜質(zhì)等雜質(zhì)的變化情況，還有新雜質(zhì)的產(chǎn)生情況。藥物溶液穩(wěn)定性僅通過對主峰峰面積變化的觀察還是無法實現(xiàn)的，還需要結(jié)合歸一化法觀察主峰峰面積占總峰面積百分比的經(jīng)時變化和每個雜質(zhì)峰面積、雜質(zhì)總峰面積和分別占總峰面積比的變化，并結(jié)合觀察是否有新雜質(zhì)峰產(chǎn)生來實現(xiàn)。主要是因為當(dāng)藥物有微量降解的時候，主峰峰面積是很大的，而且儀器進樣也存在誤差，藥物的微量降解通過主峰峰面積的百分比、各雜質(zhì)峰面積占總峰面積的百分比和雜質(zhì)的產(chǎn)生進行驗證，相對值能非常清晰的表現(xiàn)出來。

5.關(guān)于藥物溶液穩(wěn)定性試驗的注意事項及價值研究

第一，在對藥物溶液進行穩(wěn)定性試驗的時候，還可以對溶液pH值穩(wěn)定性進行考察。正常情況下，pH值測定時溶液的配置方法和限度范圍是有一定參考標(biāo)準(zhǔn)的，如果沒有的話，也可以自行建立相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。在此過程中，建議要考慮主藥所用的溶劑，配制的溶液的pH值是否一直處于穩(wěn)定性狀態(tài)，同時需要做好10分鐘的連續(xù)記錄。如果pH值所呈狀態(tài)不穩(wěn)定，那么想要實現(xiàn)溶液穩(wěn)定還是非常困難的。所以在配制溶液pH值不穩(wěn)定的時候，需要對溶劑進行進一步的篩選，一直到穩(wěn)定為止。

第二，藥物溶液穩(wěn)定性不好，可以從以下兩個方面來實現(xiàn)：其一，根據(jù)主成分的結(jié)構(gòu)，去選擇穩(wěn)定的溶劑。如當(dāng)主藥具有酸性的時候，最好是選擇酸性溶液;其二，如果降解程度還可以接受，也不會給最終的試驗結(jié)果帶來重大影響，則可以在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確注明，需要在溶液配制后及時進樣或進樣時限，避免因為時間問題而影響最終結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

第三，對于制劑的含量測定和溶出度檢查，可以選擇UV測定法來實現(xiàn)，此方法在檢查過程中，只需要在一定時間內(nèi)對相關(guān)溶液的吸收度是否穩(wěn)定進行判斷即可。

第四，在對12個小時后的藥物溶液穩(wěn)定性進行試驗的時候，一定要避免因為溶劑的揮發(fā)給峰面積帶來的影響，應(yīng)有必要的措施防止此類影響。

第五，藥物溶液穩(wěn)定性的好壞，必須質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中進行體現(xiàn)。若需要在溶液配制完成以后立即進樣，在藥物溶液不穩(wěn)定的時候，也沒有及時進樣，那么是會影響到最終測定結(jié)果的，可能導(dǎo)致有關(guān)物質(zhì)超出限度，進而給后續(xù)一系列的環(huán)節(jié)帶來錯誤判斷，如生產(chǎn)、流通以及檢驗等等。藥物溶液穩(wěn)定性考察的驗證是非常重要的，各藥品研發(fā)、生產(chǎn)、檢驗機構(gòu)或企業(yè)和人員提高重視程度。

結(jié)束語

綜上所述，我們詳細(xì)闡述了關(guān)于藥物溶液穩(wěn)定性實驗的驗證方法與價值研究，并通過以上分析我們可以知道藥物溶液穩(wěn)定性實驗的重要性，它的驗證方法和過程是需要研發(fā)和實驗人員高度重視起來的。同時，要知道藥物溶液穩(wěn)定性與試驗的準(zhǔn)確性和最終實驗結(jié)果的科學(xué)性是有非常密切關(guān)系的，只有仔細(xì)分析和研究藥物溶液穩(wěn)定性實驗中存在的問題并解決，才能達到穩(wěn)定性目標(biāo)。

參考文獻：

[1]藥品GMP指南，國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證管理中心 編著，2011.8。

[2]陳娟，佘晨歡，周曄.中藥注射液成品輸液溶媒選擇穩(wěn)定性的研究進展[J].臨床合理用藥雜志，2020，13（1）：3-4.

[3]中國藥典分析檢測技術(shù)指南，國家藥典委員會 編著，2017.06。

[4]趙飛燕，王晟，秦媛媛，等.12種中藥注射劑與4種常用輸液連續(xù)滴注后混合液的穩(wěn)定性考察[J].抗感染藥學(xué)，2020，17（7）：5-6.

[5]陶婉君，李根，郭文玫.注射用重組人干擾素α-1b溶解后活性穩(wěn)定性及霧化粒徑研究[J].中國藥業(yè)，2020，29（7）：3-4.

作者簡介：劉曾飛，男，漢，貫籍：福建省龍巖市武平縣，大學(xué)本科，學(xué)士學(xué)位，執(zhí)業(yè)藥師，現(xiàn)在藥品生產(chǎn)研發(fā)企業(yè)（力品（廈門）藥業(yè)股份有限公司）從事藥品檢驗工作，現(xiàn)任質(zhì)量控制部主管崗位。