趙惠媛 申樹瑞 張海華 張鳳敏 張朝生 霍新鈺

(河北科技師范學院動物科技學院，河北省特色動物種質(zhì)資源挖掘與創(chuàng)新重點實驗室，秦皇島066004)

膽汁酸具有增強脂類代謝、保護動物肝臟、促進幼畜生長等功能[1]，作為一種飼料添加劑，其在養(yǎng)殖業(yè)中的應用較為廣泛。李翠梅等[2]研究表明，在仔豬飼糧中添加膽汁酸可以促進脂肪的消化吸收，降低腹瀉率，加快蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而提高仔豬生長性能，其還在一定程度上改善了機體免疫功能，維護仔豬身體健康。王改玲[3]在研究中利用不同水平的膽汁酸替代基礎(chǔ)飼糧中的麩皮，進行黃羽肉雛雞的飼養(yǎng)試驗，結(jié)果表明在飼糧中添加膽汁酸可顯著提高血清中免疫球蛋白、葡萄糖、總蛋白等生化指標含量，降低料重比，提高生長性能。朱龍等[4]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加適宜的膽汁酸可以提高加州鱸魚增重率，降低料重比，促進其生長；其還可以促進鱸魚體內(nèi)脂肪代謝，降低脂肪沉積，從而達到提高其肌肉品質(zhì)的目的。Su等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加膽固醇和膽汁酸可以影響凡納濱對蝦的生長、脂質(zhì)代謝及免疫應答，還可以影響腸道菌群分布情況，單純添加膽汁酸可以顯著提高對蝦肝胰腺的抗氧化能力。貉作為一種珍貴的毛皮動物，其生產(chǎn)性能的提高可以帶來良好的經(jīng)濟效益。目前關(guān)于膽汁酸對其他經(jīng)濟動物生產(chǎn)性能的影響研究較多，而其對貉生產(chǎn)性能的研究尚鮮見報道。貉在冬毛期主要進行肌肉的增長及脂肪的沉淀，因此需要較高的能量和脂肪水平，在此階段提高其對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收率尤為重要。因此，本試驗以冬毛期烏蘇里貉為研究對象，探究膽汁酸對其生長性能、氮代謝及血清生化指標的影響，為在貉生產(chǎn)實踐過程中合理利用膽汁酸提供理論參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用飼料級膽汁酸由山東某動物保健品有限公司提供。

1.2 試驗動物與分組

選取135日齡、體重相近、健康的雄性烏蘇里貉64只，隨機分為4組，每組16個重復，每個重復1只。各組間貉初重無顯著差異(P>0.05)。

1.3 試驗設(shè)計及飼糧

本試驗采用單因素試驗設(shè)計，4組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0(Ⅰ組)、100(Ⅱ組)、300(Ⅲ組)、500 mg/kg(Ⅳ組)膽汁酸，基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1982)進行配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗預試期5 d，正試期80 d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

續(xù)表1項目 Items含量 Content鈣 Ca0.91總磷 TP0.85賴氨酸 Lys1.42蛋氨酸 Met0.65半胱氨酸 Cys0.35蘇氨酸 Thr0.90色氨酸 Trp0.22粗脂肪 EE9.80

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗前對試驗動物的籠舍及食盆進行清洗及消毒，采用單籠飼養(yǎng)，每日07:30及15:30各飼喂1次，自由飲水。

1.5 消化代謝試驗

消化代謝試驗為期3 d，采用全收糞法，各組分別挑選8只體重相近且健康狀況良好的烏蘇里貉進行試驗，每天記錄采食量。尿液收集桶中提前加入20 mL 10%濃度的硫酸以固氮及防腐，將消化代謝試驗期間收集的全部糞樣和尿樣進行處理：糞樣收集后按照鮮重的5%噴灑10%硫酸，轉(zhuǎn)至65 ℃烘箱中烘干，研磨過40目篩后置于自封袋于-20 ℃冰箱內(nèi)待測；尿樣需混勻并過濾后置于-20 ℃冰箱保存待測。

1.6 測定指標及方法

1.6.1 生長性能測定

正式試驗開始對各組烏蘇里貉稱重作為初始體重，之后每隔20 d進行1次稱重，試驗結(jié)束時貉體重為末重，稱重在早上飼喂前進行并記錄數(shù)據(jù)，計算烏蘇里貉體重的變化及平均日增重和料重比。

1.6.2 飼糧營養(yǎng)物質(zhì)消化率測定

依據(jù)國家標準測定干物質(zhì)(GB/T 6435—2014)、粗脂肪(GB/T 6433—2006)及粗蛋白質(zhì)(GB/T 6432—2018)的含量。相關(guān)指標計算公式[6]如下：

干物質(zhì)采食量(g/d)=(給料量×給料中
干物質(zhì)含量)-(剩料量×剩料中干物質(zhì)含量)；
干物質(zhì)排出量(g/d)=鮮糞重×糞中干物質(zhì)含量；
干物質(zhì)消化率(%)=[(干物質(zhì)采食量-干物質(zhì)
排出量)/干物質(zhì)采食量]×100；
粗脂肪消化率(%)=[(粗脂肪進食量-糞便中
粗脂肪排出量)/粗脂肪進食量]×100；
粗蛋白質(zhì)消化率(%)=[(粗蛋白質(zhì)進食量-
糞便中粗蛋白質(zhì)排出量)/粗蛋白質(zhì)
進食量]×100。

1.6.3 氮代謝指標測定

相關(guān)指標的測定和計算方法參照潘素敏等[6]進行,計算公式如下：

食入氮(g/d)=干物質(zhì)采食量×
飼糧粗蛋白質(zhì)含量/6.25；
尿氮(g/d)=尿體積×尿粗蛋白質(zhì)含量/6.25；
糞氮(g/d)=糞干物質(zhì)量×糞中
粗蛋白質(zhì)含量/6.25；
氮沉積(g/d)=食入氮-尿氮-糞氮；
凈蛋白質(zhì)利用率(%)=(氮沉積/食入氮)×100；
蛋白質(zhì)生物學價值(%)=[氮沉積/
(食入氮-糞氮)]×100。

1.6.4 血清生化指標測定

5.一定法，也就是經(jīng)常所說的排除法與定選法的結(jié)合。針對組合型選擇題，找到最準確的那個選擇肢進行定選或者錯得最離譜的那個選擇肢進行排除。這兩個過程相結(jié)合基本就能確定應選項。

冬毛期試驗結(jié)束時，各組分別隨機選取8只烏蘇里貉并于空腹時進行后肢靜脈取血，待血液凝固后4 000 r/min離心10 min吸取上層血清，置于-80 ℃冰箱保存，使用中生北控生物科技股份有限公司試劑盒，通過VITAL-E全自動生化分析儀測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)活性及總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL)、尿素(UREA)含量。

1.6.5 毛皮品質(zhì)測定

毛皮品質(zhì)測定需綜合比較各組貉皮長及皮板評分。

皮長：將貉取皮刮油后套在楦板上晾干，測量從鼻尖至尾根的長度。

皮板評分：綜合貉毛密度、整齊度、針/絨毛比、光澤度4項指標，采用10分制評分，根據(jù)烏蘇里貉毛皮特點，每項指標最高為2.5分，最低為0分，取總分平均值。

1.6.6 臟器指數(shù)測定

相關(guān)器官的臟器指數(shù)測定參照張新宇等[7]研究方法進行。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Excel 2010進行試驗數(shù)據(jù)處理，SPSS 17.0進行單因素方差分析，LSD檢驗進行多重比較，P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，試驗結(jié)果用“平均值±標準差”表示。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉生長性能的影響

如表2所示，各組之間的初重差異不顯著(P>0.05)，Ⅱ組和Ⅲ組貉的末重、平均日增重及料重比顯著優(yōu)于Ⅰ組(P<0.05)。

表2 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉生長性能的影響

2.2 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

如表3所示，各組間干物質(zhì)采食量、干物質(zhì)排出量、干物質(zhì)及粗蛋白質(zhì)消化率均無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ組的粗脂肪消化率顯著高于Ⅰ組和Ⅳ組(P<0.05)。

表3 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

2.3 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉氮代謝的影響

如表4所示，各組間食入氮、糞氮和尿氮無顯著差異(P>0.05)；隨著飼糧中膽汁酸水平的增加，氮沉積存在先升高后降低的趨勢，其中Ⅱ組最高，各試驗組之間無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ組的蛋白質(zhì)生物學價值最高，各組間無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ組的凈蛋白質(zhì)利用率顯著高于Ⅰ組和Ⅳ組(P<0.05)。

表4 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉氮代謝的影響

2.4 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉血清生化指標的影響

如表5所示，各試驗組的血清尿素、總蛋白及球蛋白含量隨著膽汁酸水平的提高呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，Ⅲ組數(shù)值最大，各組間無顯著差異(P>0.05)；各試驗組間血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶活性及高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ組血清膽固醇含量顯著低于Ⅳ組(P<0.05)，Ⅳ組血清甘油三酯含量顯著高于其余3組(P<0.05)。

表5 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉血清生化指標的影響

2.5 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉毛皮品質(zhì)的影響

如表6所示，試驗各組之間皮長無顯著差異(P>0.05)；Ⅱ組的皮板評分最高，各組之間無顯著差異(P>0.05)。

表6 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉毛皮品質(zhì)的影響

2.6 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉臟器指數(shù)的影響

如表7所示，Ⅰ組的肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)均顯著高于Ⅱ組和Ⅳ組(P<0.05)，極顯著高于Ⅲ組(P<0.01)；Ⅰ組的脾臟指數(shù)顯著高于Ⅱ組和Ⅲ組(P<0.05)。

表7 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉臟器指數(shù)的影響

3 討 論

3.1 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉生長性能的影響

在本試驗條件下，膽汁酸添加水平為300 mg/kg時，公貉末重、平均日增重均最高，料重比最優(yōu)，顯著高于對照組，說明飼糧中添加適量膽汁酸能提高烏蘇里貉生長性能。程偉偉等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼糧中添加500 g/t的膽汁酸，可以顯著提高肉雞生長前期的平均體重。趙盼月[9]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加500 mg/kg膽汁酸時，可通過提高歐洲鰻鱺的腸道消化酶活性、改善腸道菌群的相對豐度及多樣性、促進肝臟膽汁酸產(chǎn)生以及提高脂肪分解酶活性等方式促進蛋白質(zhì)合成，從而提高生長性能。左旭東[10]研究發(fā)現(xiàn)，添加較低水平的膽汁酸時對于母雞平均日增重有促進作用，膽汁酸較高時即產(chǎn)生了抑制作用。高水平的膽汁酸會通過負反饋調(diào)節(jié)的方式抑制法尼醇X受體激活的膽汁酸合成途徑，從而降低機體對葡萄糖的進食量，從而抑制了機體的生長性能[11]。通過研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適量的膽汁酸時，可以適當提高冬毛期烏蘇里貉的生長性能。

3.2 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

本研究中，冬毛期烏蘇里貉主要進行肌肉增加和脂肪沉積，各組之間的干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)消化率無顯著差異。吳明海[12]研究發(fā)現(xiàn)，當在基礎(chǔ)飼糧中添加0.2%的膽汁酸時，對奶牛干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)消化率無顯著影響，與本試驗研究一致。本研究中，當膽汁酸添加水平為100 mg/kg時，冬毛期貉粗脂肪消化率顯著高于Ⅰ組和Ⅳ組，這說明高添加水平的膽汁酸會降低機體對脂肪的消化吸收。Bauer等[13]認為，低水平的膽汁酸可以促進脂肪的消化吸收，當其添加水平較高時，可能會形成某種單分子層結(jié)構(gòu)物質(zhì)，從而阻礙脂肪酶與底物的結(jié)合而產(chǎn)生抑制效果。這說明飼糧中膽汁酸的添加水平需要在一個適宜的范圍。

3.3 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉氮代謝的影響

烏蘇里貉在冬毛期階段可對自身采食的蛋白質(zhì)和能量進行調(diào)節(jié)[7]。本試驗中，各組的食入氮、尿氮、糞氮及氮沉積均無顯著差異；膽汁酸添加水平為100 mg/kg時，蛋白質(zhì)生物學價值較高，此時凈蛋白質(zhì)利用率顯著高于Ⅰ組和Ⅳ組。這表明適量膽汁酸的添加可以提高機體對飼糧中蛋白質(zhì)的利用效率。為了滿足烏蘇里貉在冬毛期對肌肉積累的要求，需要給其供給足量的蛋白質(zhì)，因而提高蛋白質(zhì)的利用率尤為重要。

3.4 飼糧膽汁酸水平對冬毛期烏蘇里貉血清生化指標的影響

血清生化指標可以反映動物機體的生理狀況。血清中葡萄糖、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量是判斷機體健康狀態(tài)的重要指標[14]。本試驗條件下，膽汁酸的添加對于以上指標沒有產(chǎn)生顯著影響。Ⅱ組血清膽固醇含量顯著低于Ⅳ組，飼糧中添加膽汁酸水平為100 mg/kg時，可通過肝載脂蛋白A-Ⅰ的表達，降低膽固醇的含量。膽汁酸可以通過活化法尼酯衍生物X受體(FXR)下調(diào)肝組織固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1(SREBP-1)，進而抑制甘油三酯合成酶的轉(zhuǎn)錄，最終導致血清甘油三酯含量的降低[15]。當膽汁酸添加水平為500 mg/kg時，血清甘油三酯含量顯著高于其余3組，這可能是由于高添加水平的膽汁酸造成機體負反饋調(diào)節(jié)機制被激活，從而導致血清甘油三酯含量的提高。

3.5 飼糧膽汁酸水平對烏蘇里貉毛皮品質(zhì)的影響

烏蘇里貉作為一種經(jīng)濟動物，毛皮品質(zhì)是體現(xiàn)其經(jīng)濟價值的重要指標，其與飼糧營養(yǎng)成分存在很大的相關(guān)性。貉體長和皮長的提升利于獲得較大的毛皮面積，貉毛密度、整齊度、針/絨毛比、光澤度等是衡量毛皮質(zhì)量的重要指標。本試驗條件下，雖然各組的皮長和皮板評分均無顯著差異，但是當膽汁酸添加水平為100和300 mg/kg時，以上各指標較高。這表明在本試驗條件下飼糧中添加適量水平的膽汁酸可以提升烏蘇里貉毛皮品質(zhì)。

3.6 飼糧膽汁酸水平對烏蘇里貉臟器指數(shù)的影響

臟器指數(shù)在一定程度上可以反映出動物器官的發(fā)育情況及功能強弱，間接體現(xiàn)出動物身體的健康狀況[16]。本試驗條件下，飼糧中添加膽汁酸后肝臟、腎臟及脾臟指數(shù)均顯著下降，心臟指數(shù)無顯著變化。研究發(fā)現(xiàn)，適宜水平的膽汁酸可以促進脂肪的消化吸收，當其水平過高時則會危害肝臟[17-18]。膽汁酸可以通過對FXR的調(diào)節(jié)來調(diào)控脂代謝過程，F(xiàn)XR主要表達于肝臟、腎臟、腸道等器官，在本試驗條件下，膽汁酸的持續(xù)添加可能在作用于FXR的同時對其所在器官也造成了損傷，從而造成臟器指數(shù)降低。胡田恩等[18]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼糧中添加膽汁酸可以顯著降低牛蛙臟器指數(shù)。朱龍等[4]也發(fā)現(xiàn)，在加州鱸魚飼料中添加膽汁酸也會導致魚體臟器指數(shù)有所降低。這表明在飼糧中添加膽汁酸時不僅需要水平適宜，添加持續(xù)時間也需進一步考量。

4 結(jié) 論

在本試驗條件下，通過對冬毛期烏蘇里貉生長性能、氮代謝及血清生化指標的測定與分析，綜合各項指標得出，當飼糧中膽汁酸水平為100～300 mg/kg時，冬毛期烏蘇里貉能獲得較好的生長性能。