馬改玲

(登封市人民醫(yī)院 病理科，河南 鄭州 452470)

免疫組化病理技術(shù)是檢驗科重要診斷方法，具有廣泛且深遠的運用，目前已成為檢驗科操作人員工作過程中必不可缺的主要內(nèi)容。免疫組化病理技術(shù)包括固定﹑切片﹑抗原及抗體選擇﹑抗原修復(fù)﹑顯色等諸多步驟，而若其中某一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，則會影響整體檢驗結(jié)果。因此，加強免疫組化病理技術(shù)質(zhì)量控制，對病理檢驗結(jié)果準確性的保障具有重要意義。鑒于此，為驗證質(zhì)量控制對免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量的影響，現(xiàn)對登封市人民醫(yī)院病理科2019年9月至2020年9月收集的120例肺部組織標本展開探討，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年9月至2020年9月登封市人民醫(yī)院病理科120例肺部組織標本，根據(jù)隨機摸球法分成傳統(tǒng)組與質(zhì)控組，每組60例。傳統(tǒng)組男性﹑女性標本各34例﹑26例，肺部疾病類型：肺癌﹑肺結(jié)核﹑慢阻肺各20例；質(zhì)控組男性﹑女性標本各35例﹑25例，肺部疾病類型：肺癌﹑肺結(jié)核﹑慢阻肺各18例﹑21例﹑21例。兩組病理樣本均來自于病理活檢，性別﹑疾病類型等資料具有同質(zhì)性(＞0.05)，具有可比性。

兩組標本檢測過程均由同一批檢驗團隊完成，團隊共包15名成員，在檢驗及臨床質(zhì)控期間，所有成員無離職﹑中途退出情況。

納入標準：患者知曉此次研究，簽署知情同意書；符合肺部相關(guān)疾病的金標準；患者精神狀態(tài)正常，能配合檢驗工作。

排除標準：拒絕參與者；意識模糊或昏迷患者；對檢驗不耐受者；合并高血壓﹑糖尿病等基礎(chǔ)性疾病者；合并血液系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法

傳統(tǒng)組：運用傳統(tǒng)方法制作病理組織切片，方法如下：常規(guī)固定病理組織標本，于組織標本離體約30 min之內(nèi)，將其置于事先準備好的固定液內(nèi)或者實施低溫保存。而后，把組織標本置入10%中性緩沖甲醛溶液(上海遠慕生物科技有限公司)中實施固定處理，時間控制為8～24 h，固體液量需超過組織塊體積的5～10倍。以熱修復(fù)法對經(jīng)固定后的組織標本實施抗原修復(fù)，借助熱效應(yīng)對抗原進行引導(dǎo)，抗原修復(fù)溫度需超過100℃，修復(fù)時間控制為4～10 min，修復(fù)液酸堿值為7.5～8.5。依照操作流程對經(jīng)修復(fù)后的標本實施切片處理。充分脫蠟，均勻增加足量試劑，確保試劑面積集超過切面組織界限0.10～0.35 cm，以避免邊緣效應(yīng)的發(fā)生?？茖W掌控標本于浸液內(nèi)的溫度與烘烤切片時溫度。

質(zhì)控組：實施優(yōu)質(zhì)的免疫組化質(zhì)控管理方案，具體措施如下：

(1)材料選擇的質(zhì)量管理：①組織固定。在標本離體后半小時內(nèi)，低溫保存或剖開內(nèi)固定，固定時間控制在24h以內(nèi)即可，保持固定均勻，抗原保存良好。②選取合適玻片：若遵循價格﹑適用范圍廣的原則，選擇聚賴氨酸硅膠片。在經(jīng)費允許的情況下，選擇陽離子免疫組化玻片能夠取得更為理想的效果。③組織切片：切片厚度均勻且薄，以3～4 μm，保證切片無缺損﹑皺紋及折疊，溫度控制在65～68℃左右，確保脫蠟干凈。切片烘烤禁止反復(fù)烘烤，避免抗原擴散。

(2)試劑質(zhì)控管理：①合理分類。將吉姆薩染色劑﹑DNA﹑RNA等類型的染色劑分類，避免造成使用混亂。②采購﹑配置工作合理管理：合理制定采購方案，并通過正軌渠道購買試劑，確保試劑原材料過關(guān)，避免發(fā)生染色不佳﹑制片不良等情況發(fā)生。

通過信息化的手段，完善科研經(jīng)費的內(nèi)部控制。所有項目經(jīng)費和收支及預(yù)算情況，包括科研經(jīng)費支出情況，均應(yīng)納入科研經(jīng)費管理系統(tǒng)。在論證階段，就將預(yù)算上傳至相關(guān)的管理系統(tǒng)進行審批；經(jīng)費支出時，需選擇對應(yīng)的預(yù)算項目進行支付；項目結(jié)題時，系統(tǒng)可以自行反映項目資金執(zhí)行情況。實施科研經(jīng)費的全面、全過程、全方位的控制。

(3)規(guī)范化切片制作流程：室溫條件下，對標本實施脫蠟﹑切片處理，將其置入3%雙氧水(重慶華東化工有限公司)內(nèi)浸泡約20 min，以磷酸鹽緩沖液(PBS)(上海江萊生物科技有限公司)對切片實施沖洗3次，每隔5 min實施1次沖洗操作，連續(xù)開展15 min。在100 mL燒杯內(nèi)加入700 mL檸檬酸緩沖液(pH=6.0)(上海研謹生物科技有限公司)，給予加熱處理，待溶液沸騰后，添加標記有HBsAg抗體﹑HBcAg抗體﹑Ki-67抗體﹑CK19抗體，加熱約15 min，在每個切片上加入1滴一抗，將其放置于冰箱內(nèi)(40℃)孵育。以PBS(pH=7.4)反復(fù)沖洗切片3次，每隔5 min，連續(xù)沖洗約15 min。室溫條件下，于每個切片上加入1滴二抗，孵育約15 min，再以PBS(pH=7.4)反復(fù)沖洗3次，每隔5 min沖洗1次，操作連續(xù)15 min。把切片置入顯色劑內(nèi)顯色10 min，以蘇木精對切片實施襯染及水洗，然后，以脫水透明中型樹膠給予切片封固處理。

1.3 觀察指標

觀察兩組制片質(zhì)量﹑診斷結(jié)果﹑制片時間與出報告時間。

(1)病理切片質(zhì)量分級標準：優(yōu)：鏡下觀察容易，對比明確，色彩鮮亮，無刀痕，無氣泡，無皺褶，無污染，貼附端正，薄厚均勻平坦，編號清晰；良：鏡下觀察較為容易，對比較為明確，色相較鮮亮，無刀痕，無氣泡，少量皺褶，無污染，貼附較端正，薄厚均勻，編號清晰；差：鏡下觀察困難，對比不明確，色彩不清晰，有刀痕，有氣泡，有皺褶，有污染，貼附不端正，薄厚不均勻，編號不清晰。制片優(yōu)良率=優(yōu)率+良率。

(2)記錄兩組對疾病的確診情況，確診率=確診例數(shù)/總計數(shù)×100%。

(3)統(tǒng)計兩組制片時間﹑出報告時間。

(4)統(tǒng)計兩組不良制片結(jié)果，包括組織脫片﹑染色信號不均﹑背景非特異性染色和染色信號弱，總發(fā)生率=發(fā)生例數(shù)/總例數(shù)×100%。

(5)檢驗人員對兩組檢驗結(jié)果的滿意度評估，從制片質(zhì)量﹑準確性﹑不良事件﹑制片過程(是否簡便﹑完善)四個維度進行評估，每個維度按照0～25分標準，評分越高提示檢驗人員的自我滿意度越高，總分0～100分。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié) 果

2.1 兩組制片質(zhì)量比較

質(zhì)控組制片優(yōu)良率顯著高于傳統(tǒng)組比(＜0.05)。見表1。

表1 兩組制片質(zhì)量比較[n(%)]

2.2 兩組疾病確診率比較

與傳統(tǒng)組比，質(zhì)控組疾病確診率明顯較高(＜0.05)。見表2。

表2 兩組疾病確診率比較[n(%)]

2.3 兩組制片時間、出報告時間比較

兩組制片時間﹑出報告時間相比，均無顯著差異(＞0.05)。見表3。

表3 兩組制片時間、出報告時間比較(± s )

2.4 兩組不良制片結(jié)果發(fā)生率比較

兩組不良制片結(jié)果發(fā)生率比較，質(zhì)控組明顯低于傳統(tǒng)組(＜0.05)。見表4。

表4 兩組不良制片結(jié)果發(fā)生率比較[n(%)]

2.5 檢驗人員滿意度評估評分比較

兩組檢驗人員自我滿意度評分相比，質(zhì)控組評分明顯高于傳統(tǒng)組(＜0.05)。見表5。

表5 檢驗人員滿意度評估評分比較(± s ) 單位：分

3 討 論

免疫組化學技術(shù)又稱免疫細胞化學技術(shù)，為實施病理學診斷的重要手段之一，即指經(jīng)對特異性抗原或抗體于組織細胞原位實施標記，借助抗原抗體免疫反應(yīng)與組織化學顯色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原或抗體進行定位及定性分析。在實際病理診斷過程中，若想獲取理想診斷效果，需首先確保免疫組化制片質(zhì)量能有效滿足檢驗需要。但在免疫組化病理組織操作過程中，易受到諸多因素影響，導(dǎo)致整體診斷質(zhì)量下降。因此，臨床在實施病理制片操作時，應(yīng)嚴格遵守相關(guān)操作準則，規(guī)范化免疫組化流程，以提升免疫組化技術(shù)準確性及疾病確診率。

檢測材料的選擇直接關(guān)系到制片優(yōu)良率，病理組織檢驗選取的病變位置﹑體積不適宜(如：組織壞死或變形﹑薄厚不均等)是取材環(huán)節(jié)常見問題，這將會對最終診斷結(jié)果產(chǎn)生一定影響。為解決這一問題，本次在免疫組化檢測技術(shù)管理中，需做好組織固定﹑組織切片管理工作，同時選擇材料良好的玻片，防止材料選擇不當導(dǎo)致檢測結(jié)果失真。本研究中，質(zhì)控組制片優(yōu)良率和傳統(tǒng)率比，明顯較高(＜0.05)，提示免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量控制的運用能優(yōu)化病理組織標本制片質(zhì)量。

質(zhì)控組不良制片結(jié)果發(fā)生率顯著低于傳統(tǒng)組，檢驗人員自我滿意評分高于傳統(tǒng)組(＜0.05)，由此可見質(zhì)量控制措施的實施，能夠有效提升制片質(zhì)量，減少不良制片結(jié)果，提升檢驗者的自我滿意度?？梢姳狙芯恐破倪x材精準，除材料選擇準確外，制片質(zhì)量提升﹑不良制片結(jié)果還與嚴格把控試劑質(zhì)量有關(guān)。每一種試劑質(zhì)量對病理檢驗結(jié)果存在著直接影響，如果試劑在使用期間發(fā)生揮發(fā)問題，可造成其純度下降，進而影響制片質(zhì)量及病理檢驗結(jié)果。本次在免疫組化檢測期間，對不同試劑分門別類，有效防止檢測期間試劑混用情況的發(fā)生，管理人員還定期更換新的試劑，防止試劑過期。試劑采購﹑配置過程流程化，進而杜絕不合格試劑的使用，保證制片質(zhì)量。

質(zhì)控組疾病確診率顯著高于傳統(tǒng)組(＜0.05)，說明免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量控制的使用可提高疾病確診率。分析原因：制片過程嚴格按照實驗室操作流程逐一實施檢測，控制檢測室溫，染色過程確保核漿分化明顯﹑對比清晰，控制染色試劑劑量，防止染色過紅﹑過藍的情況發(fā)生。為防止染色劑影響到染色效果，及時更新染色實際，根據(jù)不同試劑性質(zhì)，合理控制染色劑調(diào)制時間，有效提升制片準確率，為后期疾病確診率精準化做出貢獻。

質(zhì)控組制片時間﹑出報告時間和傳統(tǒng)組比，差異均無統(tǒng)計學意義(＞0.05)，表示免疫組化病理技術(shù)制片質(zhì)量控制不會造成制片時間和出報告時間的延長，具有較好實踐價值。本研究選取的指標較為豐富，從各個角度分析質(zhì)量控制用于免疫組化病理技術(shù)的效果，有效證實質(zhì)量控制與病理檢驗結(jié)合的臨床價值。本研究選取120例肺部標本，是不同類型疾病的標本，這給免疫組化檢驗的鑒別帶來難度，同時更能證明質(zhì)量控制在檢驗過程中實施的重要意義。除以上優(yōu)勢，本研究也有缺陷，即選取樣本量較少，研究結(jié)果不足以在臨床上大面積推廣應(yīng)用。因此在后續(xù)的研究中，可從增加樣本量這方面入手，不斷深化臨床研究，進而將質(zhì)量控制措施推廣到整個檢驗行業(yè)。

綜上所述，質(zhì)量控制在免疫組化病理技術(shù)制片過程中的運用，可優(yōu)化制片質(zhì)量，提高疾病確診率，提升檢驗人員的自我滿意度，減少制片不良事件的發(fā)生，且對制片時間﹑出報告時間無明顯影響。因此，在臨床檢驗中，不僅要實施免疫組化技術(shù)，還需配合質(zhì)控措施，才能快速提升檢驗質(zhì)量。