摘 要：建立基于PRiME HLB的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Gas Chromatography Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）測(cè)定平菇中9種農(nóng)藥，并評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。樣品經(jīng)乙腈提取，PRiME HLB小柱凈化，采用GC-MS/MS分析，外標(biāo)法定量。在100～500 ng/mL 9種農(nóng)藥線性關(guān)系良好，溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.992 5～0.994 9，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.998 2～0.999 5;9種農(nóng)藥在平菇中均存在不同程度的基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)為0.674 3～1.093 7。治螟磷、乙硫磷、二嗪磷和腐霉利表現(xiàn)出的基質(zhì)效應(yīng)較弱，溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線可以準(zhǔn)確定量，嘧啶磷、滅線磷、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯和三唑酮基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)，需要基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。

關(guān)鍵詞：基質(zhì)效應(yīng);氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法;農(nóng)藥殘留;平菇

Determination of 9 Pesticides in Pleurotus ostreatus by PRiME HLB Combined with Gas Chromatography Tandem Mass Spectrometry and Evaluation of Matrix Effect

LI Bin

（Guiyang Agricultural Product Quality and Safety Supervision， Inspection and Testing Center， Guiyang 550081， China）

Abstract： A gas chromatography tandem mass spectrometry （GC-MS/MS） method based on PRiME HLB was established for the determination of 9 pesticides in Pleurotus ostreatus and the matrix effect was evaluated. Extract sample with acetonitrile， purify it with PRiME HLB column， analyze it by GC-MS/MS， and quantify it with external standard method. At 100～500 ng/mL， the linear relationship of 9 pesticides was good， the correlation coefficient of solvent standard curve was 0.992 5～0.994 9， and the correlation coefficient of matrix standard curve was 0.998 2～0.999 5; The matrix effect of 9 pesticides in Pleurotus ostreatus varied from 0.674 3～1.093 7. The matrix effect of fenitrophos， ethiophos， diazinon and pyomethor is weak， and the solvent standard curve can be accurately quantified. The matrix effect of pyrimidine phosphorus， methomyl， bifenthrin， permethrin and triadimefon is strong， so the matrix standard curve is required for quantification.

Keywords： matrix effect; gas chromatography tandem mass spectrometry; pesticide residues; Pleurotus ostreatus

食用菌味道鮮美，具有保健功能，經(jīng)常食用食用菌可以抑制腫瘤的發(fā)生、減少尿糖改善糖尿病癥，并且還可以延緩衰老，因此在生活中越來越受到人們的喜愛[1-2]。食用菌在生長(zhǎng)過程中容易遭到病蟲害影響使其產(chǎn)量和質(zhì)量下降，有機(jī)磷和菊酯類農(nóng)藥因具有高效殺蟲滅菌和殺蟲譜比較廣的優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)際生產(chǎn)生活中廣泛用于食用菌病蟲害防治[3-5]。但是不科學(xué)使用農(nóng)藥，會(huì)造成食用菌中農(nóng)藥殘留，并通過食物鏈進(jìn)入人體內(nèi)，對(duì)人們的身體健康造成嚴(yán)重的影響和危害[6-9]。因此，食用菌中農(nóng)藥殘留量的監(jiān)督檢測(cè)引起了人們重視。

國(guó)內(nèi)外檢測(cè)農(nóng)藥殘留主要儀器方法有氣相色譜（Gas Chromatography，GC）、液相色譜（Liquid Chro-matography，LC）、液質(zhì)聯(lián)用（Liquid Chromatography-Triple Quadrupole Tandem Mass Spectrometry，LC-MS/MS）[10]和氣質(zhì)聯(lián)用（Gas Chromatography-Triple?Quadrupole Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）[11-13]，其中氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有掃描快速和定性、定量準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，被研究者廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)。在農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理方法中，QuEChERS、液液萃取、固相萃取等廣泛應(yīng)用。與傳統(tǒng)固相萃取相比，通過式固相萃取不需要活化、平衡和洗脫步驟，因此操作更加快速，試劑使用量更少，該方法在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中應(yīng)用比較少，特別在檢測(cè)食用菌中農(nóng)藥殘留鮮有報(bào)道。農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)中，基質(zhì)效應(yīng)是造成分析結(jié)果不準(zhǔn)確的主要因素之一[14-15]。食用菌中基質(zhì)成分復(fù)雜，嚴(yán)重影響農(nóng)藥殘留分析的準(zhǔn)確性。因此，本文使用PRiME HLB小柱的通過式固相萃取方式，結(jié)合氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)食用菌中有機(jī)磷和菊酯進(jìn)行檢測(cè)分析并評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

平菇樣品購(gòu)買于市場(chǎng)，按照NY/T 3304—2018進(jìn)行制樣和保存;平菇空白基質(zhì)樣品經(jīng)國(guó)標(biāo)GB 23200.113—2018分析測(cè)定不含9種目標(biāo)分析物。乙腈和丙酮均為色譜純，購(gòu)自美國(guó)Fisher公司;PRiME HLB小柱（3 cc，150 mg），購(gòu)自美國(guó)Waters公司;乙硫磷、二嗪磷、治螟磷、嘧啶磷、滅線磷、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯、三唑酮和腐霉利，濃度均為1 000 μg/mL，購(gòu)自北京壇墨公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 7890B-7000C三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）;HC-3515高速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）;AX204電子天平（梅特勒-托利多）;Milli-Q純水儀（美國(guó)Millipore公司）。

1.3 樣品前處理

稱取2 g（±0.01）平菇陰性空白樣品，加入10 mL的乙腈，搖勻旋渦震蕩，離心6 000 r/min，離心5 min，取2 mL上清液過PRiME HLB小柱，收集濾液40 ℃氮吹至近干，丙酮定容至1 mL，過0.22 μm濾膜，GC-MS/MS測(cè)定。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)品1.00 mL于10.00 mL容量瓶中，丙酮稀釋濃度為100.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20 ℃避光保存。使用時(shí)取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，丙酮分別配制100 ng/mL、200 ng/mL、300 ng/mL、400 ng/mL和500 ng/mL系列溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液。空白基質(zhì)按照1.3樣品前處理，提取凈化后的溶液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為100 ng/mL、200 ng/mL、300 ng/mL、400 ng/mL和500 ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.5 色譜條件

色譜柱：VF-1701（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;升溫程序：40 ℃保持1 min，然后以40 ℃/min程序升溫至120 ℃，再以5 ℃/min升溫至240 ℃，再以12 ℃/min升溫至300 ℃，保持8 min;再以100 ℃/min降溫至280 ℃，保持1.8 min;載氣：氦氣，純度≥99.999%;流速：1.2 mL/min;進(jìn)樣口溫度：280 ℃;進(jìn)樣量：2 μL;進(jìn)樣方式：脈沖不分流進(jìn)樣;溶劑延遲：9 min。

1.6 質(zhì)譜條件

離子源：電子轟擊（EI）源，電子能量70 eV;離子源溫度：280 ℃;GC-MS接口溫度：280 ℃;其他質(zhì)譜參數(shù)，包括保留時(shí)間、定量與定性離子對(duì)、碰撞能量見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜質(zhì)譜條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)選擇毛細(xì)管色譜柱VF-1701，通過Scan模式掃描0.4 μg/mL濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，比較不同升溫速率對(duì)分離效果的影響，最終確定了合適的升溫程序及各農(nóng)藥的保留時(shí)間。之后選擇各農(nóng)藥的定量定性離子建立MRM離子監(jiān)測(cè)方法，每種農(nóng)藥選擇1個(gè)定量離子和1個(gè)定性離子。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性

按照1.3的方法配制溶劑和基質(zhì)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)GC-MS/MS測(cè)定，以相對(duì)濃度為橫坐標(biāo)，相對(duì)響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。農(nóng)藥在100～500 ng/mL線性關(guān)系良好。9種農(nóng)藥在丙酮溶劑中標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)（r）均≥0.992 5，而在基質(zhì)溶劑中標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)比前者更加接近1，均≥0.998 2。表2說明基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量更加準(zhǔn)確。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)

由于平菇基質(zhì)復(fù)雜，干擾物質(zhì)多，基質(zhì)干擾造成氣相串聯(lián)質(zhì)譜定量分析不準(zhǔn)確，因此需要評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effect，ME），按公式（1）進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見表2。

（1）

式中：A為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率;B為純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線斜率。若ME>1，則表示為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng);若ME<1則表示為基質(zhì)抑制效應(yīng);當(dāng)ME介于0.80～1.20時(shí)，基質(zhì)干擾程度較弱;當(dāng)0.51.5時(shí)，強(qiáng)烈的基質(zhì)干擾。

表2結(jié)果顯示，PRiME HLB小柱凈化后，在平菇中治螟磷為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，ME值在0.80～1.20，基質(zhì)干擾程度較弱;乙硫磷、二嗪磷和腐霉利為基質(zhì)減弱效應(yīng)，ME值在0.80～1.20，基質(zhì)干擾程度較弱;嘧啶磷、滅線磷、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯和三唑酮的ME值<1，并且ME值在0.50～0.80，5種農(nóng)藥表現(xiàn)為中等基質(zhì)抑制效應(yīng)。因此，治螟磷、乙硫磷、二嗪磷和腐霉利可以用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，而嘧啶磷、滅線磷、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯和三唑酮必須用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

3 結(jié)論

PRiME HLB結(jié)合氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法中線性相關(guān)系數(shù)滿足實(shí)驗(yàn)要求，且方法操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)少。本實(shí)驗(yàn)中研究了平菇基質(zhì)中9種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明，基質(zhì)效應(yīng)在平菇中普遍存在，大多數(shù)農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)較明顯，因此在測(cè)定平菇農(nóng)藥殘留實(shí)驗(yàn)過程中考慮基質(zhì)配標(biāo)，消除基質(zhì)干擾，保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。

參考文獻(xiàn)

[1]吳錦文.食用菌的醫(yī)療保健功能和改善食物結(jié)構(gòu)的作用[J].中國(guó)食用菌，2003（4）：9-11.

[2]邢增濤，王南，門殿英，等.簡(jiǎn)述我國(guó)食用菌產(chǎn)品質(zhì)量和食用安全性[J].食用菌，2005（5）：5-6.

[3]董昌金.食用菌栽培常見害蟲及其防治[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（4）：616-617.

[4]陳帥.探究食用菌種植的蟲害防治措施[J].農(nóng)家科技，2020（3）：52.

[5]趙志紅.食用菌栽培常見病蟲害及預(yù)防[J].現(xiàn)代園藝，2014（9）：97.

[6]莊武.農(nóng)藥使用現(xiàn)狀及科學(xué)用藥措施研究[J].農(nóng)業(yè)科技與裝備，2021（3）：69-70.

[7]付廣云，韓長(zhǎng)秀.有機(jī)磷農(nóng)藥及其危害[J].化學(xué)教育，2005（1）：9-10.

[8]常娜，袁聚祥.有機(jī)氯農(nóng)藥對(duì)人體健康的危害及其研究進(jìn)展[J].華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008（2）：174-176.

[9]李蓓茜，王安.擬除蟲菊酯殺蟲劑的毒性和健康危害研究進(jìn)展[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2015，10（6）：29-34.

[10]萬鄭凱，何娟，康長(zhǎng)安，等.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用在農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面的應(yīng)用進(jìn)展[J].分析測(cè)試技術(shù)與儀器，2006（1）：51-58.

[11]FILLION J，SAUV? F，SELWYN J.Multiresidue method for the determination of residues of 251 pesticides in fruits and vegetables by gas chromatography/mass spectrometry and liquid chromatography with fluorescence detection[J].J AOAC Int，2000，83（3）：698-713.

[12]LEHOTAY SJ，MASTOVSKA K，YUN S J.Evaluation of two fast and easy methods for pesticide residue analysis in fatty food matrixes[J]. J AOAC Int，2005，88（2）：630-638.

[13]李云飛，彭云霞，張承聰，等，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定果蔬中12種農(nóng)藥殘留量[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004（增刊1）：176-180.

[14]陳鵬.氣質(zhì)聯(lián)用和液質(zhì)聯(lián)用中基質(zhì)效應(yīng)研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2020，32（4）：67-72.

[15]熊瀟垚，任崗，董照鋒，等.QuEChERS-氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定果蔬菌類中10種農(nóng)藥殘留及基質(zhì)效應(yīng)研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2021，33（5）：90-95.

作者簡(jiǎn)介：李斌（1972—），男，云南姚安人，本科，農(nóng)藝師。研究方向：農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)、農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)推廣。