智麗慧

摘 要：目的：建立一種高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀篩查奶粉中倍他米松殘留量的檢測方法。方法：基于《牛奶和奶粉中地塞米松殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 22978—2008）的前處理步驟，樣品使用乙腈為溶劑減壓濃縮提取，C18固相萃取小柱凈化氮?dú)鉂饪s，使用外標(biāo)法定量，采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析。結(jié)果：選擇4組陰性基質(zhì)樣品，分別以乙腈和乙酸乙酯為提取劑提取試樣中倍他米松，使用乙腈為提取劑時(shí)，倍他米松的回收率結(jié)果符合要求;倍他米松在0.2～10.0 μg/L線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r大于0.999，方法檢出限為2 μg/kg，定量限為5 μg/kg，加標(biāo)回收試驗(yàn)回收率為65.0%～86.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.29%～13.76%，應(yīng)用該方法檢測20批奶粉樣品均未檢出倍他米松。結(jié)論：本文提供了一種奶粉中倍他米松殘留量的檢測方法，適用于奶粉中倍他米松的快速篩查。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;奶粉;倍他米松;快速篩查

Determination of Betamethasone Residues in Milk Powder by High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

ZHI Lihui

（Shanghai Milkground Food Technology Co.， Ltd.， Shanghai 201506，China）

Abstract： Objective： To establish a method for screening betamethasone residues in milk powder by high performance liquid chromatography-mass spectrometry. Method： Based on the pretreatment steps of GB/T 22978—2008， the samples were concentrated and extracted under reduced pressure with acetonitrile as solvent， purified with C18 solid phase extraction column and concentrated with nitrogen， quantified by external standard method， and analyzed by high performance liquid chromatography-mass spectrometry. Result： Four groups of negative matrix samples were selected and betamethasone was extracted with acetonitrile and ethyl acetate respectively. When acetonitrile was used as the extraction agent， the recovery of betamethasone met the requirements; Betamethasone is 0.2～10.0 μg/L， The linear relationship is good， the correlation coefficient r is greater than 0.999， and the detection limit of the method is 2 μg/kg， limit of quantitation 5 μg/kg， the recovery rate of spiked recovery test is 65.0%～86.0%， and the relative standard deviation is 3.29%～13.76%. Betamethasone was not detected in 20 batches of milk powder samples by this method. Conclusion： This paper provides a method for the determination of betamethasone residues in milk powder， which is suitable for the rapid screening of betamethasone in milk powder.

Keywords： high performance liquid chromatography-mass spectrometry; milk powder; betamethasone; rapid screening

糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoids，GCs）是一類甾體激素，又名“腎上腺皮質(zhì)激素”，能夠調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)等成分的合成和代謝，臨床上廣泛應(yīng)用于治療皮膚過敏性及炎癥性疾病，且糖皮質(zhì)激素能提高飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)動物生長而被用于動物養(yǎng)殖[1]。倍他米松作為糖皮質(zhì)激素重要成員，具有消炎、抗病毒、促進(jìn)泌乳等多種功效，倍他米松為地塞米松的同分異構(gòu)體，作用與用途同醋酸地塞米松，其鈉水潴留作用及劑量都比后者小，在奶牛養(yǎng)殖業(yè)中被大量使用[2]。

質(zhì)譜技術(shù)起源于19世紀(jì)英國學(xué)者湯普森發(fā)明的質(zhì)譜儀，當(dāng)時(shí)是用于檢測分子質(zhì)量差異，分辨率較低;隨著質(zhì)譜儀技術(shù)的提升，分辨率逐步提高，當(dāng)高效液相色譜技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用后，既有高效液相色譜技術(shù)對復(fù)雜化合物的良好分離能力，又綜合了高分辨率質(zhì)譜對化合物的準(zhǔn)確定性和定量，還可在很大程度上縮減分析時(shí)間。高效液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)優(yōu)勢明顯，可實(shí)現(xiàn)多種化合物的同時(shí)測定，檢測結(jié)果的靈敏度高、準(zhǔn)確性好，廣泛應(yīng)用于食品、藥品等檢測領(lǐng)域[3]。

在食品檢測行業(yè)中，高效液相色譜-質(zhì)譜法可以準(zhǔn)確高效地測定乳制品中三聚氰胺含量、農(nóng)藥殘留量、獸藥殘留量、食品添加劑含量和毒素含量，其檢測速度快，定性、定量分析的準(zhǔn)確性高，該方法補(bǔ)齊了常規(guī)檢測方法的短板，在食品安全檢測中的應(yīng)用越來越廣，但還有很大的技術(shù)應(yīng)用空間。目前，倍他米松的主要檢測方法是農(nóng)業(yè)部1031號公告-2-2008《動物源性食品中糖皮質(zhì)激素類藥物多殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[4]。多組分同時(shí)處理時(shí)，倍他米松回收率偏低，本研究通過優(yōu)化前處理方法、色譜條件、改進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行快速篩查，以期對乳制品中倍他米松篩查和確證提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

購買不同到貨批次的全脂奶粉20批;倍他米松標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CAS：378-44-9，純度大于等于99%）;

甲醇、甲酸、乙腈，均為色譜純;試驗(yàn)用水為

GB/T 6682—2008規(guī)定的一級水。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters TQD型串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀，配Waters高效液相色譜儀、自動進(jìn)樣器、電噴霧離子源;Oasis HLB cartridge固相柱（3 mL/60 mg）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

使用直接稱量方式稱取1 g奶粉樣品（精確到

0.01 g）于50 mL具塞離心管中，再向上述具塞離心管中加入約45 ℃ 10 mL水，漩渦1 min使奶粉樣品完全溶解成勻液。再向具塞離心管中加入20 mL乙腈，渦旋混勻1 min，以≥5 000 r/min離心10 min，使用一次性移液管取上清液至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，將蒸發(fā)瓶安裝在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，使用45 ℃水浴減壓蒸發(fā)，將上清液濃縮至體積小于5 mL。再將濃縮后的提取液全部轉(zhuǎn)移至經(jīng)活化的C18固相萃取柱，用5 mL水少量多次洗滌旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶和萃取柱，萃取柱在負(fù)壓下減壓抽干1 min，流出液全部棄去。使用5 mL乙腈作為洗脫劑，以≤3 mL/min流速進(jìn)行洗脫，使用玻璃試管收集洗脫液，將玻璃試管置于45 ℃水浴中用氮?dú)獯蹈?，再向玻璃試管中加?.50 mL流動相，漩渦溶解殘?jiān)?，?.22 μm的濾膜過濾待測定。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

倍他米松標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：稱?。?00±1）mg倍他米松標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇進(jìn)行溶解，分少量多次將溶解液體轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶并定容，配成濃度為

1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。倍他米松標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液：吸取適量的倍他米松標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇配成1 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液。

倍他米松標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別吸取20 μL、

50 μL、0.2 mL、0.5 mL、1 mL倍他米松標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液，用甲醇定容至100 mL，配制成濃度為

0.2 μg/L、0.5 μg/L、2.0 μg/L、5.0 μg/L和10.0 μg/L的系列工作液

1.3.3 儀器條件

（1）液相色譜條件。色譜柱：XBridge C18色譜柱（150 mm×2.1 mm，2.5 μm）;流動相：乙腈+0.1%甲酸溶液（1+1）;流速：200 μL/min;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣量：20 μL。

（2）質(zhì)譜條件。電噴霧離子源ESI+，毛細(xì)管電壓2.6 kV，離子源溫度110 ℃，錐孔反吹氣流量35 L/h，脫溶劑氣溫度300 ℃，脫溶劑氣流量750 L/h。第一重四極桿和第二重四極桿的低端分辨率及高端分辨率均為15。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的優(yōu)化

本研究比較以乙腈和乙酸乙酯為提取劑提取試樣中倍他米松。選擇4組陰性基質(zhì)樣品，分別向上述4組樣品中添加2 μL、3 μL、5 μL和10 μL標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液制備成濃度為2 μg/kg、3 μg/kg、5 μg/kg和10 μg/kg的加標(biāo)樣品，每組2個(gè)平行，分別使用乙腈和乙酸乙酯為提取劑，提取結(jié)果見表1。結(jié)果表明以乙酸乙酯為提取劑，倍他米松回收率偏低，無法達(dá)到《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》

（GB/T 27404—2008）附錄F回收率范圍的要求[5];以乙腈為提取劑進(jìn)行提取時(shí)，由于乙腈具有使蛋白質(zhì)變性的特性，提取效果好，回收率結(jié)果符合要求。故采用乙腈作為提取劑，能夠有效去除蛋白質(zhì)等，有利于下一步的凈化與濃縮。

2.2 線性關(guān)系

按儀器工作條件及優(yōu)化后條件對倍他米松標(biāo)準(zhǔn)系列工作液進(jìn)行測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。倍他米松在0.2～10.0 μg/L線性良好，線性回歸方程為y=1.336x-1.179，相關(guān)系數(shù)為0.999 7。

2.3 方法檢出限

采用經(jīng)確認(rèn)為陰性的基質(zhì)樣品，添加一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品按照1.3方法處理并測定，以大于3倍和10倍信噪比時(shí)對應(yīng)的質(zhì)量濃度計(jì)算檢出限和定量限。倍他米松的檢出限為2 μg/kg，定量限為5 μg/kg。

2.4 準(zhǔn)確性試驗(yàn)

分別稱取5份奶粉樣本，1份作為試樣本底，分別在另外4份中添加不同量倍他米松標(biāo)準(zhǔn)溶液，制備成理論添加量分別為2 μg/kg、3 μg/kg、5 μg/kg和10 μg/kg的加標(biāo)樣品，對5份試樣測定，方法的平均回收率為65.0%～86.0%，方法回收率在60%以上，可滿足檢測要求，結(jié)果見表2。

2.5 精密度試驗(yàn)

選取倍他米松未檢出的陰性試樣，按照1.3.1方法稱取24份試樣，分為4組，每組6個(gè)平行，每組添加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.29%～13.76%，方法的精密度在15%以內(nèi)，可滿足檢測要求，結(jié)果見表3。

2.6 實(shí)際樣品的測定

對20批奶粉樣品用優(yōu)化后方法進(jìn)行檢測，同時(shí)附帶加標(biāo)回收的質(zhì)量控制方式，在回收率符合的情況下，奶粉試樣結(jié)果均未檢出。

3 結(jié)論與討論

本文建立了奶粉中倍他米松的高效液相色譜-質(zhì)譜檢測法?；凇杜Ｄ毯湍谭壑械厝姿蓺埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 22978—2008）[6]的前處理步驟，該方法優(yōu)化了前處理?xiàng)l件，使用乙腈作為提取劑，檢出限和定量限均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，曲線線性表現(xiàn)良好，回收率和精密度也均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，同時(shí)應(yīng)用奶粉實(shí)際樣品檢測過程未發(fā)現(xiàn)異常。因此，該方法可適用于奶粉中倍他米松的篩查測定;另外該方法應(yīng)用的提取劑與測定奶粉中地塞米松殘留量的提取劑一致，可進(jìn)一步擴(kuò)展應(yīng)用奶粉中地塞米松和倍他米松的同時(shí)

測定。

參考文獻(xiàn)

[1]張秋云，楊洪生，沈美芳，等.超高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查草魚中39種糖皮質(zhì)激素殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2020，11（15）：5007-5012.

[2]夏曦，李曉薇，丁雙陽，等.液相色譜–高分辨質(zhì)譜在獸藥殘留分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2011，32（6）：

333-340.

[3]徐津津，陳文武.高效液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)在食安全檢測中的應(yīng)用研究[J].華東科技（綜合），2018（1）：41.

[4]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部1031號公告-2-2008動物源性食品中糖皮質(zhì)激素類藥物多殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[EB/OL].（2008-05-09）[2022-02-12].http：//down.foodmate.net/standard/sort/9/17442.html.

[5]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測：GB/T 27404—2008[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[6]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.牛奶和奶粉中地塞米松殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法：GB/T 22978—2008[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.