潘秋璐 吳雪銘 蘇群英 黃炳臣 龍喜帶 黃云美 黃小英

【摘要】 目的 探討肺腺癌中驅動蛋白20A（kinesin family member 20A， KIF20A）的表達情況與Ki67的相關性及其臨床意義。

方法 利用免疫組化法檢測KIF20A、Ki67在66例肺腺癌組織及相應癌旁組織中的表達情況;運用統(tǒng)計學方法分析KIF20A在肺腺癌中的表達與臨床病理特征及Ki67的關系。生存分析使用Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗。

結果 KIF20A在肺腺癌組織中表達明顯高于癌旁組織;KIF20A表達與肺腺癌分化程度、臨床分期、淋巴結轉移、氣道播散有關（P<0.05）。KIF20A與Ki67在肺腺癌中表達有關（χ2=4.321，φ=0.248，P=0.038）。KIF20A表達與患者預后有關，其高表達患者的總生存時間顯著低于KIF20A低表達患者（P<0.05）。

結論 KIF20A在肺腺癌中表達上調，其高表達提示患者預后不良，聯合Ki67檢測可進一步提高肺腺癌診斷和預后評估。

【關鍵詞】 肺腺癌;KIF20A;Ki67;臨床病理特征;預后

中圖分類號：R734.2?? 文獻標志碼：A?? DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.04.004

Expression of KIF20A in lung adenocarcinoma and its relationship with Ki67 expression

PAN Qiulu1， WU Xueming2， SU Qunying2， HUANG Bingchen2， LONG Xidai2， HUANG Yunmei2， HUANG Xiaoying1， 3▲

（1.Graduate School， Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China; 2. Department of Pathology，

Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China; 3. Department of Pathology，

Maternal and Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region， Nanning 530000， Guangxi， China）

【Abstract】 Objective To investigate correlation between the expression of kinesin family member 20A （KIF20A） and Ki67 in lung adenocarcinoma and its clinical significance.

Methods The expressions of KIF20A and Ki67 in 66 cases of lung adenocarcinoma and corresponding adjacent tissues were detected by immunohistochemistry. Statistical methods were used to analyze the expression and clinicopathological features of KIF20A in lung adenocarcinoma and its correlation with Ki67. And survival analysis was performed by Kaplan-Meier method and Log-rank test.

Results The expression of KIF20A in lung adenocarcinoma was significantly higher than that in adjacent tissues. The expression of KIF20A was related to the degree of differentiation， clinical stage， lymph node metastasis and airway spread of lung adenocarcinoma（P<0.05）. KIF20A was associated with Ki67 expression in lung adenocarcinoma （χ2=4.321， φ=0.248， P=0.038）. The expression of KIF20A was related to the prognosis of patients， and the overall survival time of patients with high expression of KIF20A was significantly lower than that of patients with low expression of KIF20A （P<0.05）.

Conclusion KIF20A is up-regulated in lung adenocarcinoma， and its high expression suggests poor prognosis， while combining with Ki67 detection， it can further improve the diagnosis and prognosis evaluation of lung adenocarcinoma.

【Key words】 lung adenocarcinoma; KIF20A; Ki67; clinical pathological characteristics; prognosis

肺癌是呼吸系統(tǒng)腫瘤中最常見的惡性腫瘤，其每年患病人數和死亡人數呈上升趨勢，給人類健康和生命帶來巨大的威脅。非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常見的肺癌組織學類型。NSCLC又包括肺腺癌、肺鱗癌、肺腺鱗癌等，以肺腺癌最常見。肺腺癌早期無明顯臨床癥狀且易發(fā)生轉移，治療時多為進展期，失去最佳治療機會，5年生存率低[1]。因此，尋找有效的新型生物標志物對肺腺癌的診斷和預后評估十分重要。驅動蛋白20A（kinesin family member 20A， KIF20A）主要參與紡錘體形成和細胞分裂等有絲分裂過程，從而維持細胞的正常形態(tài)和功能，在癌癥進展中起重要作用[2]。近年來相關報道顯示KIF20A在大多數惡性腫瘤中表達異常，如鼻咽癌[3]、膀胱癌[4]等。核增殖抗原Ki67在臨床上常被視為腫瘤的增殖活性及惡性程度的評估指標之一。國內外有關KIF20A在肺腺癌中表達及其與Ki67的相關性研究目前尚未見報道。本研究通過免疫組化方法檢測KIF20A在肺腺癌中的表達情況，并分析其與Ki67的關系，旨在為肺腺癌的診療與預后評估提供新的腫瘤標志物。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2018年1月～2020年6月期間右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院收治的肺腺癌手術切除標本66例及相對應的癌旁組織（>1 cm）和患者相關臨床病理資料。

1.2 隨訪

所有患者均通過電話或查找病例進行術后總生存時間（overall survival， OS）隨訪工作，隨訪內容為患者術后死亡時間，以月為單位并記錄相應的生存狀況。以肺腺癌確診時間為起點，觀察終止時間為患者死亡日期或腫瘤復發(fā)轉移或失訪，隨訪截止時間為2020年6月。隨訪時間范圍為1～28個月，中位生存期為7個月，其中失訪患者有9例，15例死亡，42例存活。66例肺腺癌患者中，男性38例，女性28例，年齡范圍30～76歲，平均（54.08±9.58）歲;原位腺癌0例，微浸潤性腺癌0例。納入標準：在右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院首次確診為原發(fā)性浸潤性非黏液型肺腺癌;相對完整的臨床病理資料;手術根治切除標本。排除標準：臨床病理資料不完整;肺腺癌其他類型如浸潤性黏液腺癌、腸型腺癌等患者;接受過其他相關治療;肺腺癌復發(fā)或其他部位原發(fā)腫瘤轉移到肺部者。根據2021版中華醫(yī)學會腫瘤學分會肺癌臨床診療指南，浸潤性非黏液型肺腺癌包括貼壁型、腺泡型、乳頭型、微乳頭型和實體型5種組織學亞型，后兩種亞型及出現篩狀結構或復雜腺體結構（腺體融合或散在腫瘤細胞浸潤）又稱為高級別結構。然后根據鏡下占比最高的組織學亞型以及高級別結構的占比進行分級，具體如下：貼壁型生長方式占優(yōu)勢伴或不伴小于20%高級別結構則為高分化;腺泡型或乳頭狀型生長方式占優(yōu)勢伴或不伴小于20%高級別成分則為中分化;高級別結構超過20%時則為低分化[5]。

1.3 方法

采用免疫組織化學法（Envision法）檢測KIF20A、Ki67表達情況。將納入標準的石蠟組織常規(guī)切片、烤片、脫蠟、水化，然后用EDTA緩沖液水煮法修復20 min后，冷卻至室溫，蒸餾水沖洗，滴加3%內源性過氧化物酶阻斷劑，孵育10 min，PBS沖洗，加入10%山羊血清，室溫孵育10 min，PBS清洗，分別滴加兔抗人KIF20A多克隆抗體（1∶100，bs-7750R，北京博奧森生物技術有限公司）、即用型抗體Ki67（福州邁新生物技術有限公司），37℃恒溫冰箱孵育1 h，滴加二抗，室溫孵育15 min，PBS沖洗，滴加DAB顯色劑，蘇木素復染，分化、返藍、脫水、透明、封片后顯微鏡下觀察。所有操作步驟均嚴格按照說明書進行。陰性對照為PBS代替一抗。

1.4 結果判讀

KIF20A陽性為腫瘤細胞胞漿著色，Ki67陽性為腫瘤細胞胞核著色。以腫瘤細胞胞漿或胞核染色強度計分：0分不著色;1分淡黃色;2分棕黃色;3分棕褐色。任取10個高倍視野（HPF），按陽性表達的腫瘤細胞占所有腫瘤細胞百分比計分：0分為陰性;1分為陽性細胞數≤25%;2分為26%～50%;3分為51%～75%;4分為陽性腫瘤細胞≥76%。最后將腫瘤細胞染色評分與陽性細胞占比評分的乘積作為每張切片的總評分：<6分為低表達，≥6分為高表達。Ki67陽性表達≥25%為高表達，<25%為低表達。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數據進行統(tǒng)計分析。癌組織與癌旁組織間KIF20A表達情況的比較使用配對卡方檢驗，KIF20A表達情況與臨床病理特征的關系采用卡方檢驗或連續(xù)性校正卡方檢驗。KIF20A與Ki67的關聯性分析通過配對卡方檢驗計算列聯系數（φ）。生存分析使用Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗。檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。

2 結? 果

2.1 肺腺癌與癌旁組織間KIF20A的表達情況

KIF20A在癌旁組織的表達明顯低于在肺腺癌組織中的表達，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。見圖1、表1。

2.2 KIF20A與臨床病理特征的關系

KIF20A蛋白表達在不同的性別、年齡、胸膜侵犯、腫瘤大小、遠處轉移及吸煙史的肺腺癌患者間的表達，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但其表達與腫瘤分化程度、臨床分期、淋巴結轉移及氣道播散有關（P<0.05）。見表2。

2.3 肺腺癌組織中KIF20A表達與Ki67表達的相關性

66例肺腺癌患者KIF20A表達與Ki67表達間的差異有統(tǒng)計學意義，兩者間存在相關性（χ2=4.321，φ=0.248，P=0.038）。見表3。

2.4 KIF20A與66例肺腺癌患者預后之間的關系

生存分析結果顯示，KIF20A低表達患者中位生存期為7.5個月，高表達患者中位生存期為7.0個月，KIF20A高表達肺腺癌患者OS明顯低于低表達肺腺癌患者（χ2=4.881，P=0.027），說明KIF20A與患者預后有關，其高表達意味預后不良。見圖2。

3 討? 論

KIF家族最早于1982年在魷魚細胞的高爾基體中被發(fā)現，隨后被廣泛報道。KIF20A是驅動蛋白超家族成員之一，又稱MKLP2，定位于5q31，編碼890個氨基酸蛋白質。它的本質是一種運動蛋白，與微管相關，具有ATP酶活性，主要參與有絲分裂、紡錘體形成、細胞內囊泡運輸等生物學活動，在腫瘤進展中發(fā)揮重要作用，比如髓母細胞癌[6]、腎細胞癌[7]等。研究發(fā)現KIF20A在癌旁肝組織中不表達或者低表達，而在肝癌細胞中的表達異常增高。進一步的體外實驗結果表明，沉默敲除肝癌細胞中KIF20A基因后，肝癌細胞的增殖能力明顯降低甚至受到抑制，提示KIF20A基因在肝癌進展中具有促癌作用[8]。

本研究結果顯示，66例肺腺癌患者中，KIF20A在癌組織中的表達明顯高于癌旁肺組織，并且在低分化的晚期肺腺癌患者中KIF20A表達明顯高于分化程度較高的早期肺腺癌患者，伴淋巴結轉移的患者KIF20A表達顯著高于不伴淋巴結轉移患者，說明KIF20A在肺腺癌進展中起促癌作用及具有增強腫瘤的侵襲性和遷移能力，具體作用機制還需進一步實驗來解釋。生存分析顯示KIF20A高表達患者OS明顯低于KIF20A低表達患者，提示高表達患者預后不良，與文獻報道結果相符[9]。氣道播散（spread through air spaces， STAS）于2015年由世界衛(wèi)生組織提出并認為是肺腺癌的一種新的侵襲方式，即腫瘤細胞存在于腫瘤邊緣以外的肺實質的肺泡內[10]。既往研究證實氣道播散與肺腺癌的分化程度密切相關，分化程度越低越易出現;相對于肺腺癌其他組織學亞型而言，氣道播散在微乳頭型及實體型肺腺癌中更易出現[11]。本研究中，有11例伴氣道播散，其中有9例KIF20A為高表達，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.047），尚可以認為KIF20A高表達的肺腺癌患者易出現氣道播散。

核增殖抗原Ki67是臨床上運用最為廣泛的反映腫瘤惡性程度和預后的標志物。Ki67在正常組織中不表達或低表達，而在腫瘤中表達異常增高。李宗榮[12]研究表明敲低KIF20A會促進肺腺癌細胞凋亡且使細胞周期停滯于G1期，這提示KIF20A在肺腺癌進展中能抑制腫瘤細胞凋亡從而起促癌作用，促進腫瘤細胞分裂。本研究中，KIF20A在肺腺癌中的表達與Ki67表達有關，說明Ki67增殖指數越高，則KIF20A表達越強，進一步證實了KIF20A在肺腺癌進展中具有促進癌細胞增殖的作用。Ki67蛋白在細胞分裂周期中發(fā)揮重要作用，細胞分裂越活躍，Ki67表達越強，所以推測KIF20A可能通過干擾細胞周期從而加速細胞分裂，最終導致肺腺癌的發(fā)生，具體機制需進一步實驗加以驗證。此外，本研究入組的66例肺腺癌患者首次確診時均為浸潤性非黏液型，故無法探討KIF20A、Ki67與肺腺癌前驅性病變如原位腺癌、微浸潤性腺癌及與浸潤型黏液型腺癌、腸型腺癌等肺腺癌其他組織學類型的關系，有待后期加大樣本量進一步驗證。

綜上所述，KIF20A在肺腺癌組織中高度表達，且與Ki67表達密切相關，兩者聯合檢測將能有效提高肺腺癌的診斷率及預后評估;KIF20A高表達提示肺腺癌患者預后不良，可作為預測肺腺癌預后的重要標志物，為肺腺癌患者的診斷及預后評估提供參考依據。

參 考 文 獻

[1]? 武二偉，司志剛，王琰，等.局部晚期非小細胞肺癌同步放化療與序貫放化療療效分析[J].右江民族醫(yī)學院學報，2019，41（4）：404-406.

[2]? 劉紀營，吳妍妍，趙杰，等.KIF20A對膠質瘤細胞增殖、遷移和侵襲、凋亡及細胞周期分布的影響[J].現代腫瘤醫(yī)學，2020，28（17）：2943-2947.

[3]? LIU S L，LIN H X，QIU F，et al.Overexpression of kinesin family member 20A correlates with disease progression and poor prognosis in human nasopharyngeal cancer：a retrospective analysis of 105 patients[J].PLoS One，2017，12（1）：e0169280.

[4]? SHEN T Y，YANG L，ZHANG Z，et al.KIF20A affects the prognosis of bladder cancer by promoting the proliferation and metastasis of bladder cancer cells[J].Dis Markers，2019，2019：4863182.

[5]? 中華醫(yī)學會腫瘤學分會，中華醫(yī)學會雜志社.中華醫(yī)學會腫瘤學分會肺癌臨床診療指南（2021版）[J].中華腫瘤雜志，2021，43（6）：591-621.

[6]? QIU R X，WU J，GUDENAS B，et al.Depletion of kinesin motor KIF20A to target cell fate control suppresses medulloblastoma tumour growth[J].Commun Biol，2021，4（1）：552.

[7]? MA X W，WANG X Q，DONG Q，et al.Inhibition of KIF20A by transcription factor IRF6 affects the progression of renal clear cell carcinoma[J].Cancer Cell Int，2021，21（1）：246.

[8]? LI H，ZHANG W J，SUN X Y，et al.Overexpression of kinesin family member 20A is associated with unfavorable clinical outcome and tumor progression in epithelial ovarian cancer[J].Cancer Manag Res，2018，10：3433-3450.

[9]? XIE F，HE C Y，GAO S，et al.KIF20A silence inhibits the migration，invasion and proliferation of non-small cell lung cancer and regulates the JNK pathway[J].Clin Exp Pharmacol Physiol，2020，47（1）：135-142.

[10]? EGUCHI T，KAMEDA K，LU S H，et al.Lobectomy is associated with better outcomes than sublobar resection in spread through air spaces （STAS）-positive T1 lung adenocarcinoma：a propensity score-matched analysis[J].J Thorac Oncol，2019，14（1）：87-98.

[11]? 陳亮，王喆歆，姚烽.ⅠA期肺腺癌氣道播散臨床病理因素分析[J].上海交通大學學報（醫(yī)學版），2020，40（7）：958-961.

[12]? 李宗榮.驅動蛋白20A在肺腺癌中的表達及促癌機制研究[D].武漢：武漢大學，2020.

（收稿日期：2021-12-14 修回日期：2022-03-28）

（編輯：潘明志）