王月娥 牛艷慧 鐘鎮(zhèn)濤 胡文革 李楊

摘要：為了探究艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌多樣性及該地區(qū)黏細菌菌株對病原微生物的拮抗作用。通過傳統(tǒng)的黏細菌分離方法對采自艾比湖濕地15份樣品中的黏細菌進行分離，結(jié)合形態(tài)學觀察、生理生化特征和16S rDNA序列分析，確定菌株的分類地位，并通過平板對峙法分析其抗菌活性。試驗結(jié)果表明，從采集的15份樣品中共分離純化出22株疑似菌株，經(jīng)鑒定將其歸類為黏球菌屬，其中6株為橙色黏球菌（Myxococcus fulvus），14株為變綠黏球菌（M. virescens），2株只鑒定到屬（Myxococcus sp.）。抗菌活性分析顯示，22株黏細菌表現(xiàn)出不同的抗菌活性，其中14株可以抑制金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的生長，14株黏細菌均可抑制沙門氏菌（Salmonella typhimurium）和大腸桿菌（Escherichia coli）的生長，15株對枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）的生長表現(xiàn)出抑制作用，17株可以抑制釀酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）的生長，11株能夠抑制鏈格孢菌（Alternaria alternata）的生長。艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌多樣性不高，且黏球菌屬為該地區(qū)可培養(yǎng)黏細菌的優(yōu)勢種屬。初步篩選出的2株黏細菌菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1，具有廣譜的抗菌活性，是一類極具開發(fā)潛力的微生物資源。

關(guān)鍵詞：艾比湖濕地;黏細菌;病原微生物;抗菌活性

中圖分類號：S182 ??文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2022）08-0234-09

植物病害是影響國家糧食安全和作物生產(chǎn)力的主要因素之一，對作物的生長發(fā)育和產(chǎn)量有較大的影響，造成巨大的經(jīng)濟損失[1]，其中70%～80%的病害由病原真菌所致[2-3]，其生物防治的研究具有很大的現(xiàn)實意義。研究表明，芽孢桿菌（Bacillus）、假單胞菌屬（Pseudomonas）、溶桿菌屬（Lysobacter）、木霉屬（Trichoderma）和腐霉屬（Pythium）等病菌產(chǎn)生的毒素、抗生素及蛋白質(zhì)類物質(zhì)等代謝產(chǎn)物能夠抑制植物病原菌的生長，其中枯草芽孢桿菌等已被開發(fā)為微生物菌劑，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中病害的控制[4-6]。然而，次級代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生受到環(huán)境因素的影響，這使得拮抗菌株在田間的防治效果較差[7]。目前，大量研究表明在動物病害及蟲害的防治過程中，利用其天敵和捕食關(guān)系進行病害防治，可達到較好的防治效果[8-9]。然而，微生物中也存在大量的捕食者，如蛭弧菌屬（Bdellovibrio）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、溶桿菌屬（Lysobacter）和黏細菌目（Myxococcales）等[10-12]。其中，黏細菌對病原微生物的捕食特性使其在植物病害防治方面具有較大的潛力，被視為新型的生防微生物類群[13]。

黏細菌是一類能夠滑行運動、具有復雜多細胞行為的革蘭氏陰性菌[14]，主要分布于中性或偏堿性土壤中[15]。然而，在海洋、沙漠、鹽堿地和濕地等特殊生境中也發(fā)現(xiàn)了大量的黏細菌資源[16-19]，在這些生境中黏細菌具有良好的穩(wěn)定性和抗逆性[20]。目前，對于黏細菌生物活性產(chǎn)物及其在生物防治應(yīng)用領(lǐng)域的研究日漸突出[21]。迄今為止，從黏細菌中分離獲得的活性代謝產(chǎn)物達到600多種[22]，這些產(chǎn)物種類多樣、結(jié)構(gòu)新穎[23]，具有抗真菌、抗細菌和抗腫瘤等生物活性[24]。研究表明，黏細菌產(chǎn)生的活性產(chǎn)物對植物病原菌生長具有較強的抑制作用，且其在土壤中的定殖效果較好[25]。因此，黏細菌是一類極具開發(fā)潛力的生物防治因子[26]。然而，獲得大量的黏細菌種質(zhì)資源是其被開發(fā)和利用的關(guān)鍵。

新疆艾比湖濕地地處阿拉山口大風通道處，位于準噶爾盆地西南邊緣（82°36′～83°50′E，44°30′～45°09′N），是我國溫帶干旱區(qū)內(nèi)陸湖泊的典型代表[27]，總面積2 670.85 km2。艾比湖濕地內(nèi)分布有沼澤、湖泊、沙漠和鹽漠等不同地理區(qū)域，區(qū)域內(nèi)土壤鹽堿化嚴重（土壤電導率為1～12 mS/cm;pH值范圍為8.0～9.0）。鹽角草、檉柳、鹽節(jié)木、梭梭、花花柴、蘆葦和胡楊等植物是艾比湖濕地鹽堿環(huán)境中的建群植物，具有較強的耐鹽能力，對艾比湖濕地生態(tài)環(huán)境的恢復具有重要作用。目前，有關(guān)濕地鹽堿環(huán)境中耐鹽植物群落區(qū)黏細菌的分布、多樣性及其活性產(chǎn)物的研究較少。因此，對新疆艾比湖濕地鹽堿地中建群植物根際土壤中可培養(yǎng)黏細菌菌株的分離及其抗菌特性的研究很有必要。

基于傳統(tǒng)的黏細菌分離純化方法，以艾比湖濕地建群植物根際土壤作為主要研究對象，對該地區(qū)可培養(yǎng)黏細菌多樣性及其抗菌特性進行研究，這對認識艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌的種屬分類，以及探究該地區(qū)黏細菌的代謝產(chǎn)物提供了科學基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)概況

艾比湖濕地位于準噶爾盆地西南邊緣（82°36′～83°50′E，44°30′～45°09′N），地處新疆阿拉山口大風通道下，為典型的大陸性氣候，平均降水量為105.17 mm，蒸發(fā)量為1 315 mm。由于艾比湖濕地特殊的地理位置，形成了獨特的濕地生態(tài)環(huán)境，生長有多種不同鹽生、水生和旱生類植被群落，如鹽角草（Salicornia europaea）、蘆葦（Phragmites australis）和胡楊（Populus euphratica）等，濕地內(nèi)土壤多為沙質(zhì)土壤和黏質(zhì)土壤，且土壤鹽堿化較為嚴重。

1.2 樣品采集與處理

于2018年7月至新疆艾比湖濕地國家自然保護區(qū)進行采樣。本試驗共采集新疆艾比湖濕地15份土壤樣品（14份植物根際土壤和1份朽木樣品）。采集土壤樣品時，去除土壤表面的雜質(zhì)和表層土后進行取樣。利用無菌刷子輕輕將附著在植物根系的土壤刷落，作為該植物群落區(qū)根際土壤。將樣品迅速帶回實驗室，立即自然風干、過篩，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，?018年9月進行試驗。采樣地具體信息見表1。

1.2.1 培養(yǎng)基[17] WCX培養(yǎng)基：CaCl2·2H2O 0.1%，4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）0.48%，瓊脂1.5%，pH值7.2。培養(yǎng)基滅菌后，加入終濃度為25 μg/mL的放線菌酮溶液;培養(yǎng)基凝固后用活的大腸桿菌在其表面畫線。

ST21CX培養(yǎng)基：A液，K2HPO4 0.1%，酵母抽提物0.002%，瓊脂1.5%，蒸餾水670 mL;B液，KNO3 0.1%，MgSO4·7H2O 0.1%，MnSO4·7H2O 0.01%，CaCl2·2H2O 0.1%，F(xiàn)eCl3·6H2O 0.02%，蒸餾水330 mL。高壓蒸汽滅菌后將A、B等2個溶液混合，加入放線菌酮溶液（終濃度為25 μg/mL）。為分離嗜纖維素黏細菌，可在培養(yǎng)基表面放置滅過菌的濾紙。

VY/2培養(yǎng)基：安琪酵母0.5%，CaCl2·2H2O 0.1%，MgSO4·7H2O 0.05%，瓊脂1.5%，pH值7.6。高壓蒸汽滅菌后加入VB12溶液（終濃度為 0.5 μg/mL）和放線菌酮溶液（終濃度為25 μg/mL）。

CAS液體培養(yǎng)基：酪蛋白胨0.3%，MgSO4·7H2O 0.1%，pH值7.2。

VY/4培養(yǎng)基：安琪酵母0.25%，CaCl2·2H2O 0.1%，瓊脂1.5%，pH值7.2。

1.2.2 試驗菌株 大腸桿菌（Escherichia coli）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、釀酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）均由筆者所在實驗室提供;金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門氏菌（Salmonella typhimurium）和鏈格孢菌（Alternaria alternata）分別由石河子大學動物科技學院和農(nóng)學院提供。以上菌株用于測定黏細菌的抗菌活性。

1.3 試驗方法

1.3.1 黏細菌菌株的分離 利用兔糞誘導法[28]、大腸桿菌劃線誘導法和濾紙誘導法[29]對艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌進行分離。取適量樣品置于已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，于58 ℃烘箱內(nèi)處理1～2 h，以除去樣品中不耐熱的雜菌及變形蟲[30]。用100 μg/mL的放線菌酮溶液浸泡樣品過夜。次日，倒掉廢液，取黃豆粒大小的樣品接種于WCX大腸桿菌劃線培養(yǎng)基、ST21CX濾紙誘導培養(yǎng)基及ST21CX兔糞誘導培養(yǎng)基中，封口。30 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，持續(xù)觀察子實體的形成情況。每組試驗設(shè)置3個重復。

1.3.2 黏細菌的純化和驗純 用無菌竹簽挑取兔糞表面及大腸桿菌周圍的子實體，采用直接純化法、反復轉(zhuǎn)接純化法、加熱純化法（58 ℃）和冷凍純化法（-80 ℃）進行純化。挑取純化后的菌株接種于CAS液體培養(yǎng)基中，搖床過夜培養(yǎng)。若培養(yǎng)基澄清則說明該菌株已純;若培養(yǎng)基渾濁，則在VY/2固體培養(yǎng)基上繼續(xù)純化。將已純菌株用25%的甘油于-80 ℃進行長期保存。

1.3.3 黏細菌的形態(tài)學分類 利用熒光顯微鏡對菌株的菌落形態(tài)、子實體形態(tài)、營養(yǎng)細胞及黏孢子形態(tài)進行觀察[16-17，31]并拍照。參考《Bergeys manual of systematic bacteriology》[31]和《The prokaryotes》（第2版）[32]的分類標準，對獲得的純菌株進行初步鑒定。

1.3.4 菌株生理生化測定 根據(jù)《伯杰細菌鑒定手冊》（第8版）中對黏細菌理化特征的描述，對菌株進行LB液體培養(yǎng)、明膠液化、吐溫-80利用、脲酶利用、硝酸鹽還原、剛果紅試驗、纖維素降解、過氧化氫反應(yīng)、淀粉水解與牛奶胨化等試驗。

1.3.5 黏細菌16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析 采用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法提取菌株的基因組DNA，利用細菌16S rDNA通用引物27F[33]和1495R[34]對黏細菌16S rDNA序列進行擴增。擴增產(chǎn)物送至北京華大基因研究中心有限公司進行測序。將測序所得的序列在NCBI網(wǎng)站上進行BLAST序列比對，再用MEGA 5.0軟件（Neighbor-Joining法）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，對艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌多樣性進行分析。本研究的測序序列已提交至GeneBank數(shù)據(jù)庫。

1.3.6 黏細菌抗菌活性分析 將黏細菌菌株接種在VY/2固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d，待其長滿平板后，用滅過菌的打孔器打孔，制備黏細菌菌餅若干。

黏細菌抗細菌及抗釀酒酵母菌活性分析將試驗菌株：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和枯草芽孢桿菌分別接種至牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基內(nèi)，將釀酒酵母菌接種至馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）液體培養(yǎng)基內(nèi)，37 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)至菌液吸光度（D600 nm）為0.5。各取一定量的菌液，分別均勻涂布至牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基和PDA固體培養(yǎng)基上，晾干。用滅過菌的竹簽扎取黏細菌菌餅倒扣在涂有試驗菌株的培養(yǎng)基的一側(cè)，另一側(cè)放置同樣大小的無菌的VY/2瓊脂塊作為空白對照，封口。37 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，觀察抑菌圈大小。每組試驗設(shè)置3個重復。

黏細菌抗鏈格孢菌活性分析：用滅過菌的竹簽扎取2～3塊黏細菌菌餅，將其倒扣在VY/4固體培養(yǎng)基上[35]，在超凈臺內(nèi)放置1夜。次日，在離黏細菌菌餅約1 cm處的位置放置1塊相同大小的鏈格孢菌菌餅，另一側(cè)放置同樣大小的無菌的VY/2瓊脂塊作為空白對照，封口。30 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，觀察抑菌圈大小。每組試驗設(shè)置3個重復。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同樣品中黏細菌的分離與純化

試驗分析了不同樣品中黏細菌的分離情況。利用傳統(tǒng)的黏細菌分離方法，從新疆艾比湖濕地采集的15份樣品中共分離出60株疑似黏細菌菌株，經(jīng)純化得到22株純菌株，純菌率為36.7% （表2）。研究結(jié)果表明，胡楊、蘆葦和鹽角草樣品中均能誘導出球形（或卵球形）、肉粉色（或橘紅色）的子實體，且從胡楊根際土壤中分離到的黏細菌菌株數(shù)最多;朽木、鹽角草和蘆葦樣品中均能誘導出黃色（或黃綠色）、橢圓形或形狀不規(guī)則的子實體，且鹽角草根際土壤中誘導出的該類黏細菌是最多的;花花柴根際土壤中僅誘導出單個分布的圓形或近圓形的黃色子實體。然而，其余土壤樣品中未誘導純化出黏細菌菌株，這可能與各群落區(qū)的土壤類型、根系分泌物及土壤理化因子等有關(guān)。

2.2 黏細菌菌株的鑒定

2.2.1 菌株的形態(tài)特征 根據(jù)菌株的子實體形態(tài)、菌落形態(tài)、營養(yǎng)細胞及黏孢子形態(tài)，將22株疑似黏細菌菌株分為3類，結(jié)果如表3所示。這些菌株形態(tài)各異，種類多樣，在VY/2固體培養(yǎng)上可形成不同形狀的菌落，呈圓形（或同心圓）擴展或呈放射狀波紋，同時在菌落邊緣可形成薄而半透明的膜;子實體肉眼可見，以粉紅色、黃色和金黃色為主，形狀主要為球形或卵圓形，能產(chǎn)生大量的黏液;其營養(yǎng)細胞為細長桿狀、兩端稍尖、可彎曲，大小一般為（0.6～1.0） μm×（2～10） μm，為Ⅰ型營養(yǎng)細胞;黏孢子主要為橢圓形、卵圓形或圓形。部分菌株形態(tài)特征如圖1所示。

2.2.2 菌株的生理生化特征 對22株菌株進行理化性質(zhì)檢測，發(fā)現(xiàn)所有菌株均不能在LB液體培養(yǎng)基中生長，且能夠利用吐溫-80、吸附剛果紅、可使硝酸鹽還原、淀粉水解、牛奶胨化;菌株WCX_LG-5對濾紙有輕微地降解作用，其余菌株均不能使濾紙降解。所有菌株理化特征與《伯杰氏細菌手冊》中對黏球菌屬特征的描述相符，進一步結(jié)合形態(tài)特征，初步認定22株純菌株為黏球菌屬菌株。

2.2.3 菌株16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析 通過形態(tài)鑒定并結(jié)合菌株理化性質(zhì)，初步認定22株菌株為黏球菌屬菌株。為進一步確定其分類，通過CTAB法提取了22株菌株的基因組DNA，利用細菌通用引物對菌株的16S rDNA序列進行PCR擴增，并將擴增產(chǎn)物送至華大基因公司進行測序。將測序后所得序列在NCBI上進行BLAST序列比對，利用MEGA 5.0軟件中的Neighbor-Joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，對其進行系統(tǒng)發(fā)育分析。由圖2可看出，以脫硫弧菌（Desulfovibrio desulfuricans）作為外群菌株，22株菌株分為3個分支。Ⅰ類菌株的分支屬于黏球菌屬（Myxococcus sp.，2株）;Ⅱ類菌株的分支屬于黏球菌屬中的變綠黏球菌（Myxococcus virescens，14株）;Ⅲ類菌株的分支屬于黏球菌屬中的橙色黏球菌（Myxococcus fulvus，6株）。然而，這3類菌株均屬于黏球菌屬（Myxococcus），這與菌株的形態(tài)鑒定結(jié)果相一致。由此可以看出，黏球菌屬為艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌的優(yōu)勢種屬，且該地區(qū)可培養(yǎng)黏細菌多樣性不高，這可能與該地區(qū)特殊的土壤環(huán)境、植被類型和氣候等因素有很大關(guān)系。

2.3 黏細菌菌株的抗菌特性分析

利用平板對峙法，初步探究了22株黏細菌對6種指示菌株的抗菌活性。將指示菌株與黏細菌分別在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基及VY/4固體培養(yǎng)基上共同培養(yǎng)一定時間后，觀察黏細菌抑菌情況并記錄抑菌圈的大小。黏細菌抗菌活性檢測結(jié)果顯示，22株黏細菌均表現(xiàn)出對1種或多種指示菌株產(chǎn)生抗性，如圖3所示。其中，有14株黏細菌均可抑制大腸桿菌和沙門氏菌的生長，15株對枯草芽孢桿菌的生長表現(xiàn)出抑制作用，14株對金黃色葡萄球菌的生長表現(xiàn)出抑制作用，17株可以抑制釀酒酵母菌的生長，11株黏細菌能夠抑制鏈格孢菌的生長。然而，菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1對6種指示菌株均具有抑制作用，具有廣譜的抗菌活性。此外，筆者所在課題組還發(fā)現(xiàn)歸屬于同一個種的黏細菌菌株對6種指示菌株的抗性具有一定的差異，結(jié)果如表4所示。從表5中可以看出，黏球菌屬菌株和橙色黏球菌能夠抑制釀酒酵母菌和鏈格孢菌的生長，而變綠黏球菌對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和鏈格孢菌均有抑制作用，這說明變綠黏球菌具有廣譜的抗菌活性。

3 討論

3.1 影響艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌多樣性的因素

利用傳統(tǒng)的黏細菌分離方法，從新疆艾比湖濕地14份土壤樣品及1份朽木樣品中分離純化到14株變綠黏球菌、6株橙色黏球菌和2株黏球菌屬菌株，提示艾比湖濕地黏細菌多樣性不高，這與張鮮姣等對新疆鹽堿化土壤中黏細菌多樣性研究結(jié)果[18]一致。分析其原因主要有：（1）土壤理化因子（鹽堿度）。鹽堿地土壤顯著的特點是土壤的pH值、含鹽量較高，土壤肥力缺乏[36]，土壤pH值、含鹽量及土壤中的營養(yǎng)物質(zhì)含量與根系微生物多樣性呈顯著負相關(guān)[37]。通常，黏細菌在中性或偏堿性及有機質(zhì)豐富的土壤中較為常見[15，38]。而艾比湖濕地土壤鹽堿化嚴重，土壤養(yǎng)分及營養(yǎng)物質(zhì)均處于較低水平[39]，因此該地區(qū)的鹽堿環(huán)境不利于黏細菌的生長。此外，在這種特殊的極端鹽堿環(huán)境中，可能有一些新種未被發(fā)現(xiàn)。（2）土壤性質(zhì)。黏細菌為土壤中常見的腐生菌，通常一小撮土壤就可分離出較多的黏細菌[31]，但在不同的土壤環(huán)境中黏細菌的分布是不均勻的[40]。黏細菌在營養(yǎng)豐富的土壤樣品中較為豐富，而在含沙土壤中黏細菌含量較少[41]。艾比湖濕地的土壤多為沙性鹽堿土且土壤腐殖質(zhì)含量較低，這可能是影響?zhàn)ぜ毦植技捌涠鄻有缘闹匾蛩刂?。?）植被類型。從14種植物根際土壤樣品中分離篩選黏細菌菌株，其中在鹽角草、蘆葦、胡楊和花花柴根際土壤樣品中分離獲得了黏細菌菌株，其余植物根際土壤樣品中未分離純化出黏細菌。此外，從朽木、鹽角草和蘆葦樣品中都分離到了變綠黏球菌，然而從鹽角草樣品中分離到最多;從胡楊樣品中分離到的橙色黏球菌最多，而從花花柴樣品中只分離到2株黏球菌屬的菌株，而其他樣品中均未分離出黏細菌菌株，這說明不同的植被類型及根系分泌物可能會影響?zhàn)ぜ毦姆植技捌涠鄻有蕴攸c。（4）黏細菌分離方法。蟻爍星等通過改進分離方法，大大提高了誘導出的黏細菌的種類和數(shù)目[42]。而傳統(tǒng)的黏細菌分離方法本身具有一定的局限性[43]，兔糞誘導法和大腸桿菌誘導法主要針對嗜細菌、黏細菌的分離，而濾紙誘導法主要分離嗜纖維素黏細菌菌株[44]，所以每種方法并不適用于樣品中所有黏細菌菌株的分離。此外，有的黏細菌在純化過程中，其子實體會隨著純化傳代次數(shù)的增加而出現(xiàn)不生長、甚至出現(xiàn)死亡等情況[45]。因此在黏細菌分離純化過程中可能會丟失一些種屬，所以分離方法在一定程度上也會影響?zhàn)ぜ毦亩鄻有浴?/p>

3.2 黏細菌抗菌活性分析

黏細菌作為第三大類藥源微生物類群，其次級代謝產(chǎn)物的抗菌活性在其捕食細菌的過程中發(fā)揮著重要作用[20]，而β-1，6-葡聚糖酶是目前報道的唯一的具有糖苷水解酶活性的外膜蛋白，是黏細菌捕食真菌的關(guān)鍵因子[35]。由于黏細菌不同種屬之間的特性差異較大，導致其捕食研究較為緩慢。試驗初步探究了22株黏細菌對指示細菌和植物病原真菌的抗菌特性。結(jié)果表明，22株黏細菌菌株均對一種或多種指示菌株產(chǎn)生抗性，這可能與黏細菌的捕食作用及其產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物有關(guān)。

大腸桿菌是腸道桿菌中的一種，可以引起人或動物的腸道感染，此外還會引起尿道和膀胱等感染[46]。金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌，在適當?shù)臈l件下，金黃色葡萄球菌能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒，它是僅次于沙門氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌。分離得到的22株黏細菌中，14株變綠黏球菌不僅能夠抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長，而且對枯草芽孢桿菌和沙門氏菌具有抑制作用，具有廣譜的抗菌活性，這可能是由于變綠黏球菌通過分泌蛋白酶、溶菌酶等裂解酶對指示菌株進行消化和捕食的結(jié)果。試驗中分離得到的6株橙色黏球菌對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌均無抑制作用，這與惠明等對橙色黏球菌抗菌活性分析結(jié)果[47]不一致，這可能與分離黏細菌的樣地及產(chǎn)生代謝產(chǎn)物菌株的特異性有很大關(guān)系。此外，試驗結(jié)果顯示同一種屬的黏細菌對指示菌株的抗性具有一定的差異性，這可能與黏細菌產(chǎn)生的活性代謝產(chǎn)物的種類有關(guān)。

我國大面積種植梨樹，其果肉營養(yǎng)豐富。其果實和葉片等往往會被鏈格孢菌侵染，引發(fā)梨黑斑病，這嚴重影響梨的產(chǎn)量和品質(zhì)[48]。因此，對梨黑斑病病原微生物的生物防治是一件刻不容緩的事情?？咕Y(jié)果顯示，分離得到的14株黏細菌能夠抑制鏈格孢菌的生長，這為梨黑斑病病原微生物的防治及微生物農(nóng)藥的開發(fā)提供了新方案，同時也為黏細菌菌株代謝產(chǎn)物的深入研究提供了理論數(shù)據(jù)，具有較好的現(xiàn)實意義。此外，通過對黏細菌抗菌活性的初步探究，發(fā)現(xiàn)菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1對6種指示菌株的生長均具有抑制作用，具有廣譜的抗菌活性，是一類具有開發(fā)為菌劑潛力的微生物資源，在今后的研究中有望對其代謝產(chǎn)物進行更深入的研究。

4 結(jié)論

利用黏細菌傳統(tǒng)分離方法，從新疆艾比湖鹽堿濕地中分離出22株黏細菌菌株。所有菌株最終被鑒定為橙色黏球菌、變綠黏球菌和黏球菌屬菌株。由此可知，艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細菌多樣性不高，黏球菌屬為該地區(qū)可培養(yǎng)黏細菌的優(yōu)勢種屬。

黏細菌能夠抑制病原微生物的生長。22株黏細菌對一種或多種指示細菌和植物病原真菌的生長具有抑制作用，且同一種屬的黏細菌對指示菌株的抗性具有一定的差異性。

有的黏細菌已被開發(fā)為微生物菌劑用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1具有廣譜的抗菌活性，是一類具有開發(fā)為微生物農(nóng)藥前景的微生物資源，為其代謝產(chǎn)物的進一步研究提供了基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1]Savary S，Willocquet L，Pethybridge S J，et al. The global burden of pathogens and pests on major food crops[J]. Nature Ecology & Evolution，2019，3（3）：430-439.

[2]康振生. 我國植物真菌病害的研究現(xiàn)狀及發(fā)展策略[J]. 植物保護，2010，36（3）：9-12.

[3]Casadevall A. Fungal diseases in the 21st century：the near and far horizons[J]. Pathogens & Immunity，2018，3（2）：183-196.

[4]Yuliar，Nion Y A，Toyota K. Recent trends in control methods for bacterial wilt diseases caused by Ralstonia solanacearum[J]. Microbes and Environments，2015，30（1）：1-11.

[5]Syed-Ab-Rahman S F，Singh E，Pieterse C M J，et al. Emerging microbial biocontrol strategies for plant pathogens[J]. Plant Science，2018，267：102-111.

[6]Legein M，Smets W，Vandenheuvel D，et al. Modes of action of microbial biocontrol in the phyllosphere[J]. Frontiers in Microbiology，2020，11：1619.

[7]陳志龍，陳 杰，許建平，等. 番茄青枯病生物防治研究進展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2013，41（8）：131-134.

[8]彭 婧，薛書浩. 生物防治在設(shè)施蔬菜生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014（7）：174-175.

[9]方俊松. 農(nóng)業(yè)生物防治的特點及方法[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014（7）：170，172.

[10]Pal K K，McSpadden Gardener B. Biological control of plant pathogens[J]. The Plant Health Instructor，2006：2（202）：147.

[11]Olanya O M，Lakshman D K. Potential of predatory bacteria as biocontrol agents for foodborne and plant pathogens[J]. Journal of Plant Pathology，2015，97（3）：405-417.

[12]Lueders T，Kindler R，Miltner A，et al. Identification of bacterial micropredators distinctively active in a soil microbial food web[J]. Applied and Environmental Microbiology，2006，72（8）：5342-5348.

[13]李周坤，葉現(xiàn)豐，楊 凡，等. 黏細菌捕食生物學研究進展及其在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用潛力[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學學報，2021，44（2）：208-216.

[14]Dworkin M. Recent advances in the social and developmental biology of the myxobacteria[J]. Microbiological Reviews，1996，60（1）：70-102.

[15]Dawid W. Vorkommen und verbreitung fruchtkrper-bildender myxobakterien im Siebengebirge vergleichende untersuchungen unter berücksichtigung charakteristischer biotope[J]. Zeitschrift Für Allgemeine Mikrobiologie，1979，19（10）：705-719.

[16]Dawid W. Biology and global distribution of myxobacteria in soils[J]. FEMS Microbiology Reviews，2000，24（4）：403-427.

[17]Shimkets L J，Dworkin M，Reichenbach H. The myxobacteria[M]//The prokaryotes. New York：Springer，2006：31-115.

[18]張鮮姣，黎志坤，譚志遠，等. 新疆阿克蘇地區(qū)鹽堿地黏細菌分離鑒定[J]. 微生物學報，2012，52（2）：160-168.

[19]張鮮姣，呂穎穎，朱紅惠. 濕地環(huán)境可培養(yǎng)黏細菌多樣性研究[J]. 生物技術(shù)進展，2018，8（2）：140-146，187.

[20]代京莎，李安章，朱紅惠. 黏細菌在植物病害生物防治中的作用[J]. 生物技術(shù)進展，2016，6（4）：229-234.

[21]Hoffmann T，Krug D，Bozkurt N，et al. Correlating chemical diversity with taxonomic distance for discovery of natural products in myxobacteria[J]. Nature Communications，2018，9（1）：803.

[22]Schberle T F，Lohr F，Schmitz A，et al. Antibiotics from myxobacteria[J]. Natural Product Reports，2014，31（7）：953.

[23]Reichenbach H，Hfle G. Biologically active secondary metabolites from myxobacteria[J]. Biotechnology Advances，1993，11（2）：219-277.

[24]Herrmann J，F(xiàn)ayad A A，Müller R. Natural products from myxobacteria：novel metabolites and bioactivities[J]. Natural Product Reports，2017，34（2）：135-160.

[25]Dahm H，Brzezińska J，Wrótniak-Drzewiecka W，et al. Myxobacteria as a potential biocontrol agent effective against pathogenic fungi of economically important forest trees[J]. Dendrobiology，2015，74：13-24.

[26]Iizuka T，F(xiàn)udou R，Jojima Y，et al. Miuraenamides A and B，novel antimicrobial cyclic depsipeptides from a new slightly halophilic myxobacterium：taxonomy，production，and biological properties[J]. The Journal of Antibiotics，2006，59（7）：385-391.

[27]Hu W G，Jin X T，Wang Y P，et al. Diversity of eukaryotic micro-organisms and changes in the dominant fungal taxa composition in relationship with soil environment in the Ebinur Lake wetland[J]. Biotechnology & Biotechnological Equipment，2018，32（2）：408-419.

[28]Reichenbach H. A simple method for the purification of myxobacteria[J]. Journal of Microbiological Methods，1983，1（2）：77-79.

[29]Yan Z C，Wang B，Li Y Z，et al. Morphologies and phylogenetic classification of cellulolytic myxobacteria[J]. Systematic and Applied Microbiology，2003，26（1）：104-109.

[30]Karwowski J P，Sunga G N，Kadam S，et al. A method for the selective isolation of Myxococcus directly from soil[J]. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology，1996，16（4）：230-236.

[31]Reichenbach H. The myxococcales[M]//Garrity G M. Bergeys manual of systematic bacteriology. 2nd ed. New York：Springer-Verlag，2005：1059-1143.

[32]Reichenbach H，Dworkin M. The myxobacteria[M]//Balous A，Trüper H G，Dworkin M，et al. The prokaryotes. Berlin：Springer，1992：3418-3487.

[33]Brosius J，Dull T J，Sleeter D D，et al. Gene organization and primary structure of a ribosomal RNA operon from Escherichia coli[J]. Journal of Molecular Biology，1981，148（2）：107-127.

[34]Brunel B，Givaudan A，Lanois A，et al. Fast and accurate identification of Xenorhabdus and Photorhabdus species by restriction analysis of PCR-amplified 16S rRNA genes[J]. Applied and Environmental Microbiology，1997，63（2）：574-580.

[35]Li Z K，Ye X F，Liu M X，et al. A novel outer membrane β-1，6-glucanase is deployed in the predation of fungi by myxobacteria[J]. The ISME Journal，2019，13（9）：2223-2235.

[36]Wang W J，He H S，Zu Y G，et al. Addition of HPMA affects seed germination，plant growth and properties of heavy saline-alkali soil in northeastern China：comparison with other agents and determination of the mechanism[J]. Plant and Soil，2011，339（1/2）：177-191.

[37]趙 嬌，謝慧君，張 建. 黃河三角洲鹽堿土根際微環(huán)境的微生物多樣性及理化性質(zhì)分析[J]. 環(huán)境科學，2020，41（3）：1449-1455.

[38]李曙光，周秀文，吳志紅，等. 黏細菌的種群生態(tài)及其生存策略[J]. 微生物學通報，2013，40（1）：172-179.

[39]蘭鴻珠，胡文革，楊 揚，等. 艾比湖濕地鹽節(jié)木土壤固氮微生物群落結(jié)構(gòu)和豐度的環(huán)境異質(zhì)性特點[J]. 微生物學通報，2019，46（7）：1597-1610.

[40]李艷青，張利平，楊潤蕾. 河北省黏細菌物種資源多樣性的研究：承德市區(qū)及其五縣生態(tài)樣品的研究[J]. 河北科技大學學報，2005，26（3）：215-218，224.

[41]方曉梅，張利平. 黏細菌生態(tài)多樣性的初步研究[J]. 生物多樣性，2001，9（3）：207-213.

[42]蟻爍星，周 楊，張鮮姣，等. 不同分離方法對子實體形成和黏細菌分離的影響[J]. 微生物學報，2021，61（4）：923-934.

[43]王春玲，馮廣達，姚 青，等. 黏細菌基因組學研究進展[J]. 微生物學通報，2019，46（9）：2394-2403.

[44]張宜濤，惠 明，田 青. 黏細菌的分離篩選方法及其應(yīng)用前景[J]. 生物技術(shù)，2010，20（6）：95-98.

[45]李越中，李 健. 黏細菌的分離與純化[J]. 微生物學通報，1997，24（4）：237-240.

[46]殷澤祿，萬 虎. 大腸桿菌的研究綜述[J]. 甘肅畜牧獸醫(yī)，2019，49（5）：33-35.

[47]惠 明，張宜濤，田 青，等. 一株橙色黏球菌的篩選及初步鑒定[J]. 河南師范大學學報（自然科學版），2012，40（1）：138-141.

[48]董 冉，魏樹偉，王宏偉，等. 華北地區(qū)梨黑斑病的發(fā)生與防治[J]. 果農(nóng)之友，2019（9）：31-32.