結(jié)腸癌是消化道常見(jiàn)的腫瘤之一，主要發(fā)生于腸黏膜，并向鄰近臟器擴(kuò)散。雖然接受根治性切除術(shù)的早期結(jié)腸癌患者的5年生存率超過(guò)90%，但大多數(shù)患者被診斷為晚期或轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致5年生存率下降到10%。目前臨床上治療結(jié)腸癌的方法主要有手術(shù)、放療、化療、靶向治療等，這些治療方法已經(jīng)取得了相當(dāng)大的進(jìn)展。但由于診斷晚、發(fā)展快、轉(zhuǎn)移頻率高，患者預(yù)后仍較差，遠(yuǎn)不能令人滿意。因此，迫切需要探索結(jié)腸癌的分子機(jī)制，并確定新的生物標(biāo)志物用于生存評(píng)估和靶向治療。

近年來(lái)，m6A甲基化成為腫瘤研究的熱點(diǎn)。隨著對(duì)m6A研究的深入，發(fā)現(xiàn)m6A修飾在腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展中發(fā)揮重要功能。隨著研究的深入，愈來(lái)愈多的m6A甲基化相關(guān)的酶被發(fā)現(xiàn)與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡及侵襲、遷移相關(guān)。例如研究發(fā)現(xiàn)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3通過(guò)直接或間接上調(diào)MYC的表達(dá)促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的惡性增殖。在此研究背景基礎(chǔ)之上，我們發(fā)現(xiàn)了在腫瘤中差異表達(dá)的基因——METTL27（Methyltransferase Like 27）。METTL27（亦 稱WBSCR27）是屬于甲基轉(zhuǎn)移酶系列的蛋白質(zhì)，現(xiàn)有研究報(bào)道METTL27 是與Williams-Beuren 綜合征相關(guān)未知功能的編碼蛋白。通過(guò)對(duì)其蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的研究發(fā)現(xiàn)，可以將METTL27 歸類為I 類甲基轉(zhuǎn)移酶（MTases）。然而，目前關(guān)于METTL27的生物學(xué)功能及甲基化反應(yīng)未見(jiàn)研究，在腫瘤中發(fā)揮的作用亦尚未見(jiàn)報(bào)道，在結(jié)腸癌中的作用機(jī)制仍待進(jìn)一步挖掘。因此，本研究旨在通過(guò)TCGA、GEO、HPA等數(shù)據(jù)庫(kù)，應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析METTL27在結(jié)腸癌中的表達(dá)、臨床相關(guān)性及生存預(yù)后相關(guān)性。使用GSEA 富集分析挖掘METTL27可能參與的信號(hào)通路，揭示其在結(jié)腸癌中發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制，希望提供一種新的候選基因來(lái)改善結(jié)腸癌的預(yù)后和生存率。

1 資料和方法

1.1 生物信息學(xué)分析資料獲取

TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)（https://portal.gdc.cancer.gov/）下載結(jié)腸癌項(xiàng)目（結(jié)腸癌）中的高通量測(cè)序RNA數(shù)據(jù)（每百萬(wàn)千堿基片段（FPKM）格式）和對(duì)應(yīng)的臨床病理信息數(shù)據(jù)。在這項(xiàng)研究中，RNA測(cè)序數(shù)據(jù)從FPKM格式轉(zhuǎn)化為每百萬(wàn)次讀取的轉(zhuǎn)錄本（TPM）。研究方式完全按照TCGA指南進(jìn)行，所有的倫理相關(guān)知情同意都是在數(shù)據(jù)收集之前獲得的。

如上述，巴基斯坦在抗震設(shè)防的區(qū)劃與中國(guó)類似，很容易將其與中國(guó)的動(dòng)參數(shù)區(qū)域相對(duì)比，并采取相應(yīng)的抗震設(shè)防烈度，并按照規(guī)范采取相關(guān)抗震設(shè)防參數(shù)。印度尼西亞、委內(nèi)瑞拉等國(guó)業(yè)與其較為類似。

GEO數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）是由美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心創(chuàng)建并維護(hù)的基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)。納入標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)集應(yīng)包括結(jié)腸癌樣本組和對(duì)照樣本組（健康組織、相鄰的非癌組織），每組至少包含10個(gè)樣本。最后選擇納入GSE83889以及GSE164191兩個(gè)基因表達(dá)譜。

分析使用軟件：R（3.6.3版本）用于數(shù)據(jù)歸一化，并統(tǒng)計(jì)分析與可視化。

Human Protein Atlas 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.proteinatlas.org/），即HPA數(shù)據(jù)庫(kù)，是一個(gè)免費(fèi)的包含超過(guò)26 000種抗體，靶向來(lái)自17 000多種人類基因的公共數(shù)據(jù)庫(kù)。通過(guò)檢索基因METTL27得到正常結(jié)直腸組織以及結(jié)直腸癌組織免疫組化樣本。

1.2 整合差異表達(dá)基因（DEGs）篩選并構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)

將METTL27（cut-off value of 50%）分為低表達(dá)和高表達(dá)組，整合項(xiàng)目中l(wèi)evel3 HTSeq-Counts格式的RNAseq數(shù)據(jù)，使用R包：DESeq2（1.26.0版本）用來(lái)鑒定DEGs，通過(guò)R包：ggplot2（3.3.3版本）進(jìn)行熱圖可視化展示。通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cn.string-db.org/）分析METTL27蛋白列表中的分子互作情況構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI），并展示蛋白網(wǎng)絡(luò)互作關(guān)系，R包：igraph 進(jìn)行可視化。

廣西地不容為瀕危物種，狹域分布[5]。2012—2016年連續(xù)5年，本課題組對(duì)文獻(xiàn)和標(biāo)本館查詢到的廣西地不容分布區(qū)進(jìn)行了實(shí)地調(diào)研，結(jié)果表明該物種資源仍進(jìn)一步衰減；原有的一些產(chǎn)區(qū)已經(jīng)很難尋到野生樣品或者只有零星的個(gè)體，難以在群體水平上進(jìn)行采樣，比如廣西凌云縣、田林縣、田東縣和德保縣。因此，對(duì)于廣西地不容，在較大區(qū)域范圍采集到群體水平的樣品已十分困難，本實(shí)驗(yàn)以個(gè)體數(shù)量相對(duì)較多的5個(gè)居群評(píng)價(jià)其遺傳多樣性。

1.3 METTL27功能注釋和KEGG通路分析

對(duì)METTL27 進(jìn)行基因GO功能注釋和京都基因與KEGG 通路富集分析。統(tǒng)計(jì)分析和可視化均在R3.6.3版本中進(jìn)行。Cluster Profiler（3.14.3版本）包用于富集分析,ggplot2包用于可視化。

1.4 METTL27差異基因集富集分析（GSEA）

在本研究中，使用R包c(diǎn)lusterProfiler進(jìn)行GSEA，以闡明高M(jìn)ETTL27組和低METTL27組之間的顯著功能和通路差異。數(shù)據(jù)集來(lái)源于MSigDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/index.jsp）調(diào)整后的dp＜0.05、錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）＜0.25 和標(biāo)準(zhǔn)化富集評(píng)分（|NES|）＞1被認(rèn)為是顯著富集。

1.5 METTL27免疫浸潤(rùn)相關(guān)性分析

使用R包：GSVA中的ssGSEA算法對(duì)METTL27進(jìn)行免疫浸潤(rùn)分析。共獲得24種浸潤(rùn)性免疫細(xì)胞。采用Spearman校正法分析METTL27與24種免疫細(xì)胞富集評(píng)分的相關(guān)性。采用Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)分析METTL27高表達(dá)組和低表達(dá)組的富集評(píng)分。

我們分析了METTL27在不同臨床病理特征的患者中的表達(dá)。其中，N期N1、N2期（圖5B，=0.016），病理分期為III、IV 期（圖5D，=0.026），發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移（圖5E，＜0.001），BMI≥25（圖5F，=0.015）的患者M(jìn)ETTL27表達(dá)顯著升高；T分期（圖5A）與M分期（圖5C）表達(dá)水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。此外，Logistics analysis分析了METTL27表達(dá)與臨床病理特征之間的相關(guān)性（表1），結(jié)果顯示METTL27高表達(dá)在臨床晚期、淋巴轉(zhuǎn)移、BMI 指數(shù)具有高風(fēng)險(xiǎn)比，與其mRNA表達(dá)水平保持一致。

1.6 結(jié)腸癌中METTL27表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)（連續(xù)變量）或Pearson卡方檢驗(yàn)比較METTL27高、低表達(dá)組的臨床病理特征。通過(guò)Logistic分析評(píng)價(jià)METTL27表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。

1.7 結(jié)腸癌中METTL27表達(dá)的臨床意義

更為重要的是，區(qū)縣級(jí)電視臺(tái)在制作專題節(jié)目時(shí)，往往存在創(chuàng)新意識(shí)不強(qiáng)、缺乏優(yōu)創(chuàng)的弊端，相關(guān)采編人員的能力和素質(zhì)都有待提高，業(yè)務(wù)水平不高、責(zé)任心不強(qiáng)的現(xiàn)象也比較常見(jiàn)，這需要在后續(xù)工作中努力加強(qiáng)。

1.8 16例臨床樣本收集及Western blotting實(shí)驗(yàn)

收取癌組織及癌旁組織，所有臨床樣本均按照離體40 min內(nèi)經(jīng)液氮速凍后保存于液氮罐的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行保存，所有用于總RNA提取的組織樣本都已添加RNA保護(hù)劑。所有樣本在收集前通過(guò)本單位倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者知情同意，符合指南規(guī)定。納入收入的標(biāo)本已臨床病理診斷確診為結(jié)直腸癌。

（4）在員工對(duì)“生態(tài)與人文環(huán)境保護(hù)”滿意度評(píng)價(jià)中，本文依據(jù)文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)出如下二級(jí)評(píng)價(jià)指標(biāo)：企業(yè)環(huán)境保護(hù)態(tài)度（U341）、企業(yè)生產(chǎn)中環(huán)境保護(hù)措施（U342）、企業(yè)參與社會(huì)生態(tài)環(huán)境計(jì)劃（U343）。

提取蛋白之后，BCA法測(cè)定上清濃度，變性后置于冰上，配制10%濃度的PAGE凝膠后進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)膜封閉，加入Fine test METTL27 一抗（CAT：FNab10887）；Proteintech β-actin 一抗（CAT：66009-1-Ig）過(guò)夜（1∶1000），洗膜后加入對(duì)應(yīng)兔、鼠二抗（1∶2000），室溫孵育2 h后加入ECL化學(xué)發(fā)光液，使用Bio-Rad化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行曝光，顯影。

1.9 細(xì)胞培養(yǎng)與qPCR實(shí)驗(yàn)

人腸上皮細(xì)胞NCM460 于含10%胎牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)，人腸癌SW480、SW620、HCT116 均于10%胎牛血清的高糖DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)，37 ℃、5%的CO、95%濕度培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá)到80%時(shí)進(jìn)行RNA提?。籖NA提取試劑盒（Mabio，RNT412-02），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Vazyme，R222-01），ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix 試劑盒（Vazyme，Q711-03）。引物（上海捷瑞），細(xì)胞均由廣東醫(yī)科大學(xué)中美腫瘤研究所提供。

引物序列：

5'-CTACCTCATGAAGATCCTCACCGA-'（β-actin,Forward）；5'-TTCTCCTTAATGTCACGCACGATT-3'（β-actin,Reverse）；5'-CAGGCCCGCCCCACAGT-3'（METTL27,Forward）；5'-GGCTCCCATCCACCCCA-3'（METTL27,Reverse）。

通過(guò)受試者工作特征（ROC）分析，比較結(jié)腸癌腫瘤與癌旁組織中的表達(dá)，檢驗(yàn)METTL27對(duì)結(jié)腸癌診斷的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)腸癌患者的臨床預(yù)后信息包括總生存期（OS）、疾病特異性生存期（DSS）。采用Kaplan-Meier分析、單因素和多因素Cox回歸分析進(jìn)行預(yù)后分析。R包：survival（3.2.10版本）用于生存資料的統(tǒng)計(jì)分析。使用R包：rms構(gòu)建列線圖和校準(zhǔn)圖，并進(jìn)行分析及可視化。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad Prism 8（GraphPad Software）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。Western blotting以及RT-PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，檢驗(yàn)前進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用檢驗(yàn)，方差不齊，采用檢驗(yàn)。未配對(duì)的雙尾測(cè)試用于比較兩組數(shù)據(jù)。參數(shù)比較采用卡方檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)。Spearman相關(guān)分析用于評(píng)估變量之間的相關(guān)性。采用單變量Logistic回歸分析METTL27的表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系。＜0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中顯示METTL27 mRNA水平在在不同腫瘤中高表達(dá)。在33種腫瘤類型中，METTL27在21 種腫瘤中顯著高表達(dá)，尤其是胃腸道腫瘤中（圖1A～B）。更具體地說(shuō)，在結(jié)腸癌腫瘤中METTL27的表達(dá)明顯高于癌周組織，配對(duì)樣本腫瘤中METTL27亦較正常表達(dá)更顯著（＜0.001，圖1C～D）。

2 結(jié)果

2.1 METTL27在結(jié)腸癌和其他腫瘤中的表達(dá)

訓(xùn)導(dǎo)他們的人是老崔，老崔是物業(yè)經(jīng)理，這些日子，停車事件頻頻發(fā)生，有涵養(yǎng)的老崔嘴上起泡，心里長(zhǎng)毛，天天在小區(qū)里東轉(zhuǎn)西轉(zhuǎn)，眼睛東瞄西掃，恨不得到哪里發(fā)現(xiàn)一塊新大陸。他的副手還帶著保安在背后嘲笑他，說(shuō)，這個(gè)小區(qū)有什么轉(zhuǎn)頭的，老崔這是找車位呢，還是找老鼠洞？

2.2 結(jié)腸癌中METTL27在TCGA差異表達(dá)基因及共表達(dá)基因

ROC曲線來(lái)證明METTL27在鑒別結(jié)腸癌診斷中的價(jià)值。結(jié)果顯示曲線下面積（AUC）為0.806，METTL27診斷結(jié)腸癌具有明顯的高敏感性和高特異性（圖6A）。K-M分析驗(yàn)證了METTL27對(duì)臨床生存的預(yù)測(cè)，如圖6 B-C所示，在總生存率（危險(xiǎn)比HR:2.18,＜0.001）、疾病的具體生存期（HR:1.92,=0.012）具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，METTL27高表達(dá)的結(jié)腸癌患者的預(yù)后較表達(dá)低的更差。單因素的Cox回歸分析（表2）結(jié)果顯示：METTL27高表達(dá)在臨床不良預(yù)后因素中具有更高的風(fēng)險(xiǎn)。在進(jìn)一步的多因素Cox回歸分析中顯示（表3），METTL27表達(dá)是總生存期（HR：2.908，=0.049）的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)疾病的具體生存期無(wú)顯著預(yù)測(cè)能力。但是，在多因素Cox回歸分析中，臨床分期，尤其是臨床M期和病理分期對(duì)臨床結(jié)果也具有預(yù)測(cè)優(yōu)勢(shì)。通過(guò)將臨床TNM，病理分期，脈管、淋巴侵犯等臨床預(yù)后因素納入列線圖，并構(gòu)建預(yù)后列線圖，并繪制校準(zhǔn)曲線來(lái)測(cè)試列線圖的有效性。結(jié)果顯示：結(jié)腸癌總生存期中其Cindex為0.787（圖6D），疾病特異性生存期預(yù)測(cè)C-index為0.882（圖6E）。校正曲線顯示均對(duì)1年、3年、5年臨床結(jié)果的3個(gè)列線圖進(jìn)行了理想的預(yù)測(cè)（圖6E、G）。

2.3 METTL27功能注釋富集分析及構(gòu)建蛋白PPI網(wǎng)絡(luò)

通過(guò)鑒定差異基因進(jìn)行了包括3類GO功能注釋分析：生物過(guò)程（BP），CC和分子功能（MF），以及KEGG途徑富集分析。如圖3A所示，BP功能富集結(jié)果包括：離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的再調(diào)節(jié)、表皮細(xì)胞分化、脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、脂質(zhì)分解代謝過(guò)程、鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)；CC功能富集結(jié)果：跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白復(fù)合物、離子通道復(fù)合體、蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物、DNA包裝復(fù)合物、陽(yáng)離子通道復(fù)合體；MF富集結(jié)果：被動(dòng)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性、底物特異性通道活性、酶抑制劑活性、生長(zhǎng)因子活性、鐵離子結(jié)合。圖3B中KEGG信號(hào)通路結(jié)果顯示：神經(jīng)活性配體-受體相互作用、CAMP信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路、味覺(jué)傳導(dǎo)、膽汁分泌、PPAR信號(hào)通路、類固醇激素生物合成、膽固醇代謝、脂肪消化吸收、尼古丁成癮。圖3C顯示通過(guò)構(gòu)建PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，與METTL27 相關(guān)的前十互作蛋白：BCCIP、BYSL、DDX55、FTSJ3、KRR1、LTV1、NIP7、NOB1、RPF1、TRMT112。圖3D顯示通過(guò)對(duì)差異基因分析，GSEA識(shí)別與METTL27相關(guān)的信號(hào)通路包括：白介素17信號(hào)通路、化學(xué)滲透偶聯(lián)法生成ATP、MHC信號(hào)通路、DNA甲基化、PRC2使組蛋白和DNA甲基化。

2.4 結(jié)腸癌中METTL27免疫功能相關(guān)性分析

通過(guò)對(duì)結(jié)腸癌中METTL27免疫浸潤(rùn)水平分析發(fā)現(xiàn)，METTL27 與多種免疫細(xì)胞具有相關(guān)性。METTL27 與NK CD56bright cells 呈正相關(guān)關(guān)系（圖4A，R=0.268，＜0.001），與T helper cells（R=-0.261，＜0.001）、Tcm（R=-0.19,＜0.001）、Th2 cells（R=-0.215，＜0.001）細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。更進(jìn)一步將METTL27分為高低表達(dá)組后，NK CD56bright cells（圖4B）、T helper cells（圖4C）、Tcm（圖4D）、Th2 cells（圖4E）浸潤(rùn)水平和圖4A保持一致。

2.5 結(jié)腸癌患者中METTL27表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

3.3.4 元數(shù)據(jù)采集入庫(kù)。對(duì)平臺(tái)中的元數(shù)據(jù)，包括平臺(tái)中心前置庫(kù)、匯集庫(kù)、基礎(chǔ)庫(kù)、業(yè)務(wù)主題數(shù)據(jù)庫(kù)等庫(kù)表結(jié)構(gòu)和數(shù)據(jù)資源的元數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)一的抽取、存儲(chǔ)和裝載入庫(kù)，支持元數(shù)據(jù)的手工錄入。

2.6 結(jié)腸癌患者中METTL27表達(dá)與臨床預(yù)后意義分析

差異分析以火山圖展示|log2（FC）|＞1&p.adj＜0.05閾值下的分子數(shù)目?；鹕綀D顯示滿足|log2（FC）|＞1&p.adj＜0.05 閾值的ID 有3960 個(gè)，在這閾值下，高表達(dá)（logFC為正）的數(shù)目有79個(gè)，低表達(dá)（logFC為負(fù)）的數(shù)目有3881個(gè)（圖2A）；共表達(dá)熱圖顯示了與METTL27正負(fù)相關(guān)的前十基因（圖2B）。

2.7 METTL27的表達(dá)水平在GEO、HPA數(shù)據(jù)庫(kù)中的驗(yàn)證

如圖7A所示，HPA數(shù)據(jù)庫(kù)中發(fā)現(xiàn)METTL27蛋白在結(jié)腸癌組織中存在較明顯的高表達(dá)。HPA數(shù)據(jù)庫(kù)中免疫組織化學(xué)染色顯示與正常組織相比，癌組織免疫組化染色更深，提示METTL27蛋白在結(jié)腸癌組織中存在較明顯的高表達(dá)；圖7B結(jié)果：GEO數(shù)據(jù)庫(kù)GSE83889數(shù)據(jù)集以及GSE164191數(shù)據(jù)集均顯示，與正常組織相比，METTL27在結(jié)腸癌中表達(dá)水平明更高。

2.8 qPCR在不同腸癌細(xì)胞株及16例腸癌組織中驗(yàn)證METTL27表達(dá)水平

如圖8A，培養(yǎng)人腸上皮細(xì)胞NCM460，以及人腸癌SW480、SW620、HCT116、CACO2、RKO、LOVO細(xì)胞，驗(yàn)證其相對(duì)于正常腸上皮細(xì)胞的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)腸癌細(xì)胞中METTL27表達(dá)水平高于正常NCM460細(xì)胞。同時(shí)，收集16例確診為腸癌的患者配對(duì)腸癌組織，如圖8B結(jié)果顯示：在16例配對(duì)的腸癌組織中，其中11對(duì)METTL27表達(dá)水平高于正常，其余5例無(wú)差異，未見(jiàn)有腸癌中METTL27表達(dá)水平低于正常組織（NATs：癌旁組織；Tumor：腸癌組織）。

2.9 Western blot實(shí)驗(yàn)在不同腸癌細(xì)胞株及4例腸癌組織中驗(yàn)證METTL27表達(dá)水平

同樣的，我們?cè)诓煌c癌細(xì)胞株以及組織標(biāo)本中驗(yàn)證了METTL27的表達(dá)水平。結(jié)果顯示：在不同腸癌細(xì)胞株中，相對(duì)于NCM460細(xì)胞，SW480、SW620、HCT116、CACO2、LOVO 細(xì)胞METTL27 表達(dá)均高于正常，而在RKO 細(xì)胞中低于正常細(xì)胞，總體而言，METTL27在大多數(shù)腸癌細(xì)胞的表達(dá)水平高于正常細(xì)胞（圖9A）。同時(shí)，在配對(duì)的4例腸癌組織中（N：NATs；T：Tumor），METTL27蛋白水平表達(dá)明顯高于癌旁配對(duì)組織（圖9B）。

企業(yè)需要對(duì)BIM技術(shù)進(jìn)行全面分析，真正掌握BIM技術(shù)在工程造價(jià)管理重點(diǎn)的作用，并結(jié)合企業(yè)自身實(shí)際情況，將BIM技術(shù)合理應(yīng)用于工程的投資決策階段、設(shè)計(jì)階段、招投標(biāo)階段、施工階段、竣工階段等，實(shí)現(xiàn)工程造價(jià)的信息化、標(biāo)準(zhǔn)化、科學(xué)化管理，促使BIM技術(shù)真正發(fā)揮自身價(jià)值，從而推動(dòng)企業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展。隨著我國(guó)建筑信息化的不斷深入和發(fā)展，我相信 BIM 技術(shù)將會(huì)更加全面、更加深入地被應(yīng)用到工程造價(jià)管理中的。

1.直接接觸型：如直接出現(xiàn)在被害人面前，被害人得以當(dāng)面面對(duì)行為人，而行為人經(jīng)拒絕后仍不間斷、持續(xù)跟追或糾纏被害人，后續(xù)甚至可能對(duì)被害人做出碰觸或攻擊行為。直接接觸型的跟追糾纏行為，可能為直接對(duì)被害人作出恐嚇行為、更進(jìn)一步對(duì)被害人作出財(cái)產(chǎn)甚至人身攻擊行為，當(dāng)然亦可能對(duì)被害人周遭熟識(shí)者為之。

3 討論

以往的研究對(duì)于METTL27是缺失的，現(xiàn)有的研究?jī)H報(bào)道了其在Williams-Beuren 綜合征中的作用。而在本研究中，我們首次報(bào)道了METTL27在腫瘤中的表達(dá)及作用，旨在通過(guò)分析TCGA-結(jié)腸癌數(shù)據(jù)集，重點(diǎn)關(guān)注結(jié)腸癌中甲基轉(zhuǎn)移酶METTL27的表達(dá)譜、臨床病理相關(guān)性和臨床意義。在TCGA數(shù)據(jù)中，METTL27在大多數(shù)腫瘤中顯著過(guò)表達(dá)。這些結(jié)果表明METTL27有潛力成為各種癌癥的診斷標(biāo)記。我們發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸癌腫瘤中METTL27表達(dá)顯著增加，這一結(jié)果也在GEO（結(jié)腸癌數(shù)據(jù)集GSE83889、GSE164191）以及HPA數(shù)據(jù)庫(kù)得到證實(shí)，METTL27的表達(dá)在結(jié)腸癌中可能是一個(gè)很好的診斷標(biāo)志物，其AUC超過(guò)0.8。此外，我們還發(fā)現(xiàn)METTL27與結(jié)腸癌的臨床N分期、病理分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移、BMI指數(shù)相關(guān)，并具有高風(fēng)險(xiǎn)比（HR＞1），進(jìn)一步證實(shí)METTL27的表達(dá)可能與結(jié)腸癌的惡性程度有關(guān)。從生存數(shù)據(jù)來(lái)看，METTL27 mRNA高表達(dá)的患者OS、DSS較差，進(jìn)一步的Cox回歸分析顯示，METTL27表達(dá)是OS的獨(dú)立預(yù)后因素。此外，列線圖以及校準(zhǔn)曲線顯示，METTL27 對(duì)結(jié)腸癌進(jìn)行了理想的預(yù)測(cè)。METTL27的普遍上調(diào)和預(yù)后預(yù)測(cè)結(jié)果表明，它是一個(gè)極具潛力的結(jié)腸癌預(yù)后標(biāo)志物。進(jìn)一步通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了METTL27的表達(dá)水平，與生物信息學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果保持一致，METTL27在腸癌組織中表達(dá)明顯高于正常組織。

WBSCR22被鑒定的蛋白質(zhì)是S-（50-腺苷）-l-甲硫氨酸（SAM）依賴的rRNA甲基轉(zhuǎn)移酶，蛋白是核糖體前RNA加工所必需的，并介導(dǎo)人類18S rRNA中G1639的N7 甲基化。蛋白METTL27（WBSCR27）與WBSCR22具有較高的同源性，序列生物信息學(xué)分析表明該蛋白也屬于甲基轉(zhuǎn)移酶家族。然而，與WBSCR22相比，METTL27的確切生物學(xué)功能仍不清楚。因此，基于我們認(rèn)為METTL27在結(jié)腸癌中是一個(gè)不良的風(fēng)險(xiǎn)因子，為了更好地理解其在結(jié)腸癌中的潛在功能，我們鑒定了METTL27的差異表達(dá)基因，初步對(duì)其進(jìn)行了基因功能注釋，發(fā)現(xiàn)METTL27在跨膜物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)以及脂質(zhì)代謝進(jìn)程中顯著富集。脂質(zhì)代謝在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮著重要的角色，腫瘤進(jìn)展過(guò)程中，腫瘤微環(huán)境中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的可用性不斷變化，因而腫瘤細(xì)胞利用脂質(zhì)代謝來(lái)維持其快速增殖，存活，遷移，侵襲和轉(zhuǎn)移。而在GSEA識(shí)別的5條信號(hào)通路上，白介素17信號(hào)通路近年備受關(guān)注，IL-17是一種由活化的T細(xì)胞分泌的促炎細(xì)胞因子，已被證明可以促進(jìn)胃癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生。另外，GSEA識(shí)別的另一條信號(hào)通路——MHC（主要組織相容性復(fù)合物）信號(hào)通路，對(duì)于此生物標(biāo)志物，越來(lái)越多的研究表明多種癌癥類型中，MHC I類和II類的表達(dá)可能是指導(dǎo)免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療的有用生物標(biāo)志物。Paula等認(rèn)為在早期HER2陰性的乳腺癌中，MHC-II表達(dá)比PD-L1表達(dá)更能預(yù)測(cè)對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑的反應(yīng)。MHC-I類和II類作為生物標(biāo)志物都很重要，這主要取決于我們選擇的免疫治療反應(yīng)（或方案）的哪個(gè)階段作為免疫檢查點(diǎn)抑制劑的治療靶點(diǎn)。因此，MHC分析是免疫聯(lián)合治療一個(gè)新的方向。在另一個(gè)識(shí)別的GSEA通路中，顯示METTL27可能在DNA甲基化以及PRC2（多梳蛋白抑制復(fù)合物2）介導(dǎo)的組蛋白和DNA甲基化中發(fā)揮作用。在正常黏膜向腺瘤，息肉向腫瘤的進(jìn)展過(guò)程中，可以顯而易見(jiàn)地看到發(fā)生甲基化的基因大幅增加。Esteller研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸腺瘤中MGMT、MLH1等DNA修復(fù)基因的異常甲基化可能促進(jìn)腺瘤發(fā)生惡變。PRC2，可對(duì)H3K27三甲基化（H3K27me3），是腫瘤發(fā)生發(fā)展的一部分，PRC2癌癥中的關(guān)鍵作用使它成為表觀遺傳學(xué)癌癥治療的治療靶點(diǎn)。結(jié)合以上的研究結(jié)果及國(guó)內(nèi)外認(rèn)識(shí)，腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多方面因素決定的，是一個(gè)多步驟參與的復(fù)雜過(guò)程，而對(duì)于METTL27功能以及通路研究的發(fā)現(xiàn)有助于揭示其在結(jié)腸癌中的作用和加強(qiáng)對(duì)結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的了解。

除此之外，我們還分析了METTL27表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)之間的潛在關(guān)系。METTL27表達(dá)與輔助T細(xì)胞、輔助T細(xì)胞2型、中央記憶型T細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。T 輔助細(xì)胞在炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用，可促進(jìn)炎癥性腸病和結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制中的炎癥反應(yīng)。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-10、IL-13，促進(jìn)體液免疫。Th1/Th2比例降低可通過(guò)相關(guān)細(xì)胞因子分泌異常，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，同時(shí)增強(qiáng)腫瘤免疫逃避功能，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和進(jìn)展。目前Th1/Th2比例失衡在腫瘤發(fā)生及進(jìn)展中作用機(jī)制尚不明確，仍需要進(jìn)一步研究。多項(xiàng)研究表明，與效應(yīng)記憶T（Tem）細(xì)胞和效應(yīng)T（Teff）細(xì)胞相比，中央記憶（Tcm）T細(xì)胞顯示出優(yōu)異的持久性和抗腫瘤免疫能力。我們希望揭示驅(qū)動(dòng)記憶T細(xì)胞形成的分子途徑，這將對(duì)發(fā)展優(yōu)化癌癥免疫治療的合理方法至關(guān)重要。

綜上所述，我們首次報(bào)道了METTL27在腫瘤中的表達(dá)水平，并分析推測(cè)了其在結(jié)腸癌中的潛在預(yù)后價(jià)值，METTL27可能具有極大潛力作為診斷結(jié)腸癌的腫瘤標(biāo)記物。高M(jìn)ETTL27表達(dá)顯示了低免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，而且對(duì)于基因本身的功能和具體的信號(hào)通路我們也做出了一定的預(yù)測(cè)，但是這些結(jié)果仍需要一系列的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證?？傊?，METTL27可能是一種新的結(jié)腸癌預(yù)后預(yù)測(cè)因子，進(jìn)一步的機(jī)制研究可為結(jié)腸癌的早期診斷以及發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供新的靶點(diǎn)。

銀行信息技術(shù)管理作為一項(xiàng)比較復(fù)雜的工作，其所涉及的范圍比較廣泛，并且具備有一定的管理難度。針對(duì)這一問(wèn)題，也就要求各銀行能夠?qū)π畔⒐芾淼闹匾杂幸粋€(gè)清晰的認(rèn)知，并且能夠積極運(yùn)用信息化技術(shù)來(lái)提升自身的管理水平跟業(yè)務(wù)服務(wù)水平，這樣才能夠促使銀行自身的市場(chǎng)核心競(jìng)爭(zhēng)能力得到進(jìn)一步的提升，并提升其在國(guó)際市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)水平。