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        微小RNA-204-5p靶向蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B基因?qū)θ毖鯊?fù)氧誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響

        2022-04-29 08:01:06李瓊王磊高波
        安徽醫(yī)藥 2022年5期
        關(guān)鍵詞:復(fù)氧熒光素酶心肌細(xì)胞

        李瓊,王磊,高波

        急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是由冠狀動脈急性持續(xù)缺血缺氧引起心肌壞死的心血管疾病,具有極高的致死率。目前,臨床主要采用溶栓、經(jīng)皮冠狀動脈介入治療和冠狀動脈搭橋手術(shù)等手段恢復(fù)心肌血液供應(yīng)。然而,一旦心肌供血恢復(fù),會引起心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激,導(dǎo)致細(xì)胞損傷和凋亡[1]。近年來,越來越多的數(shù)據(jù)表明,微小RNA(microRNA,miRNA)的表達(dá)失調(diào)與人類多種心血管疾病有關(guān)[2],包括缺氧復(fù)氧損傷[3]。miR-204-5p位于人類染色體9q21.12,Xiao 等[4]研究發(fā)現(xiàn),缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)下心肌細(xì)胞中miR-204-5p 表達(dá)下調(diào),miR-204-5p 通過靶向自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ調(diào)控缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬;此外,Qiu 等[5]研究表明,miR-204-5p 通過調(diào)節(jié)沉默調(diào)節(jié)蛋白1(Silencing regulatory protein 1,sirt1)介導(dǎo)的自噬,保護(hù)H9C2 細(xì)胞免受缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的損傷。然而,miR-204-5p 對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)下的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響和機制仍有待闡明。本研究以心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型模擬AMI 過程,旨在闡明miR-204-5p 對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)下的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡的影響,探索其分子機制,以期為臨床治療AMI提供新思路。

        1 材料與方法

        1.1 實驗材料大鼠胚胎心肌細(xì)胞株H9C2購于上海中科院典型培養(yǎng)物保藏細(xì)胞庫;MTT 試劑盒購于美國Sigma 公司;熒光素酶報告基因檢測試劑盒均購自美國Promega 公司;乳酸脫氫酶(LDH)、心肌肌鈣蛋白(cTnT)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧簇(ROS)和丙二醛(MDA)檢測試劑盒南京建成生物工程研究所;PCR 引物、miR-con、miR-204-5p mimics、pcDNA、pcDNA-蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B(The protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)及WT-PTP1B 和MUT-PTP1B 的構(gòu)建和測序均由上海生工公司提供。膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)試劑盒購于北京索萊寶生物科技有限公司;Trizol 試劑和western 相關(guān)試劑購于上海碧云天公司;細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)、B 細(xì)胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相關(guān)X(Bax)等鼠源Ⅰ抗購于美國Santa Cruz公司;兔源PTP1B抗體購于Abcam公司;HRP標(biāo)記的羊抗兔和羊抗鼠Ⅱ抗購于武漢博士德公司;LipofectamineTM2000購于Invitrogen公司。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 H9C2 心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型的建立用高糖DMEM 培養(yǎng)基(含10%胎牛血清和1%青鏈霉素混合液)在37 ℃含5%二氧化碳的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)H9C2。將H9C2 細(xì)胞培養(yǎng)基更換為無糖DMEM培養(yǎng)基,置于缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 h,復(fù)氧時更換為新鮮高糖DMEM 培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)6 h,標(biāo)記為缺氧復(fù)氧組;未經(jīng)任何處理的H9c2細(xì)胞標(biāo)記為空白組。

        1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和實驗分組收集對數(shù)期的H9c2細(xì)胞,分別將miR-con、miR-204-5p mimics 轉(zhuǎn)染至H9c2細(xì)胞,轉(zhuǎn)染成功后按照“1.2.1”方法進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理,分別標(biāo)記為缺氧復(fù)氧+miR-con 組、缺氧復(fù)氧+miR-204-5p 組。后續(xù)實驗中為進(jìn)一步驗證miR-204-5p 是通過調(diào)控PTP1B 表達(dá)進(jìn)而影響缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激,將miR-204-5p mimics 和pcDNA 共轉(zhuǎn)染至H9c2 細(xì)胞,進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理后標(biāo)記為缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA 組;將miR-204-5p mimics 和pcDNA-PTP1B 共轉(zhuǎn)染至H9c2 細(xì)胞,進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理后標(biāo)記為缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA-PTP1B 組。轉(zhuǎn)染方法參照LipofectamineTM2000使用說明書。

        1.2.3 實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRTPCR)檢測用Trizol 法提取H9C2 細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以cDNA為模板制備qRT-PCR反應(yīng)體系,上實時熒光定量PCR 儀檢測miR-204-5p 和PTP1B mRNA的相對表達(dá)量。

        1.2.4 熒光素酶報告基因?qū)嶒?TargetScan 預(yù)測發(fā)現(xiàn)miR-204-5p 與PTP1B 序列的3’-UTR 存在結(jié)合位點。將含有結(jié)合位點的PTP1B3’-UTR 片段或cDNA插入熒光素酶報告基因載體構(gòu)建WT-PTP1B、MUTPTP1B。分別將WT-PTP1B、MUT-PTP1B 與miR-204-5p mimics 共轉(zhuǎn)染至H9c2 細(xì)胞,收集轉(zhuǎn)染48 h細(xì)胞并測定各組細(xì)胞中熒光素酶活性。

        1.2.5 四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色(MTT)法檢測細(xì)胞增殖收集各組對數(shù)生長期H9c2細(xì)胞,細(xì)胞接種至96 孔板,每孔加入10μL 的MTT 試劑(5 g/L)孵育4 h,棄上清,向各孔內(nèi)加入150μL的DMSO,振蕩10 min,利用酶標(biāo)儀檢測各孔490 nm 處吸光度值(OD),細(xì)胞存活率(%)=(處理組OD/對照組OD)×100%。

        1.2.6 檢測LDH、cTnT、SOD、MDA、ROS 水平細(xì)胞分組處理后,收集細(xì)胞培養(yǎng)液,按試劑盒操作說明檢測LDH、cTnT含量。同時收集各組H9C2細(xì)胞,加入RIPA 裂解液,冰上裂解30 min,低溫下12 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心15 min,收集上清液,按照試劑盒說明書檢測SOD、MDA、ROS水平。

        1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡用1×binding buffer 重懸各組細(xì)胞調(diào)整其濃度為1×105個/毫升。取5μL的Annexin V/FITC 和10μL的PI溶液依次加入到100 μL 細(xì)胞懸液中,避光孵育15 min,補加1×binding buffer至500μL后,于1 h內(nèi)上機檢測。

        1.2.8 蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)檢測 RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白,每組取30 μg 蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE 電泳,經(jīng)濕法轉(zhuǎn)膜、脫脂奶粉封閉后,加入各蛋白Ⅰ抗(1∶500 稀釋)及內(nèi)參β-actin 一抗(1∶1 000 稀釋),洗膜后,加入Ⅱ抗(1∶2 000),化學(xué)發(fā)光顯影,放入自動凝膠成像系統(tǒng)拍照,Image J 軟件測定各蛋白條帶相對灰度值。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)方法用SPSS 19.0 進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,所有數(shù)據(jù)均用±s表示。兩組數(shù)據(jù)的比較采用t檢驗;多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,組間多重比較采用SNK-q檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 缺氧復(fù)氧處理后心肌細(xì)胞中miR-204-5p 和PTP1B 表達(dá)情況與空白組比較,缺氧復(fù)氧組心肌細(xì)胞miR-204-5p 表達(dá)降低,PTP1BmRNA 和PTP1B蛋白的表達(dá)升高(P<0.05),見表1和圖1。

        表1 缺氧復(fù)氧處理心肌細(xì)胞影響miR-204-5p和PTP1B表達(dá)/±s

        表1 缺氧復(fù)氧處理心肌細(xì)胞影響miR-204-5p和PTP1B表達(dá)/±s

        注:①與空白組向比較,P<0.05。

        組別空白組缺氧復(fù)氧組t值P值重復(fù)次數(shù)99 miR-204-5p 1.00±0.09 0.21±0.04①24.06<0.001 PTP1B mRNA 1.00±0.13 6.74±0.58①28.97<0.001 PTP1B蛋白0.31±0.05 0.76±0.08①14.31<0.001

        圖1 檢測心肌細(xì)胞中PTP1B蛋白表達(dá)

        2.2 miR-204-5p 靶向調(diào)控PTP1B 的表達(dá) Targetscan 預(yù)測到miR-204-5p 與PTP1B 序列的3’UTR存在部分連續(xù)結(jié)合位點,見圖2A。當(dāng)上調(diào)miR-204-5p 表達(dá)后,轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-PTP1B 的3’UTR 報告基因心肌細(xì)胞的熒光素酶活性顯著下降(P<0.05),而轉(zhuǎn)染MUT-PTP1B 的3’UTR 報告基因心肌細(xì)胞的熒光素酶活性無顯著變化(P>0.05),見表2。當(dāng)上調(diào)miR-204-5p 表達(dá)后,心肌細(xì)胞中PTP1B 蛋白的表達(dá)顯著降低;當(dāng)下調(diào)miR-204-5p 表達(dá)后,心肌細(xì)胞中PTP1B 蛋白的表達(dá)顯著增加(P<0.05),見表3 和圖2B。提示PTP1B 是miR-204-5p 的靶基因,miR-204-5p可負(fù)性調(diào)控PTP1B的表達(dá)。

        表2 雙熒光素酶報告實驗/±s

        表2 雙熒光素酶報告實驗/±s

        組別miR-con組miR-204-5p組t值P值重復(fù)次數(shù)99 WT-PTP1B 1.00±0.09 0.35±0.05 18.94<0.001 MUT-PTP1B 1.46±0.12 1.52±0.15 0.94 0.363

        表3 miR-204-5p靶向PTP1B調(diào)控其表達(dá)/±s

        表3 miR-204-5p靶向PTP1B調(diào)控其表達(dá)/±s

        注:①與miR-con組比較,P<0.05。②與anti-miR-con組比較,P<0.05。

        組別miR-con組miR-204-5p組anti-miR-con組anti-miR-204-5p組F值P值重復(fù)次數(shù)9999 PTP1B蛋白0.31±0.04 0.06±0.03①0.29±0.05 0.45±0.06②109.22<0.001

        圖2 miR-204-5p靶向調(diào)控PTP1B的表達(dá):A為PTP1B的3’UTR中含有與miR-204-5p互補的核苷酸序列;B為心肌細(xì)胞中PTP1B蛋白的表達(dá)

        2.3 過表達(dá)PTP1B逆轉(zhuǎn)miR-204-5p對缺氧復(fù)氧處理誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞增殖的影響與空白組相比,缺氧復(fù)氧處理顯著抑制心肌細(xì)胞的存活,促進(jìn)PTP1B表達(dá),抑制Cyclin D1 表達(dá),促進(jìn)LDH 和cTnT 的釋

        放;與缺氧復(fù)氧+miR-con 組相比,缺氧復(fù)氧+miR-204-5p 組心肌細(xì)胞存活率顯著升高,PTP1B 表達(dá)含量顯著降低,Cyclin D1 表達(dá)顯著升高;與缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA 組比較,缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA-PTP1B 組心肌細(xì)胞存活率顯著降低,PTP1B表達(dá)和LDH 含量顯著升高,Cyclin D1 表達(dá)顯著降低,LDH 和cTnT 含量顯著升高(P<0.05),見表4 和圖3。以上結(jié)果表明,缺氧復(fù)氧處理可顯著抑制心肌細(xì)胞存活,而miR-204-5p 通過下調(diào)PTP1B 表達(dá)促進(jìn)心肌細(xì)胞存活。

        圖3 檢測心肌細(xì)胞中Cyclin D1蛋白表達(dá)

        表4 轉(zhuǎn)染miR-204-5p促進(jìn)缺氧復(fù)氧處理心肌細(xì)胞存活率/±s

        表4 轉(zhuǎn)染miR-204-5p促進(jìn)缺氧復(fù)氧處理心肌細(xì)胞存活率/±s

        注:①與空白組向比較,P<0.05。②與缺氧復(fù)氧+miR-con組向比較,P<0.05。③與缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA組向比較,P<0.05。

        組別空白組缺氧復(fù)氧組缺氧復(fù)氧+miR-con組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA-PTP1B組F值P值重復(fù)次數(shù)999999 PTP1B 0.27±0.07 0.81±0.05①0.78±0.04 0.42±0.18②0.46±0.18 0.61±0.18③23.09<0.001 Cyclin D1 0.75±0.06 0.34±0.03①0.31±0.04 0.56±0.06②0.61±0.05 0.38±0.04③120.43<0.001 LDH/(U/L)480.76±36.96 895.91±51.84①850.83±62.11 629.63±54.59②657.84±56.76 721.85±55.49③72.98<0.001 cTnT/(μg/L)0.26±0.04 0.73±0.08①0.75±0.09 0.42±0.05②0.44±0.06 0.63±0.08③72.16<0.001細(xì)胞存活/%100.00±6.80 55.99±4.69①52.72±4.59 78.37±6.48②78.89±5.74 61.23±6.28③85.49<0.001

        2.4 過表達(dá)PTP1B逆轉(zhuǎn)miR-204-5p對缺氧復(fù)氧處理誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響與空白組比較,缺氧復(fù)氧處理后心肌細(xì)胞ROS 水平顯著提高,SOD 活力顯著降低,MDA 含量顯著升高;與缺氧復(fù)氧+miR-con 組比較,缺氧復(fù)氧+miR-204-5p 組心肌細(xì)胞SOD 活力顯著升高,ROS 水平顯著降低,MDA含量顯著降低;與缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA 組比較,缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA-PTP1B 組心肌細(xì)胞SOD 活力降低,ROS 水平顯著提高,MDA 含量升高(P<0.05),見表5。結(jié)果表明,缺氧復(fù)氧可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞氧化損傷,miR-204-5p 通過下調(diào)PTP1B 表達(dá)則提高抗氧化物酶SOD的活力,降低MDA含量和細(xì)胞內(nèi)ROS水平,對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。

        表5 過表達(dá)PTP1B逆轉(zhuǎn)miR-204-5p對缺氧復(fù)氧處理誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響/±s

        表5 過表達(dá)PTP1B逆轉(zhuǎn)miR-204-5p對缺氧復(fù)氧處理誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響/±s

        注:①與空白組向比較,P<0.05。②與缺氧復(fù)氧+miR-con組向比較,P<0.05。③與缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA組向比較,P<0.05。

        組別空白組缺氧復(fù)氧組缺氧復(fù)氧+miR-con組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA-PTP1B組F值P值重復(fù)次數(shù)9 99999 SOD/(U/L)24.60±1.34 9.85±0.87①10.61±0.95 16.39±0.78②17.46±1.27 12.53±0.86③255.35<0.001 ROS熒光強度486.53±75.69 1486.24±162.087①1557.26±156.86 789.57±93.62②726.75±86.45 1236.27±126.58③118.14<0.001 MDA/(nmol/mL)4.83±0.35 15.73±1.18①15.35±1.78 7.84±0.85②8.13±1.09 12.21±1.32③127.54<0.001

        2.5 過表達(dá)PTP1B逆轉(zhuǎn)miR-204-5p對缺氧復(fù)氧處理誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響與空白組比較,缺氧復(fù)氧處理顯著抑制心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá),促進(jìn)Bax 蛋白表達(dá),促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡;與缺氧復(fù)氧+miR-con 組比較,缺氧復(fù)氧+miR-204-5p 組心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高,Bax蛋白表達(dá)顯著降低,細(xì)胞凋亡率降低;與缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA 組比較,缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA-PTP1B 組心肌細(xì)胞Bcl-2 蛋白表達(dá)顯著降低,Bax 蛋白表達(dá)顯著升高,細(xì)胞凋亡率升高(P<0.05),見表6 和圖4。以上結(jié)果表明,缺氧復(fù)氧處理可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡,而miR-204-5p 通過下調(diào)PTP1B 表達(dá)可抑制缺氧復(fù)氧處理誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。

        表6 轉(zhuǎn)染miR-204-5p抑制缺氧復(fù)氧處理心肌細(xì)胞凋亡/±s

        表6 轉(zhuǎn)染miR-204-5p抑制缺氧復(fù)氧處理心肌細(xì)胞凋亡/±s

        注:①與空白組向比較,P<0.05。②與缺氧復(fù)氧+miR-con組向比較,P<0.05。③與缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA組向比較,P<0.05。

        組別空白組缺氧復(fù)氧組缺氧復(fù)氧+miR-con組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA組缺氧復(fù)氧+miR-204-5p+pcDNA-PTP1B組F值P值重復(fù)次數(shù)9 99999 Bcl-2蛋白0.67±0.05 0.14±0.03①0.18±0.03 0.45±0.05②0.40±0.04 0.22±0.03③237.52<0.001 Bax蛋白0.21±0.04 0.85±0.06①0.89±0.07 0.34±0.03②0.41±0.04 0.57±0.06③256.77<0.001細(xì)胞凋亡率/%5.57±0.72 23.26±1.82①22.81±1.44 13.66±1.35②12.59±0.96 18.38±1.16③249.22<0.001

        圖4 檢測心肌細(xì)胞中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)

        3 討論

        AMI是臨床最常見的心血管疾病之一。心肌細(xì)胞損傷發(fā)生在缺血再灌注損傷后的心肌組織中,氧化應(yīng)激是心肌缺血再灌注損傷時心肌損傷擴大的重要因素,在急性心肌梗死中起重要作用[6]。

        近年來,miRNA 在心血管疾病中的作用引起研究者的興趣,包括miR-223-3p[7]和miR-210[8]在內(nèi)的許多miRNA 參與心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷和凋亡。此外,Li 等[9]研究發(fā)現(xiàn)miR-340-5p 通過調(diào)節(jié)Act1/NF-κB通路對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激具有保護(hù)作用。目前,對miR-204-5p 的研究主要集中在腫瘤領(lǐng)域,其在心血管疾病中的作用并完全闡明。Koyama 等[10]研究發(fā)現(xiàn),miR-204-5p 是醛固酮刺激心肌細(xì)胞中t 型鈣通道表達(dá)的必需基因;Yu等[11]研究表明,敲減lncRNA AK139328 通過調(diào)控miR-204-3p 表達(dá),抑制心肌細(xì)胞自噬,可減輕糖尿病小鼠心肌缺血/再灌注損傷;此外,miR-204通過靶向LC3-Ⅱ?qū)θ毖俟嘧⒄T導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬具有抑制作用[4]。PTP1B 是蛋白酪氨酸磷酸酶家族成員之一,廣泛存在于心臟組織中,與心血管疾病密切相關(guān)[12]。PTP1B的缺失通過調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬可消除內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起的心肌功能障礙[13]。PTP1B還是循環(huán)ADP 核糖體誘導(dǎo)心室肌細(xì)胞鈣離子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)因子[14]。此外,miR-135a 通過靶向PTP1B 對大鼠心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用[15]。生物信息學(xué)分析顯示,PTP1B 是miR-204-5p 潛在靶基因,但miR-204-5p 能否介導(dǎo)PTP1B 表達(dá)調(diào)控缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激尚未可知。

        本研究首先檢測了缺氧復(fù)氧處理的心肌細(xì)胞中miR-204-5p 和PTP1B 的表達(dá),結(jié)果顯示,缺氧復(fù)氧處理可抑制miR-204-5p 表達(dá),促進(jìn)PTP1B 表達(dá)。進(jìn)一步研究證實miR-204-5p 可靶向負(fù)性調(diào)控PTP1B 的表達(dá),于是推測miR-204-5p 通過下調(diào)PTP1B參與對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的調(diào)控。當(dāng)心肌損傷發(fā)生時,LDH和cTnT釋放將明顯增加,通過檢測細(xì)胞培養(yǎng)液LDH 和cTnT 的滲漏率能夠有效反映細(xì)胞損傷程度[16]。ROS 是引起氧化應(yīng)激的主要因子,氧化應(yīng)激引起細(xì)胞損傷,導(dǎo)致終產(chǎn)物MDA 的累積[17]。MDA 含量可以反映氧自由基攻擊引起的細(xì)胞膜損傷的嚴(yán)重程度[18]。研究人員發(fā)現(xiàn),在缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌損傷中ROS和MDA的水平升高,超氧化物歧化酶SOD 活性降低[19]。本研究中,缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)后,心肌細(xì)胞存活率降低,細(xì)胞上清液中LDH 和cTnT 含量顯著升高,細(xì)胞內(nèi)MDA和ROS 水平顯著升高,而超氧化物歧化酶SOD 水平顯著降低,細(xì)胞凋亡率增加;而上調(diào)miR-204-5p 可以促進(jìn)心肌細(xì)胞存活,抑制LDH 和cTnT 的釋放,抑制細(xì)胞內(nèi)MDA 和ROS 水平,增加SOD 水平,抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。此外,我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)PTP1B 可部分逆轉(zhuǎn)miR-204-5p 對心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡的影響。這些結(jié)果表明,miR-204-5p 通過靶向PTP1B 表達(dá)能夠保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激。

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