段培培

（遼寧省朝陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,遼寧朝陽(yáng) 122000）

奶牛疫病防控中的藥敏實(shí)驗(yàn)

段培培

（遼寧省朝陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,遼寧朝陽(yáng) 122000）

為研究探討奶牛臨床型乳腺炎的發(fā)病率、常見(jiàn)病原菌類(lèi)型及給藥方案，在朝陽(yáng)市某一奶牛場(chǎng)采集乳樣，用微生物學(xué)方法對(duì)臨床型乳腺炎進(jìn)行了病原體分離及體外抗生素敏感性試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 待檢乳樣

待檢乳樣5份，來(lái)自朝陽(yáng)市某奶牛場(chǎng)，奶牛患臨床型乳腺炎的患病乳區(qū)。奶牛品種為中國(guó)-荷斯坦，體重約500 kg。

1.1.2 培養(yǎng)基

普通瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、

1.1.3 儀器與設(shè)備

電熱恒溫培養(yǎng)箱、座式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器、試管、培養(yǎng)皿、移液器、酒精燈、接種環(huán)等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基的制備

普通瓊脂培養(yǎng)基的制備：稱(chēng)取瓊脂10g加到500 ml普通肉湯內(nèi)，加熱煮沸，瓊脂融化過(guò)程中需不斷攪拌，并控制火力，調(diào)整pH值為7.4～7.6，121℃高壓蒸汽滅菌15min，取出待溫度降至50℃時(shí)，倒入滅菌培養(yǎng)皿，蓋上皿蓋，在桌上輕輕回轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基平鋪于皿底。

鮮血瓊脂培養(yǎng)基的制備：取備用普通瓊脂l00 ml融化后，待冷卻至40℃～50℃時(shí)，向其中加入5%無(wú)菌的綿羊抗凝血，混勻，倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，凝固后放入37℃過(guò)夜，無(wú)菌檢驗(yàn)合格后置4℃冷藏備用。

1.2.2 病原體的分離培養(yǎng)

乳樣培養(yǎng)：用一次性注射器抽取0.5 ml的待檢乳汁傾注到培養(yǎng)平皿的一端，然后勻速晃動(dòng)平皿并慢慢傾斜平皿，使乳汁均勻地覆蓋在整個(gè)平皿上，放入37℃溫箱培養(yǎng)24 h。

細(xì)菌的純培養(yǎng)：取每份乳樣按乳樣的培養(yǎng)方法，分別接種于普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，24 h后，觀(guān)察長(zhǎng)出的菌落形態(tài)，根據(jù)菌落的形態(tài)、大小、顏色等將菌落大致分類(lèi)。挑取菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢。根據(jù)鏡檢觀(guān)察到的細(xì)菌形態(tài)、革蘭氏染色特點(diǎn)仔細(xì)進(jìn)行分類(lèi)，排除環(huán)境中常存在的無(wú)致病性細(xì)菌。將挑選出來(lái)的細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上作畫(huà)線(xiàn)分離培養(yǎng)，注意鏈球菌需用鮮血瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。37℃溫箱培養(yǎng)24 h后，取出培養(yǎng)皿，挑取單個(gè)菌落，再次染色、鏡檢，不含雜菌者移植于瓊脂斜面培養(yǎng)，所得到的培養(yǎng)物，即為純培養(yǎng)物，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

細(xì)菌的鑒別培養(yǎng)：在純培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，將細(xì)菌純化物分別接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、血液瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h后觀(guān)察并記錄結(jié)果。

1.3 結(jié)果

在患有臨床型乳腺炎的乳區(qū)中，選取5個(gè)乳區(qū)，采樣進(jìn)行分離，分離到的菌株，主要是鏈球菌和葡萄球菌。

2 藥敏試驗(yàn)

本次藥敏試驗(yàn)采用圓紙片擴(kuò)散試驗(yàn)法。

操作方法：取待檢細(xì)菌純化物，用滅菌接種環(huán)致密畫(huà)線(xiàn)于瓊脂平板表面。用無(wú)菌鑷子將藥敏圓紙片分別貼于培養(yǎng)基表面，各藥敏片之間距離要相等，每平皿內(nèi)5片，37℃培養(yǎng)24h后，測(cè)量抑菌圈直徑。

結(jié)果判定：根據(jù)藥敏片周?chē)袩o(wú)抑菌圈及其直徑（單位：mm）大小，來(lái)判定該菌對(duì)各種藥物的敏感程度，分為高度敏感（R＞16）、中度敏感（9≤R≤16）、低度敏感（R＜9）和不敏感（R＝0）四種。

3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果與分析

將分離鑒定出的病原菌種，鏈球菌取3個(gè)菌落，葡萄球菌取2個(gè)菌落。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表。

抗生素敏感試驗(yàn)結(jié)果 單位mm

由表可知，慶大霉素、丁胺卡那、氨芐西林和頭孢唑啉鈉對(duì)鏈球菌的抑制效果較好，紅霉素、丁胺卡那、頭孢唑啉鈉對(duì)葡萄球菌的抑制效果較好，青霉素、磺胺嘧啶鈉和四環(huán)素的抑菌效果不理想，呈現(xiàn)不同程度的耐藥。

4 結(jié)論

在備檢乳樣中，引起臨床型乳腺炎的主要致病菌為無(wú)乳鏈球菌，其次是金黃色葡萄球菌。丁胺卡那、頭孢唑啉鈉對(duì)乳腺炎主要致病菌的抑制效果很好，臨床上可用于治療奶牛乳腺炎。