丁 軍，付子琳，和俊豪，段曉微，馬 露，卜登攀，2*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院與世界農(nóng)用林業(yè)中心農(nóng)用林業(yè)與可持續(xù)畜牧業(yè)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，北京100193)

外泌體(exosomes)存在于正常生理或者病理?xiàng)l件下的各種體液中，如血液[1]、尿液[2]、腦脊液、支氣管灌洗液、精液[3]、腹水、汗液、唾液、淚液、乳汁和淋巴液等[4-5]。它是由細(xì)胞分泌到胞外的納米級(jí)囊狀小泡，外包磷脂雙分子層，內(nèi)含核酸、蛋白質(zhì)和磷脂，呈類細(xì)胞的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，大小在30～150 nm之間[6]。與其他類型的細(xì)胞外囊泡(微囊泡、凋亡小體)相比，外泌體在大小、生物合成和內(nèi)含物上存在不同[7]。外泌體，最早(1983年)是由Pan等[8]研究體外培養(yǎng)的綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞向成熟紅細(xì)胞分化過(guò)程中，在細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)并分離得到的一種30～150 nm的細(xì)胞外膜性小囊泡。之后研究發(fā)現(xiàn)，這種細(xì)胞外囊泡是受調(diào)控的，非隨機(jī)地包裹mRNAs、miRNAs、DNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)等物質(zhì)[9-12]，并通過(guò)胞吐、融合等方式把內(nèi)含物釋放到細(xì)胞外，然后由臨近的或遠(yuǎn)隔的受體細(xì)胞接受信號(hào)而發(fā)揮生理維護(hù)或者病理修復(fù)的作用[13]。外泌體作為細(xì)胞間信號(hào)標(biāo)志物之一，在細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)上擁有極大的生物學(xué)價(jià)值[14-15]，同時(shí)在疾病的診斷、治療和預(yù)防上也發(fā)揮極大的作用。例如在阿爾茨海默病和帕金森綜合征的診斷中，外泌體參與了β-淀粉樣蛋白和α-突觸核蛋白的傳播[16-18]；在癌癥的研究上，外泌體還具有抗腫瘤[19]及腫瘤生物標(biāo)記作用[20]。

1 外泌體的產(chǎn)生

幾乎所有的細(xì)胞都可以產(chǎn)生細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles，EVs)，但是外泌體不同于其他的細(xì)胞外囊泡,其大小在30～150 nm，呈囊泡狀。外泌體的生成是從細(xì)胞的內(nèi)出芽(胞吞)開(kāi)始，然后依次形成早期內(nèi)吞小體(early endosome)、晚期內(nèi)吞小體(late endosome)。伴隨著細(xì)胞的代謝，晚期內(nèi)吞小體的脂膜內(nèi)陷，開(kāi)始有選擇地分揀RNAs、miRNAs、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)等內(nèi)含體[21-22]。目前的研究發(fā)現(xiàn)，外泌體的產(chǎn)生主要有兩種途徑(圖1)：1)晚期內(nèi)吞小體在囊泡分揀蛋白如轉(zhuǎn)運(yùn)必需核內(nèi)復(fù)合物(endosomal complex required for transport，ESCRT)的作用下通過(guò)識(shí)別、分類、挑選內(nèi)含物而生產(chǎn)多囊泡體(multivesicular body)；2)在神經(jīng)酰胺的協(xié)助作用下晚期內(nèi)吞小體生成多囊泡體。有的多囊泡體會(huì)和溶酶體融合，然后被分解，有的和細(xì)胞膜融合，釋放到細(xì)胞外形成外泌體[6, 23-25]。在乳中，外泌體來(lái)源于乳腺上皮細(xì)胞和一些免疫細(xì)胞[26]。日本科學(xué)家Hata等[27]通過(guò)乳脂肪球表皮生長(zhǎng)因子8(milk fat globule epidermal growth factor 8，MFG-E8)確定了乳源外泌體來(lái)源于乳腺上皮細(xì)胞。最近，中國(guó)學(xué)者分離獲得牛乳腺上皮細(xì)胞來(lái)源的外泌體，并利用蛋白組學(xué)技術(shù)結(jié)合現(xiàn)有牛乳源外泌體庫(kù)進(jìn)行了鑒定[28]。

圖1 外泌體的生物合成和釋放[6]

2 乳源外泌體的結(jié)構(gòu)和功能

哺乳動(dòng)物的乳汁是新生動(dòng)物最主要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，乳汁中含有新生動(dòng)物所需的所有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、脂肪、礦物元素、維生素及各種活性成分等，能夠促進(jìn)動(dòng)物個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育和機(jī)體免疫力等功能[29]。有研究發(fā)現(xiàn)，在哺乳動(dòng)物的乳汁中存在外泌體，并已證實(shí)其具有生物活性[6]。乳源外泌體在疾病診斷、治療、預(yù)防以及人和動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育等方面都具有重要的研究?jī)r(jià)值。牛乳是外泌體的重要來(lái)源[30]，牛奶樣品容易獲取，并且不會(huì)對(duì)奶牛產(chǎn)生負(fù)面影響，這為乳源外泌體的研究奠定了基礎(chǔ)。

乳源外泌體和其他來(lái)源外泌體在結(jié)構(gòu)上相似，都具有與細(xì)胞相同的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和脂質(zhì)雙分子層，膜上具有膜蛋白，內(nèi)含物中存在大量的蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)[31-32]。

乳源外泌體中的蛋白質(zhì)大致分為兩類，第一類是膜上的膜蛋白。其膜表面既有與其他源外泌體相同的保守膜蛋白，如CD6、CD81、CD9等[33]，又有與其起源細(xì)胞密切相關(guān)的相對(duì)特異性蛋白，如MFG-E8[27]。目前研究發(fā)現(xiàn)，在外泌體表面還有一類蛋白，其功能是阻止巨噬細(xì)胞識(shí)別和清除外泌體，如跨膜蛋白CD47[34]。第二類是內(nèi)含物蛋白，外泌體內(nèi)部通過(guò)非隨機(jī)、受調(diào)控的方式可以包裹原細(xì)胞的蛋白，如熱休克蛋白和肌動(dòng)蛋白等。目前，國(guó)際上外泌體的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)庫(kù)主要是ExoCarta[35]和Vesiclepedia[36]。根據(jù)ExoCarta統(tǒng)計(jì)，從不同來(lái)源的外泌體中共檢測(cè)發(fā)現(xiàn)了41 860種蛋白[37]。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，人乳外泌體中含1 963種蛋白，牛乳外泌體中含有1 351種[38]，值得注意的是，牛乳中有198種蛋白在人乳中未被檢測(cè)到[39]。上述研究表明，乳源外泌體中存在大量的蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)可能會(huì)發(fā)揮某些生理或病理作用，需要更深入研究。

乳源外泌體中另一類重要組分是核酸，包括DNA、mRNA、miRNA和其他非編碼RNA[40]。由于脂質(zhì)雙分子層的保護(hù)，乳源外泌體中的核酸可以穩(wěn)定存在。目前，乳源外泌體中DNA的功能還不清楚，而大量的研究集中在乳源外泌體RNA的研究上。Izumi等[41]在牛乳乳清外泌體中提取鑒定了大約19 000種mRNA和2 838種miRNAs，約占乳源外泌體總RNA的13%[42]。另有研究顯示[43]，牛乳中大約有400種miRNA的核苷酸序列和人乳外泌體相同，且牛乳來(lái)源的外泌體可以被人體巨噬細(xì)胞吞噬[41，44]，表明牛乳外泌體來(lái)源的miRNA可能會(huì)被人體吸收而發(fā)揮作用。林德麟等[45]統(tǒng)計(jì)分析了不同動(dòng)物乳中miRNAs的含量和種類，發(fā)現(xiàn)miR-148a、let-7家族、miR-182-5p、miR-378、miR-141、miR-30a-5p、miR-27b-3p、miR-146b-5p、miR-26a等能在動(dòng)物乳中高表達(dá)，盡管這些乳源miRNAs的生物學(xué)功能尚未證實(shí)，但Gu等[46]在人、豬和牛乳源外泌體中發(fā)現(xiàn)了包括miR-148a和let-7a等與免疫相關(guān)的miRNA。

關(guān)于乳源外泌體脂質(zhì)類內(nèi)含物的報(bào)道較少。目前有研究對(duì)來(lái)源于早產(chǎn)兒和足月兒健康母親的乳源外泌體進(jìn)行了分離，并通過(guò)LC-MS闡明了其脂質(zhì)表達(dá)譜，共鑒定出395種脂質(zhì)，共15個(gè)脂質(zhì)亞類，包括磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰絲氨酸(PS)和磷脂酰乙醇胺(PE)，通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)其中有50種脂質(zhì)(PC(18:0/18:2)、PC(18:1/16:0)、PS(18:0/18:1)、PS(18:0/22:6)等)通過(guò)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)途徑調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞功能[47]。

3 乳源外泌體的分離鑒定

關(guān)于外泌體的分離依然缺乏公認(rèn)方法。目前常用的分離方法有超速離心法[48]、尺寸排阻法、免疫親和捕獲法、試劑盒法[49]和微流體技術(shù)等[50-52]。這些分離方法得到的外泌體純度和濃度不高[48]，同時(shí)均存在一定的優(yōu)缺點(diǎn)[49]。超速離心法和試劑盒法是外泌體分離提取最常用的方法。超速離心法操作難度低，分離耗時(shí)短[53]，該方法利用乳汁樣品中外泌體、蛋白質(zhì)、脂肪、細(xì)胞和細(xì)胞碎片等物質(zhì)沉降速度的差異, 通過(guò)控制不同的離心力和離心時(shí)間, 將其劃分為上清液和沉淀，然后進(jìn)行分離。試劑盒法又被稱為聚合物沉淀法，其主要是利用聚乙二醇或其類似物將外泌體沉淀，然后使用低速離心分離外泌體，這樣避免了因差速離心耗時(shí)而提高了外泌體的分離效率[54]。范士杰等[48]比較了差速離心法和試劑盒法提取娟珊牛乳外泌體，發(fā)現(xiàn)試劑盒法提取的外泌體數(shù)量多且無(wú)細(xì)胞毒性。一般的單一分離方法并不能準(zhǔn)確獲得單一的外泌體，因此，多技術(shù)聯(lián)合使用，會(huì)更容易得到單一的外泌體。Abramowicz等[50]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，超速離心結(jié)合碘克沙醇密度梯度離心或凝膠過(guò)濾，盡管勞動(dòng)強(qiáng)度大，但可以獲得高質(zhì)量的外泌體。Somiya等[55]將樣品進(jìn)行酸化處理，然后再進(jìn)行超速離心，也獲得了單一的、無(wú)細(xì)胞毒性的外泌體。不同分離方法所得到的乳源外泌體的特征有所不同(表1)。且由于乳汁不同于其他體液，其成分復(fù)雜，含有大量小分子的乳蛋白和乳脂，有些小分子物質(zhì)的大小與外泌體相似，這導(dǎo)致分離獲得的乳源外泌體濃度和純度較低。到目前為止，還沒(méi)有公認(rèn)的可以獲得高純度、濃度和生物活性的分離方法，因此對(duì)于乳源外泌體的分離技術(shù)還有待進(jìn)一步優(yōu)化研究。

表1 不同分離方法獲得的乳源外泌體特性

乳源外泌體的鑒定需要從兩方面進(jìn)行：首先是物理特性的鑒定，利用電子顯微鏡、動(dòng)態(tài)光衍射(dynamic light scattering, DLS)和納米粒子跟蹤分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)技術(shù)，確定乳源外泌體的形態(tài)和大小，確定其基本的囊泡狀結(jié)構(gòu)，這被稱為外泌體檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)[58-59]。在電子顯微鏡下，幾乎所有表征都顯示乳源外泌體呈杯狀結(jié)構(gòu)，大小在30～150 nm之間。DLS是利用分子的布朗運(yùn)動(dòng)捕捉光散射，然后計(jì)算外泌體大小的方法，其對(duì)于單一尺寸的分子檢測(cè)較為準(zhǔn)確。由于外泌體大小不一，導(dǎo)致其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率降低[49]。NTA是一種直接可視化的光學(xué)粒子追蹤技術(shù)，它可以同時(shí)顯示外泌體的濃度和大小。其最小檢測(cè)單位是50 nm的外泌體[60-61]。其次再利用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(Western blot)和酶聯(lián)免疫法通過(guò)外泌體表面特異性標(biāo)志蛋白，如：四跨膜蛋白(CD9，CD63和CD81)、熱休克蛋白HSP70、Alixs等的免疫結(jié)合進(jìn)行鑒定核實(shí)[62]。同時(shí)也可以對(duì)外泌體中的特異性內(nèi)含物進(jìn)行鑒定[63]。此外，還有研究人員通過(guò)對(duì)外泌體膜上表面標(biāo)志物進(jìn)行標(biāo)記，然后利用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)檢測(cè)陽(yáng)性表達(dá)，以此對(duì)外泌體進(jìn)行定性和定量[64]。

4 乳源外泌體的應(yīng)用

4.1 潛在的乳房炎診斷標(biāo)志物

在一些疾病中，乳源外泌體會(huì)隨著疾病的發(fā)生發(fā)展而發(fā)生變化，這為外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物奠定了基礎(chǔ)[65]。在奶牛乳房炎的研究中，研究人員通過(guò)培養(yǎng)牛乳腺上皮細(xì)胞，然后利用熱滅活大腸埃希菌刺激，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳腺上皮細(xì)胞中有1 478條基因發(fā)生差異表達(dá)。GO分類富集分析發(fā)現(xiàn)，其中有21條基因定位于外泌體，這在細(xì)胞層面上證明乳腺炎病原感染可引起宿主細(xì)胞所分泌的外泌體成分發(fā)生改變[66]。Reinhardt等[32]通過(guò)采集健康牛和患乳腺炎牛的乳汁分析乳源外泌體也證實(shí)了這一點(diǎn)。在組學(xué)分析上，有研究者通過(guò)對(duì)健康牛和患乳腺炎牛的乳源外泌體進(jìn)行了全面RNA的分析，檢測(cè)到492個(gè) 已知的和980個(gè)未知的miRNAs，其中健康牛和患乳腺炎牛的乳源外泌體差異表達(dá)的miRNA有18個(gè)，顯著差異表達(dá)的有2個(gè)，分別是miR-223和miR-142-5p，這被視為乳腺炎診斷的潛在候選者[67-68]。張修奇[69]利用差速離心法分離了健康牛和乳房炎牛的乳源外泌體，再次證實(shí)了miR-223和miR-142-5p在乳房炎奶牛乳源外泌體中顯著表達(dá)，然后又補(bǔ)充了miR-146a和miR-29a為牛乳房炎潛在候選者。

4.2 乳源外泌體參與疾病治療

4.2.1 乳源外泌體與藥物 外泌體存在于各種體液中(血液、尿液、乳汁、組織液等)，乳汁中外泌體具有量多、易提取、更易使人接受等優(yōu)點(diǎn)，是配合藥物生產(chǎn)的最佳原料。其次，其天然的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)可以保護(hù)內(nèi)含物免受破壞、傳遞酶類和遺傳物質(zhì)、介導(dǎo)細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)[70]、遞呈抗原和免疫應(yīng)答[71]。在醫(yī)學(xué)載藥領(lǐng)域，目前主要應(yīng)用的載體是脂質(zhì)體和聚合物載體，外泌體和這些載體相比，其具有更強(qiáng)的穩(wěn)定性、生物相容性、靶向性和可改造性，這使得藥物通過(guò)外泌體能夠更加穩(wěn)定和準(zhǔn)確地作用于靶位[72]。外泌體屬于納米級(jí)的脂質(zhì)體，藥物借助外泌體后，可以更好地被吸收。另外，外泌體無(wú)免疫原性，可以透過(guò)血腦屏障，這使得其可以大大提高藥物的血腦屏障透過(guò)率。據(jù)報(bào)道，目前外泌體可以用于遞送：siRNA、miRNA、蛋白質(zhì)、小分子藥物和納米顆粒等，用于治療各種疾病[73]。有研究人員對(duì)牛乳源外泌體分離純化后與紫杉醇共孵育，獲得了粒徑108 nm的乳源外泌體-紫杉醇復(fù)合物，這使藥物的生物利用度顯著提高，同時(shí)降低了用藥劑量和毒性[74]。還有研究通過(guò)將包裹siRNAs的外泌體復(fù)合物用于研究胰腺癌小鼠模型，發(fā)現(xiàn)其可以特異性地靶向抑制癌細(xì)胞[75]。Kim等[76]通過(guò)將姜黃素、RNA結(jié)合蛋白(RBP)和外泌體膜蛋白結(jié)合制成工程化外泌體，然后通過(guò)氣管滴入急性肺損傷模型，發(fā)現(xiàn)結(jié)合外泌體的姜黃素藥物效果顯著好于單獨(dú)使用姜黃素。外泌體作為藥物載體可以極大程度地協(xié)助藥物運(yùn)輸，使其更好地發(fā)揮作用，是藥物運(yùn)輸最佳的載體[77]。但是外泌體載藥也存在一些不足，其載藥效率較低，需低溫保存，并且臨床產(chǎn)量不足，這將是未來(lái)乳源外泌體載藥面臨的最大挑戰(zhàn)。

4.2.2 乳源外泌體與疾病 乳源外泌體還參與一些疾病的發(fā)生發(fā)展。在感染性疾病中，外泌體的大小與某些病毒非常相近，其次，其脂膜上包含有參與細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的膜蛋白，內(nèi)含遺傳物質(zhì)，甚至可以包裹整個(gè)病毒[78]。N?slund等[79]研究人乳源外泌體和血漿外泌體對(duì)I型人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus Type 1, HIV-1)感染的作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)人乳源外泌體可以通過(guò)與HIV-1競(jìng)爭(zhēng)與單核細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞上的受體DC-SIGN結(jié)合而抵抗HIV-1垂直傳播。Yun等[80]通過(guò)使用糖皮質(zhì)激素誘發(fā)了小鼠骨質(zhì)疏松，然后將分離純化后的牛乳源外泌體給小鼠口服，發(fā)現(xiàn)與未經(jīng)外泌體治療的糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松組相比，外泌體喂養(yǎng)小鼠組的骨礦物質(zhì)密度顯著提高。在炎癥性疾病的研究中，研究人員使用膠原蛋白誘導(dǎo)制造了自發(fā)性關(guān)節(jié)炎的小鼠模型，然后給該小鼠模型口服牛乳源外泌體，發(fā)現(xiàn)牛乳外泌體處理使單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)和IL-6的血清水平以及脾細(xì)胞產(chǎn)生的水平下降[63]。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的機(jī)制可能與牛乳源外泌體的內(nèi)含物miR-148a[81]、miR-21[82]以及TGF-β[83]有關(guān)。Gao等[84]通過(guò)LPS致炎大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞(IEC-6)，然后添加牛乳源外泌體和牦牛乳源外泌體，發(fā)現(xiàn)牦牛乳和牛乳外泌體通過(guò)激活 PI3K/AKT/C3 信號(hào)通路，促進(jìn) IEC-6 存活，并且顯示CD46是減輕IEC-6細(xì)胞炎癥的調(diào)節(jié)劑。另外，牛乳源外泌體的內(nèi)含物(miRNA)可能參與疾病的發(fā)生發(fā)展，如前列腺癌、乳腺癌[85]、結(jié)腸癌、肝細(xì)胞癌[86]、鼻咽癌、B淋巴細(xì)胞瘤、肥胖以及II型糖尿病[87](表2)。綜上所述，乳源外泌體主要是通過(guò)其內(nèi)含物蛋白質(zhì)和miRNAs在一些疾病中發(fā)揮作用，但是其內(nèi)含物種類較多，是否是單一內(nèi)含物發(fā)揮作用，還有待進(jìn)一步研究。

表2 乳源外泌體中miRNA相關(guān)的疾病

4.3 疾病預(yù)防

初乳中含有免疫球蛋白，可直接被新生動(dòng)物吸收，提供被動(dòng)免疫獲得抗體，抵抗病原感染。而外泌體作為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的內(nèi)含蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)的細(xì)胞外囊泡，也可以通過(guò)其內(nèi)含物為幼畜的疾病預(yù)防提供幫助。乳源外泌體內(nèi)含與免疫相關(guān)的miRNAs，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在人、豬、牛、山羊和熊貓的乳汁中有相同保守的miRNAs如：let-7a、let-7b、let-7f和miR-148a，可能參與調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫[65]。研究發(fā)現(xiàn)，人乳源外泌體可以抑制白介素-3和干擾素的產(chǎn)生，從而使調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量增加，調(diào)節(jié)新生兒的免疫系統(tǒng)發(fā)育[98]，可預(yù)防新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎(necrotizing enterocolitis,NEC)、支氣管肺發(fā)育不良(broncho-pulmonary dysplasia，BPD)等相關(guān)疾病的發(fā)生，同時(shí)在生命早期，其還具有預(yù)防過(guò)敏的潛力[99]，但作用機(jī)制還不太清楚。Baier等[100]通過(guò)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)26～49歲的3名男性和2名女性給予牛奶飲食，發(fā)現(xiàn)牛乳源外泌體中的miRNA可以補(bǔ)償人內(nèi)源性miRNA。

4.4 乳源外泌體與腸道發(fā)育

在腸道發(fā)育方面，乳源外泌體也具有至關(guān)重要的作用[101-102]。乳源外泌體可以耐受蛋白酶和核糖核酸酶消化，能夠順利通過(guò)消化道并被吸收[103]。有研究顯示，通過(guò)給小鼠口服飼喂豬乳源外泌體，小鼠十二指腸和空腸的絨毛高度、隱窩深度和絨毛高度與隱窩深度之比(villus height/crypt depth，V/C)顯著增加[104]。另有研究通過(guò)低蛋白飲食誘導(dǎo)小鼠形成營(yíng)養(yǎng)不良，然后口服牛乳外泌體，發(fā)現(xiàn)牛乳外泌體組的小鼠腸上皮通透性、屏障功能和腸細(xì)胞增殖較對(duì)照組顯著改善[105]。在人體腸道發(fā)育方面，牛乳源外泌體被證實(shí)可以通過(guò)抑制p53(tumor suppressor gene p53，p53)蛋白表達(dá)，增加 IEC-6 細(xì)胞的存活，以此調(diào)節(jié)腸道的屏障功能[106-107]。人乳源外泌體通過(guò)其內(nèi)含物circRNAs與相關(guān)miRNAs結(jié)合，誘導(dǎo)人結(jié)腸上皮細(xì)胞(FHC)增殖和遷移[108]。Zeng等[109]通過(guò)提取豬乳源外泌體，然后灌服小鼠和仔豬，發(fā)現(xiàn)乳源外泌體通過(guò)其包含物circ-XPO4(circRNA)抑制腸上皮細(xì)胞中miR-221-5p的表達(dá)來(lái)促進(jìn)分泌性免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A，SIgA)的表達(dá)。

乳源外泌體還可以影響腸道微生物，以此調(diào)節(jié)腸道健康[58]。有研究通過(guò)給小鼠飼喂正常牛乳和破壞外泌體結(jié)構(gòu)的牛乳，對(duì)比兩組小鼠腸道微生物的生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)正常牛乳顯著提高了小鼠腸道微生物的豐度[110]。綜上所述，乳源外泌體可以促進(jìn)機(jī)體腸道發(fā)育，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，發(fā)揮類似于益生元的功能，這為乳源外泌體作為一種新型益生元奠定了一定的基礎(chǔ)。

5 小 結(jié)

目前，乳源外泌體的研究主要集中在乳房炎等疾病的診斷檢測(cè)和作為益生元或藥物載體應(yīng)用方面。但是，因規(guī)?；崛〖兓に嚨戎萍s，乳源外泌體的臨床應(yīng)用仍然面臨著很多挑戰(zhàn)，仍有待進(jìn)一步深入研究。