李麗， 劉佳麒， 魏海波， 李芳， 張會辰， 王建

(1.保定市婦幼保健院 病理科， 河北 保定 071000； 2.保定市婦幼保健院 遺傳室， 河北 保定 071000； 3.保定市第二醫(yī)院 病理科， 河北 保定 071000； 4.保定市婦幼保健院 婦產(chǎn)科， 河北 保定 071000)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)屬乳頭瘤空泡病毒，具有多種亞型，根據(jù)對宮頸上皮細(xì)胞侵襲能力不同，將HPV亞型分為低危型HPV(low risk type HPV，LR-HPV)和高危型HPV(high risk type HPV，HR-HPV)[1]。宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，每年新發(fā)病例超過52萬，而HR-HPV持續(xù)感染是誘發(fā)宮頸癌的直接原因[2-3]。不同地區(qū)的女性HPV感染優(yōu)勢亞型存在地域差異性，給宮頸癌防治造成不便[4]。河北省女性HPV感染率約33%、HR-HPV感染率約27%，以高危亞型HPV16、HPV58及HPV52為主，但廊坊、邯鄲、承德等地區(qū)HPV感染率及優(yōu)勢亞型存在差異[5-8]；保定地區(qū)宮頸癌患者HPV感染率約50%，以高危亞型HPV16和低危亞型HPV6為主[9]，但保定地區(qū)普通人群HPV感染情況及其危險因素尚未見文獻(xiàn)報道。HPV主要通過性途徑傳播，育齡期婦女處于性活躍階段[10]，本研究旨在探討保定地區(qū)體檢和臨床就診育齡期婦女HPV感染狀況、亞型分布及相關(guān)影響因素，以期為宮頸癌防治提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019年6月—2020年5月體檢和臨床就診的接受HPV分型檢測的育齡期婦女，要求符合：(1)保定市常住居民；(2)年齡≥18歲；(3)有性生活史；(4)非月經(jīng)期且24 h內(nèi)無性行為；(5)對研究方案知情同意，自愿參加。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其它部位腫瘤患者；(2)合并心、腦、肝、肺、腎等重要臟器疾??；(3)妊娠期或哺乳期；(4)精神疾病或其它原因不能配合者。共納入育齡期女2 938例，年齡20～50歲、平均(35.16±8.42)歲。本研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)[BDFY(K)字2019-018]。

1.2 研究方法

1.2.1標(biāo)本采集 所有育齡期婦女均進(jìn)行宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本采集，要求采集前3 d內(nèi)停止陰道用藥、24 h內(nèi)禁止性生活；取截石位，借助窺陰器使宮頸充分暴露，擦拭掉宮頸口分泌物后，將宮頸刷于宮頸處順時針方向輕輕轉(zhuǎn)動5圈，取出宮頸刷并將采集到的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本置于含有無菌細(xì)胞保存液的取樣管中，-20 ℃保存?zhèn)錂z。

1.2.2HPV分型檢測 所有標(biāo)本均進(jìn)行HPV分型檢測，使用HPV分型檢測(膜雜交法)試劑盒(廣東凱普生物科技股份有限公司)檢測，該試劑盒能夠檢測23種HPV亞型[高危型HPV(high risk type HPV，HR-HPV)亞型為17種，分別是HPV-16、-18、-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-53、-56、-58、-59、-66、-68、-73及-82；低危型HPV(low risk type HPV，LR-HPV)亞型為6種，分別是HPV-6、-11、-42、-43、-81及-83]；取含有宮頸細(xì)胞標(biāo)本的細(xì)胞保存液0.5 mL，12 000 r/min離心10 min，棄上清液，利用基因組提取試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)提取HPV-DNA；取DNA樣本1 μL，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)T100型擴(kuò)增儀(美國Bio-Rad公司)行PCR擴(kuò)增；PCR產(chǎn)物進(jìn)行雜交、洗膜及顯色，然后進(jìn)行結(jié)果判定(根據(jù)膜上有無斑點(diǎn)判斷有無HPV感染，根據(jù)斑點(diǎn)出現(xiàn)的位置判斷其亞型)。

1.2.3液基薄層細(xì)胞學(xué)(thinprep cytologic test，TCT)檢測 所有育齡期婦女中同意行TCT檢測者1 939例，取同意TCT檢測者“1.2.1”項(xiàng)下標(biāo)本，制片后95%酒精固定、染色，CKX41型顯微鏡(日本Olympus公司)下閱片，TCT診斷采用貝塞斯達(dá)診斷系統(tǒng)(the bethesda system，TBS)分級：未見上皮內(nèi)病變或惡性病變(no intraepithelial lesions or malignant lesions，NILM)、宮頸炎癥(cervitis)、非典型鱗狀上皮細(xì)胞增生(atypical squamous cell hyperplasia，ASC)、低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)及高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)。

1.2.4臨床資料收集 收集所有育齡期婦女年齡、初次性生活年齡、生育史、初次妊娠年齡、流產(chǎn)次數(shù)、性伴侶數(shù)、性生活頻率、是否應(yīng)用避孕套避孕、性伴侶是否包皮過長及TCT檢查情況等。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 15.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例數(shù)或率表示，行χ2檢驗(yàn)；以HPV感染作為因變量，分別以初次性生活年齡、生育史、初次妊娠年齡、流產(chǎn)次數(shù)、性伴侶數(shù)量、性生活頻率、是否采用避孕套避孕、性伴侶是否包皮過長作為自變量，采用二元logistic回歸分析法研究HPV感染的危險因素；P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

2 938例育齡期婦女中HPV陽性者817例，陽性率為27.81%，其中單一感染659例(80.66%)、雙重及以上感染158例、占19.34%，其中雙重感染115例、占14.07%，3重感染32例、占3.92%，4重感染8例、占0.98%，5重感染3例、占0.37%。2 938例育齡期婦女中HPV陰性者2 121例，陰性率為72.19%。

2.2 年齡特點(diǎn)

31～40歲組育齡期婦女HPV陽性率高于20～30歲組和41～50歲組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；20～30歲組育齡期婦女HPV陽性率高于41～50歲組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 不同年齡組育齡期婦女的HPV感染情況[n(%)]Tab.1 HPV infection in women of childbearing age at different age groups[n(%)]

2.3 宮頸細(xì)胞病變程度

2 938例育齡期婦女中行TCT檢查者1 939例，其中HPV陽性者404例，陽性率為20.84%(404/1 939)；NILM、Cervitis、ASC、LSIL組育齡期婦女HPV陽性率隨宮頸細(xì)胞病變程度加重而升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表2 宮頸細(xì)胞不同病變程度的育齡期婦女 HPV感染情況[n(%)]Tab.2 HPV infection in women of childbearing age in different cervical cytopathic groups[n(%)]

2.4 HPV陽性被檢者的HPV亞型

817例HPV陽性者中，HR-HPV感染667例(81.64%)，檢出827例次、16種亞型，檢出率位居前3位是HPV-52(20.31%)、HPV-16(11.61%)及HPV-58(11.37%)；LR-HPV感染182例(22.28%)，檢出205例次、6種亞型，檢出率位居前3位是HPV-81(38.55%)、HPV-42(21.95%)、HPV-43(19.02%)檢出率較高。見表3。

2.5 HPV感染的危險因素

通過二元logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，初次性生活年齡<22歲、流產(chǎn)次數(shù)≥1次、性伴侶數(shù)≥3個、性伴侶未采用避孕套避孕及性伴侶包皮過長是育齡期婦女感染HPV的危險因素(OR=3.582、2.604、2.375、4.983、3.507)，生育史、初次妊娠年齡及性生活頻率對育齡期婦女HPV感染沒有影響(P>0.05)。見表4。

表3 HPV陽性育齡期婦女的HPV亞型分析Tab.3 HPV subtypes among HPV+ women of childbearing age

表4 育齡期婦女HPV感染危險因素的二元logistic回歸分析Tab.4 Binary logistic regression analysis of risk factors for HPV infection in women of childbearing age

3 討論

HPV是一種球形雙鏈閉環(huán)小DNA病毒，主要定植于皮膚和黏膜上皮細(xì)胞，LR-HPV能夠誘發(fā)外生殖器尖銳濕疣等良性病變，而HR-HPV則能夠誘發(fā)宮頸癌前病變和癌變[11]。有研究表明，80%以上有性行為的女性有HPV感染的經(jīng)歷，90%以上的感染者可在2年內(nèi)自行清除而不會導(dǎo)致任何器質(zhì)性病變；少數(shù)感染者不能自行清除HPV而持續(xù)感染，導(dǎo)致人體皮膚黏膜鱗狀上皮增殖而逐漸引發(fā)宮頸上皮細(xì)胞瘤變甚至癌變，周期一般5～20年[12-13]。育齡期是女性性活躍期，也是宮頸癌的高發(fā)年齡段[14]，因此應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注育齡期婦女HPV檢測和宮頸癌篩查。

目前，已檢出近200種具有不同致病能力的HPV亞型，其中HR-HPV能夠入侵女性生殖道鱗狀上皮細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞分裂、分化失調(diào)，引發(fā)宮頸癌前病變或?qū)m頸癌[15-16]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，HR-HPV亞型分布具有明顯的地域和人群差異，世界范圍內(nèi)以HPV-16和HPV-18亞型感染率最高[17]。深圳地區(qū)育齡期婦女以HPV-16、HPV-52及HPV-58檢出率較高[18]；惠州地區(qū)育齡期婦女以HPV-52、HPV-16、HPV-58檢出率較高[19]；臺州地區(qū)育齡期婦女以HPV-58、HPV-18及HPV-16檢出率較高[20]；上海寶山區(qū)育齡期婦女則以HPV-52、HPV-58及HPV-16檢出率較高[21]。本研究結(jié)果顯示，保定地區(qū)2 938例育齡期婦女HPV感染率為27.81%，亞型分布以高危型HPV-52、HPV-16及HPV-58檢出率較高，與惠州地區(qū)一致。我國不同地區(qū)HR-HPV亞型檢出率略有不同，但HPV-52、HPV-16及HPV-58亞型感染率較高是一致的。周輝等[22]研究發(fā)現(xiàn)，HPV-16能夠使宮頸癌的發(fā)生率提高到250倍以上，并且HPV-16感染嚴(yán)重影響宮頸癌患者預(yù)后，而HPV-16也是保定地區(qū)育齡期婦女檢出率較高的亞型，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注。

不同年齡段人群HPV感染率存在差異，肖晗等[12]研究顯示，武漢地區(qū)育齡期婦女25歲以下和45歲以上人群HPV感染率較高；呂虹等[23]研究顯示，35歲以下婦女HPV感染率較高，35歲以后隨著年齡增長HPV感染率逐漸降低。本研究顯示，保定地區(qū)育齡期婦女以31～40歲年齡段HPV感染率最高，可能與該年齡段婦女性生活比較活躍并且HPV感染防范意識松懈有關(guān)。因此，保定地區(qū)應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注31～40歲育齡期婦女的HPV檢測和宮頸癌篩查。

TCT檢查是臨床診斷宮頸癌的重要技術(shù)，而HPV檢測更具前瞻性[24]。本研究通過比較分析TCT檢查和HPV檢測結(jié)果表明，宮頸細(xì)胞病變程度越嚴(yán)重則HPV陽性率越高，二者呈一定的線性關(guān)系；二元logistic回歸分析結(jié)果提示，初次性生活年齡<22歲、流產(chǎn)次數(shù)≥1次、性伴侶數(shù)量≥3個、不采用避孕套避孕及性伴侶包皮過長是育齡期婦女HPV感染的危險因素。既往研究表明，我國僅30%女性了解HPV病毒，僅14%女性知曉宮頸癌可通過疫苗預(yù)防，初次性生活普遍低于20歲且防護(hù)意識淡薄，這些都是感染HPV的重要原因[25]。因此，應(yīng)加強(qiáng)HPV病毒和HPV疫苗的相關(guān)知識教育，提高自我防護(hù)意識。

綜上所述，保定地區(qū)育齡期婦女HPV感染以HR-HPV為主，其中HPV-52、HPV-16及HPV-58檢出率較高；31～40歲為高發(fā)年齡段；HPV感染率與宮頸細(xì)胞病變程度呈正相關(guān)；提示初次性生活年齡<22歲、流產(chǎn)次數(shù)≥1次、性伴侶數(shù)量≥3個、不采用避孕套及性伴侶包皮過長為HPV感染的危險因素。本研究結(jié)果可作為育齡期婦女HPV檢測和宮頸癌篩查的參考，但相較于TCT檢查，HPV檢測篩查宮頸癌的敏感度還有待于進(jìn)一步研究論證。