劉凈

摘要：重組抗體藥物是一種新型的生物技術(shù)，它在治療傳染性疾病和腫瘤方面具有重要意義;在器官移植等領(lǐng)域取得了比較明顯的效果，并已成為我國醫(yī)藥行業(yè)的重要組成部分。作為一種成功的生物制劑，其質(zhì)量控制是人們所關(guān)心的問題。本文重點介紹重組抗體藥物各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：重組抗體，藥物，質(zhì)量控制

在重組抗體藥物的生產(chǎn)中，主要是細(xì)胞的培養(yǎng);工程單元的構(gòu)建與擴(kuò)充;抗體的提純，產(chǎn)品的包裝，都是由生產(chǎn)部門負(fù)責(zé)的，這也是為了確保藥品的安全和高效。鑒于許多藥物生產(chǎn)工藝大同小異，因此本文著重從細(xì)胞、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、質(zhì)量控制等幾個方面進(jìn)行了探討。

1 生產(chǎn)細(xì)胞方面的質(zhì)量控制

1.1 建構(gòu)工作細(xì)胞和細(xì)胞庫

在相關(guān)資料的基礎(chǔ)上，建立工作細(xì)胞，并確定構(gòu)建的步驟和方法;另外，還要說明所需的培養(yǎng)條件、生產(chǎn)特點、匹配培養(yǎng)液的成分、所引入的目標(biāo)基因的表達(dá)等。通過細(xì)胞庫的建立，可以為重組抗體藥物提供質(zhì)量穩(wěn)定、充足的細(xì)胞種子，確保其生產(chǎn)的一致性。細(xì)胞庫的管理與建立檔案相結(jié)合，每一個細(xì)胞都有自己的標(biāo)簽，例如名稱、批號、代次、保存日期等。

1.2 細(xì)胞檢定

1.2.1 鑒別細(xì)胞

目前有多種鑒定細(xì)胞的方法，如生物化學(xué)法、遺傳學(xué)檢測法，免疫檢測法等，也可以結(jié)合上述方法一起使用。利用 PCR、 Southern雜交和限制性內(nèi)切酶技術(shù)，結(jié)合細(xì)胞庫，可以對最終細(xì)胞進(jìn)行完整的鑒定。

1.2.2 檢測病原微生物

主要檢測目標(biāo)為支原體，細(xì)菌;細(xì)胞內(nèi)外的病毒，其檢測方法取決于細(xì)胞的性質(zhì)和類型。通常通過觀察其形態(tài)、紅細(xì)胞吸附實驗、雞胚法、細(xì)胞傳代培養(yǎng)等來檢測病毒。目前，我們正在研制的重組抗體藥物，還需要在這一基礎(chǔ)上，對細(xì)胞的采集和分離產(chǎn)物進(jìn)行外源性因素的檢測。

1.2.3 檢查致瘤性

CHO等重組抗體的細(xì)胞系被檢測出具有致瘤性，通常不需要重復(fù)檢測，但也有專家認(rèn)為，插入抗體等重組工程細(xì)胞是一種全新的細(xì)胞，有必要進(jìn)行這項檢查，并與傳代試驗進(jìn)行比較，以確定腫瘤的致癌性是否發(fā)生了變化。

2 質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是一種相對穩(wěn)定、單一的物質(zhì)，是質(zhì)量管理的一個重要環(huán)節(jié)，而其主要作用是由其分子的分子結(jié)構(gòu)決定的，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由兩個方面組成，一是活性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，二是理化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

2.1 理化對照品

它的結(jié)構(gòu)是否合理，直接關(guān)系到其作用，而理化對照品是整個抗體質(zhì)量控制的基礎(chǔ)和先決條件，它可以簡化傳統(tǒng)的質(zhì)量控制方法，而無需使用大量的儀器，只需對其進(jìn)行分析、比較，就可以發(fā)現(xiàn)其成分是否有異常。

2.2 活性標(biāo)準(zhǔn)品

生物學(xué)活性測定標(biāo)準(zhǔn)品，要求性質(zhì)穩(wěn)定，材料均勻，賦值準(zhǔn)確。通常，這種標(biāo)準(zhǔn)物在配制時，需要某些輔助材料，例如穩(wěn)定劑或賦形劑，因此，可以增加其活性組分的分裝量，以減少輔料對產(chǎn)品質(zhì)量控制的影響，然后再進(jìn)行梯度稀釋。盡管許多抗體通過使用活性標(biāo)準(zhǔn)品 EC來檢測其生物活性。相對活性值，通過與試驗樣品的比較來測定，也就是說，在貯存期間，如果這兩種藥物的生物活性逐漸降低或者保持一致，則其相對生物活性無法準(zhǔn)確反映藥物的作用。

3 重組抗體產(chǎn)品的質(zhì)量控制

3.1 理化分析

3.1.1 結(jié)構(gòu)明確

目前常用的檢測抗體的方法主要有肽圖、 N端氨基酸序列、糖基化分析等，并將其與物理化學(xué)比較相結(jié)合，故要對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。傳統(tǒng)的N-端氨基酸序列是用來作為物理化學(xué)的參照物，而在使用肽譜分析時，會因為自身的特性而影響酶解的效果，所以必須在酶解前將抗體轉(zhuǎn)化，然后再用還原劑進(jìn)行還原，從而得到完整的試樣和物理化學(xué)控制品的酶解。為了防止受到糖鏈的影響，必須在酶分解之前把它切掉。糖基化分析是將抗體藥物的性質(zhì)與對照品相結(jié)合，通過測定唾液中的酸和低聚糖圖譜，從而實現(xiàn)判斷和質(zhì)量控制。上述方法可以保證每批抗體藥品的生產(chǎn)過程的一致性和穩(wěn)定性。

3.1.2 純度分析

通常情況下，為了避免誤差，通常會采用兩種或多種不同的方法來進(jìn)行測試，從而得到比較精確的分析結(jié)果。用SDS-PAGE法測定其純度，毛細(xì)管電泳法，HPLC等，前兩種方法都是以輕、重鏈帶的含量之和為95%為標(biāo)準(zhǔn)，而采用液相色譜法時，要選擇適當(dāng)?shù)牧鲃酉嗪椭樱谶M(jìn)行分析前，必須設(shè)置無雜峰的空白對照，這樣才能得到峰面積大于95%的面積。

3.1.3 測定蛋白含量

目前常用的檢測抗體蛋白的方法是利用光譜法，利用相關(guān)原理來確定消光系數(shù)，并對其進(jìn)行修正，計算出相應(yīng)的蛋白的消光系數(shù)。在國外，許多生物工程技術(shù)都是通過測定具有相同結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)物的蛋白質(zhì)含量，但沒有一個確切的數(shù)據(jù)來源。若要追溯，可用氨基酸成分分析。

3.2生物學(xué)活性的測定

3.2.1 補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒法

其作用是將表面的抗原與抗體結(jié)合，從而形成復(fù)合體，從而改變抗體的整體結(jié)構(gòu)，從而使 Fc位置的補(bǔ)體結(jié)合點暴露;下一步是培育補(bǔ)體，激活它的串聯(lián)，完成攻膜復(fù)合體的組裝，并在細(xì)胞表面穿孔，最終使細(xì)胞溶解。通過對抗體的溶解程度進(jìn)行細(xì)胞的吸收，得到了相應(yīng)的反應(yīng)曲線，并將其與對照品進(jìn)行比較，從而計算并評估其相對活力。

3.2.2 基因報告法

這實際上是一種評估信號途徑的一種評估手段。通常情況下，由于獲得細(xì)胞株的困難，或者是對加價法的品質(zhì)曲線信號的干擾較弱，可以通過對這條途徑的了解，將目標(biāo)反應(yīng)單元（攜帶抗體）和報告基因的質(zhì)粒穩(wěn)定地將轉(zhuǎn)染到細(xì)胞上，然后利用對應(yīng)的靶點和抗體的相關(guān)效應(yīng)，啟動報告基因法，對重組抗體的生物活性進(jìn)行檢測。

3.3 殘留雜質(zhì)

按照有關(guān)的重組抗體藥物的生產(chǎn)過程，其雜質(zhì)的控制主要集中在殘留的宿主細(xì)胞蛋白、DNA和蛋白質(zhì) A等雜質(zhì)中，對雜質(zhì)的檢測主要采用夾心ELISA法。從理論上講，DNA在遺傳過程中會有一定的致癌風(fēng)險，F(xiàn)DA規(guī)定，殘留 DNA不能超過100 pg，而現(xiàn)在的殘留 DNA檢測主要有定量 PCR、熒光染色、雜交等，雜交技術(shù)使用非放射性物質(zhì)作為核酸探針的標(biāo)記，但由于要同時進(jìn)行蛋白酶的消化，所以準(zhǔn)確率會下降。而熒光染色則是使用復(fù)合物的熒光染料，通過熒光酶標(biāo)儀對其進(jìn)行測定，并記錄其強(qiáng)度，從而得出殘留 DNA。此方法較為簡便，但因 DNA殘留質(zhì)量控制的要求較高，且檢測能力較弱，故不適合。

3.4 成品控制

對產(chǎn)品質(zhì)量控制，既要檢驗其含量，又要有生物活性;理化性質(zhì)：外觀、分裝量、鑒別試驗、 PH值、毒素檢查等，可參照《中華人民共和國藥典》等文件。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫昱，鄭蕊，文海若.單一成分藥物有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制研究要點[J].藥物評價研究，2021，44（05）：924-930.

[2]張世雄.重組抗體藥物研究進(jìn)展[J].化工管理，2017（29）：136.