孟苓鳳 李海靜 曲洪磊 周廣運 趙海晴 張新浩

（1，國家膠類中藥工程技術研究中心 252201；2，東阿阿膠股份有限公司 252201）

隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高，越來越多的人開始重視營養(yǎng)價值高并對人體無害的天然食品。驢乳作為一種天然的新食品資源，已逐漸成為研究開發(fā)的熱點。研究表明，驢乳中富含許多免疫活性物質，可作為一種免疫促進劑，增強人體免疫功能、延緩衰老[1-4]。馬龍等[5]研究了生鮮驢乳對小鼠免疫功能的影響。他們用不同劑量鮮驢乳對免疫力低下小鼠灌胃20d。結果表明，鮮驢乳高劑量組（20mL/（kg·d））可增加小鼠血清溶血素質量濃度，并可提高小鼠脾細胞抗體分泌細胞功能，從而證明鮮驢乳對免疫力低下小鼠免疫功能有一定增強作用。王紅娟等[6]研究了不同劑量驢乳凍干粉對免疫力低下小鼠的影響。結果表明，驢乳粉能有效提高免疫力低下小鼠的免疫力，增高血清中免疫球蛋白G（IgG）的質量濃度，部分免疫指標可基本達到正常水平。本研究旨在通過研究德州凍干驢乳粉對免疫抑制小鼠死亡保護率、血清炎癥因子含量、肺炎鼠肺組織的影響，探討其防治病的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

德州凍干驢乳粉：東阿阿膠股份有限公司提供。

實驗動物：SPF 級BALB/c 雄性小鼠80 只，體重（20±2）g，購自北京維通利華。

環(huán)磷酰胺：購自美國Sigma 公司。

1.2 方法

1.2.1 造模方法

取健康雄性SPF 級BALB/c 小鼠76 只，適應環(huán)境1 周，隨機分為對照組、生理鹽水組、驢乳粉低劑量組、驢乳粉中劑量組、驢乳粉高劑量組，除高劑量組16 只以外其余各組每組15只，各組小鼠實驗期間自由攝取常規(guī)飼料、自由飲水。除對照組外，其他各組腹腔注射環(huán)磷酰胺50mg/kg，每天1 次，連續(xù)注射3d，造成免疫低下模型，正常對照組腹腔注射等體積的生理鹽水溶液，造模成功后飼養(yǎng)于普通環(huán)境的動物房。

1.2.2 干預方法

造模后，對驢乳粉低、中、高劑量3 組小鼠分別按照0.6、3、15g/kg BW 的劑量灌胃，生理鹽水組和對照組灌胃等體積的生理鹽水，每天1 次。

1.2.3 觀測指標

逐日觀察動物身體狀況，記錄死亡時間，死亡數(shù)，共觀察17d。于第17 天處死小鼠，取血測定小鼠血清炎癥因子。將右肺放入4%的多聚甲醛中固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE 染色，光鏡下觀察肺組織病理改變。光學顯微鏡下觀察小鼠肺組織的病變程度并評分，同時計算小鼠肺指數(shù)，計算公式如下。

肺指數(shù)=肺濕重/體重

肺指數(shù)抑制率/%=(生理鹽水組肺重-驢乳粉組肺重)/(生理鹽水組肺重-正常對照組肺重) ×100

死亡率%=死亡數(shù)/動物總數(shù)×100

死亡保護率/%=生理鹽水組死亡率-驢乳粉組死亡率/生理鹽水組死亡率×100

生命延長率/%=驢乳粉組存活天數(shù)-生理鹽水組存活天數(shù)/生理鹽水組存活天數(shù)×100

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)應用SPSS16.0 統(tǒng)計軟件處理，數(shù)據(jù)采用“平均數(shù)±標準差”表示，組間采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 小鼠生存分析

在試驗過程中，除對照組外，剩余4 組小鼠均有死亡。生理鹽水組動物死亡率80%，平均存活天數(shù)為12.50d；驢乳粉低中高劑量組的死亡率分別為60%、53.33%和50%，平均存活天數(shù)為13.00、14.50、14.25d，生理鹽水組與驢乳粉低劑量組之間無顯著差異（＞0.05），驢乳粉低、中、高劑量3 組老鼠的死亡率無顯著差異（＞0.05），但驢乳粉中、高劑量組與生理鹽水組有顯著差異（＜0.05），說明驢乳粉濃度在中劑量和高劑量時能提高病鼠的平均存活天數(shù)，見圖1、表1。

表1 驢乳粉對免疫抑制小鼠的存活影響

圖1 各組小鼠生存率

2.2 肺指數(shù)

由表2 可知，采用病毒感染免疫低下小鼠后，小鼠肺指數(shù)明顯增高，驢乳粉高、中、低劑量組均可顯著降低肺指數(shù)，與生理鹽水組比較有顯著差異（＜0.05），驢乳粉高、中、低與對照組相比均無顯著差異(＞0.05)，說明驢乳粉能有效降低存活小鼠的肺指數(shù)。

表2 驢乳粉對免疫抑制小鼠肺指數(shù)的影響

2.3 血清中炎癥因子和C 反應蛋白水平

由表3 可知，與生理鹽水組比較，驢乳粉低、中、高劑量組小鼠血清的TNF-α 和CRP 含量明顯降低，具有顯著性差異驢乳粉低、中、高劑量組3 者之間沒有顯著性差異表明驢乳粉顯著減低了小鼠機體的炎癥水平。

表3 驢乳粉對免疫抑制小鼠血清炎性因子和C 反應蛋白水平的影響

2.4 肺組織病理學變化

對各組小鼠肺組織進行HE 染色，可見生理鹽水組小鼠肺組織大量炎性滲出，水腫、充血。肺間質肺泡腔可見大量的中性粒細胞，巨噬細胞浸潤，肺泡毛細血管擴張、充血，肺泡滲出、水腫，肺間質增厚。正常組肺泡間隔均一，肺泡腔未見滲出液及炎性細胞浸潤。驢乳粉低劑量組與生理鹽水組相比沒有明顯區(qū)別。驢乳粉中高劑量組肺泡腔的塌陷減少，肺間隔的水腫明顯減輕，炎性細胞及炎性介質浸潤減少，肺泡毛細血管內皮細胞充血明顯改善。表明驢乳粉能改善肺損傷程度，對小鼠的肺有保護作用。

運用Smith 評分法對出血、水腫、滲出、壞死、充血、嗜中性粒細胞浸潤和肺不張形成3 個指標分別進行0～4 分半定量分析：無損傷為0 分；病變程度低于25%為1 分；病變25%～50%為2 分；病變50%～75%為3 分；全病變?yōu)? 分。4 項指標合計得分為總肺損傷評分。評分結果如圖3 所示，驢乳粉中、高劑量組小鼠評分顯著低于生理鹽水組而驢乳粉低劑量組與生理鹽水組沒有顯著性差異說明驢乳粉能降低小鼠肺損傷評分，但要達到一定劑量才會起作用，這為驢奶粉行業(yè)發(fā)展提供一定的研究基礎，具體作用機理還需進一步研究。

圖2 各組小鼠肺組織病理切片（×40）

圖3 各組小鼠肺組織病理評分（×40，圖中不同字母表示組別間有顯著性差異）

3 結論

本試驗評價了德州驢凍干驢乳粉對免疫抑制小鼠抗感染的作用，結果表明，德州驢凍干驢乳粉在0.6、3、15g/kg BW 劑量下均可降低免疫抑制小鼠的感染率，降低血清炎癥因子，緩解肺損傷程度，降低小鼠死亡率，延長平均生存天數(shù)，證實了驢乳粉具有提高抵抗力的作用。