曾繁晟 劉蘭蘭 楊晶珍

1.江西省贛州市婦幼保健院病理科，江西贛州 341000；2.江西省贛州市婦幼保健院婦科，江西贛州 341000

子宮內(nèi)膜癌是女性常見的惡性腫瘤疾病，與其他女性相比，圍絕經(jīng)期、絕經(jīng)后的女性更易患此病，平均發(fā)病年齡在59 歲， 近幾年發(fā)病率逐年上升且趨于年輕化發(fā)展[1]。臨床將子宮內(nèi)膜癌分為Ⅰ型癌（子宮內(nèi)膜樣癌、黏液癌）和Ⅱ型癌（漿液性癌、透明細(xì)胞癌等），其中子宮內(nèi)膜樣癌的發(fā)生與雌激素持續(xù)刺激密切相關(guān)[2-3]。 患者往往存在陰道異常流血、下腹部隱痛以及貧血、發(fā)熱等癥狀，影響患者正常生活和身心健康。為更好地控制病情發(fā)展， 需積極探索該疾病的致病基因， 有利于早期診斷和預(yù)后。 蛋白基因產(chǎn)物9.5（protein gene product 9.5，PGP 9.5）在多種惡性腫瘤疾病中的表達(dá)水平較高，而抑制其表達(dá)可有效抑制其病情發(fā)展[4]。 目前關(guān)于PGP 9.5 表達(dá)在子宮內(nèi)膜樣癌發(fā)病和發(fā)展相關(guān)的研究較少。 本研究探究PGP 9.5 在子宮內(nèi)膜樣癌組織中的表達(dá)水平并分析其與各臨床病理學(xué)特征的關(guān)系以及作用機(jī)制，以便為子宮內(nèi)膜樣癌的臨床治療提供新思路。

1 資料及方法

1.1 臨床資料

選取2017年1月至2020年12月贛州市婦幼保健院收治的91 例子宮內(nèi)膜樣癌患者以及20 例健康者作為研究對象。 患者年齡43～73 歲，平均（53.48±10.58）歲。 根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Federation Interna tional of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）制定的關(guān)于子宮內(nèi)膜癌分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行癌癥分期[5]，其中Ⅰ～Ⅱ期患者82 例，Ⅲ期患者9 例，無Ⅳ期患者。 所有患者均接受全子宮（廣泛全子宮）+雙側(cè)附件切除術(shù)和（或）盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)，晚期患者手術(shù)治療的同時同步進(jìn)行化療和放療。 本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＞18 歲；②所有患者均經(jīng)病理診斷證實(shí)；③個人信息以及臨床記錄完整；④患者及其家屬均知情同意。 排除標(biāo)準(zhǔn)：①研究期間接受化療或者放療；②合并其他惡性腫瘤疾病；③合并阿爾茨海默病等精神疾?。虎芤缽男圆?。

1.2 方法

試劑選擇。 選擇中杉金橋公司提供PGP 9.5 抗體（生產(chǎn)批號20200809），以平滑肌作為陰性對照，以結(jié)腸神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞作為陽性對照。

免疫組化實(shí)驗(yàn)。將子宮內(nèi)膜樣癌組織標(biāo)本和正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本處理切片，厚度為4 μm，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化染色。將染色切片放在光鏡下隨機(jī)觀察3 個視野拍照并保存， 以陽性細(xì)胞百分率以及染色強(qiáng)度對免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析[6]。 由工作5年以上的病理診斷醫(yī)師判讀。PGP 9.5 染色的陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)是胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒， 聯(lián)合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比進(jìn)行綜合分級，按染色強(qiáng)度評分[7]：無著色為陰性表達(dá)評0 分，淡黃色為弱陽性表達(dá)評1 分，棕黃色為中陽性表達(dá)評2分，褐棕色為強(qiáng)陽性表達(dá)評3 分；按陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比評分[8]：無陽性細(xì)胞評0 分，陽性細(xì)胞數(shù)0～25%評1 分， 陽性細(xì)胞數(shù)＞25%～50%評2 分，陽性細(xì)胞數(shù)＞50%～75%評3 分，陽性細(xì)胞數(shù)＞75%評4分。兩者相加得分，從0～7 分共分8 個級別。 若評分＜4 分則為高表達(dá)組，評分≥4 分則為低表達(dá)組。 評分＞1 分則鑒定為陽性（圖1～2，封三）。

圖1 PGP 9.5 高表達(dá)（免疫組化染色，×40）

圖2 PGP 9.5 低表達(dá)（免疫組化染色，×40）

1.3 觀察指標(biāo)

子宮內(nèi)膜癌與正常組織PGP 9.5 表達(dá)水平、臨床病理特征與PGP 9.5 表達(dá)的關(guān)系。 ①記錄子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的PGP 9.5 表達(dá)情況。 陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%。 ②根據(jù)PGP 9.5 染色后評分， 將子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，觀察患者年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)分級、肌層浸潤、宮頸管累及、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管累及、附件累及、FIGO分期等臨床病理特征與PGP 9.5 表達(dá)水平的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析， 計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；等級資料的比較采用秩和檢驗(yàn)， 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜樣癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的PGP 9.5 表達(dá)情況

免疫組化結(jié)果顯示， 正常子宮內(nèi)膜組織檢測出3例弱陰性，子宮內(nèi)膜癌組織檢測出38 例陰性，正常子宮內(nèi)膜組織中PGP 9.5 的陽性表達(dá)率明顯低于子宮內(nèi)膜癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中的PGP 9.5 表達(dá)情況

2.2 子宮內(nèi)膜樣癌組織PGP 9.5 不同表達(dá)水平患者的病理學(xué)特征結(jié)果比較

根據(jù)PGP 9.5 染色后評分，PGP 9.5 高表達(dá)組13例，低表達(dá)組78 例。兩組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），兩組患者腫瘤直徑、組織學(xué)分級、肌層浸潤、宮頸管累及、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管累及、附件累及、FIGO 分期比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

子宮內(nèi)膜樣癌是女性常見腫瘤疾病之一，年齡、絕經(jīng)時間、月經(jīng)初潮時間以及雌激素水平均是引起子宮內(nèi)膜樣癌的危險因素， 且隨著人們生活水平的提高，該疾病發(fā)生率也越來越高[9-10]。 患病早期主要通過手術(shù)治療， 但發(fā)展至中晚期時手術(shù)治療并不理想，需輔以化療和放療， 但部分患者可能產(chǎn)生化療耐藥，導(dǎo)致治療效果不理想[11]。 因此需尋求全新的治療手段。子宮內(nèi)膜癌遺傳基因改變、 生物學(xué)行為病理價值、尋求生物治療新途徑以及預(yù)防該疾病轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的新方法，均已經(jīng)成為提高子宮內(nèi)膜樣癌患者生存率的重要內(nèi)容[12]。

PGP 9.5 廣泛存在于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞以及神經(jīng)元中，由2450 個堿基組成，含有200 多個氨基酸蛋白基因產(chǎn)物。 有研究顯示PGP 9.5 為抑癌基因，但在甲基化的作用下，此基因會過度表達(dá)，以至于其抑癌基因功能失效，并且會促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白泛素化，導(dǎo)致未分化的細(xì)胞不受限制的無序繁殖[13-14]。 研究顯示，PGP 9.5 表達(dá)并不依賴于神經(jīng)分化而處于獨(dú)立存在狀態(tài)， 其表達(dá)與腫瘤疾病病理分期以及手術(shù)聯(lián)系緊密，例如肺癌、甲狀腺癌、結(jié)直腸癌以及膽囊癌等[15-16]。 另外相關(guān)研究表明，宮頸癌、非小細(xì)胞性肺癌的發(fā)生以及發(fā)展與PGP 9.5 表達(dá)關(guān)系緊密[17-18]。 本研究結(jié)果顯示，正常子宮內(nèi)膜組織中PGP 9.5 的陽性表達(dá)率明顯低于子宮內(nèi)膜樣癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。說明由正常細(xì)胞組織到病變組織，PGP 9.5 表達(dá)水平會發(fā)生明顯改變。

表2 子宮內(nèi)膜癌組織PGP 9.5 不同表達(dá)水平患者的病理學(xué)特征結(jié)果比較[n（%）]

本研究結(jié)果顯示，兩組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），兩組患者腫瘤直徑、組織學(xué)分級、肌層浸潤、宮頸管累及、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管累及、附件累及、FIGO 分期比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），腫瘤直徑越大、組織學(xué)分級越高、肌層浸潤程度越深、宮頸管間質(zhì)累及、淋巴結(jié)存在轉(zhuǎn)移、脈管有累及、附件累及以及FIGO 分期越高，則PGP 9.5 表達(dá)水平越高。說明PGP 9.5 表達(dá)上調(diào)會影響疾病發(fā)生和發(fā)展，可對其預(yù)后情況進(jìn)行預(yù)測。由于子宮內(nèi)膜樣癌的組織學(xué)類型復(fù)雜，相同形態(tài)內(nèi)膜癌中可能伴有多種成分，例如小細(xì)胞癌、鱗癌、乳頭狀癌等，因此跟組織分型無關(guān)。據(jù)此猜測PGP 9.5 可能參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，且作用較大。 因此可將其作為判斷腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移以及病情進(jìn)展的重要指標(biāo)[19]。 鄧穎輝等[20]對宮頸癌患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，PGP 9.5 在此類疾病患者中的表達(dá)水平與其預(yù)后有密切聯(lián)系。 說明PGP 9.5 可作為預(yù)測子宮內(nèi)膜樣癌發(fā)展的一種監(jiān)測工具，也是判斷預(yù)后情況的重要手段。PGP 9.5 在癌細(xì)胞中惡性轉(zhuǎn)化、異常增殖以及穿透基底膜而發(fā)生轉(zhuǎn)移的過程中其發(fā)生機(jī)制尚未明確，可進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

綜上所述，PGP 9.5 在子宮內(nèi)膜樣癌組織、 正常組織中的表達(dá)水平存在差異， 說明該蛋白基因產(chǎn)物在子宮內(nèi)膜組織由正常轉(zhuǎn)變?yōu)樽訉m內(nèi)膜樣癌的過程中具有重要調(diào)控作用。 PGP 9.5 表達(dá)水平越高，腫瘤FIGO 分期越高，患者預(yù)后生存較低，因此可將其作為子宮內(nèi)膜樣癌預(yù)后的有效預(yù)測指標(biāo)， 為臨床治療子宮內(nèi)膜樣癌提供新思路、新方法，可創(chuàng)造一定的社會效益。